Текст очень длинный, поэтому разбит на части. Часть 2 из 13.
Âî âñå ìåðíûå êîë- áû êðîìå îäíîé ïðèáàâëÿþò ïðîïîðöèîíàëüíî óâåëè÷èâàþùèåñÿ îáúåìû ðàñòâîðà ñðàâíåíèÿ ñ èçâåñòíîé êîíöåíòðàöèåé îïðåäåëÿåìîãî ýëå- ìåíòà, ïîëó÷àÿ ñåðèþ ðàñòâîðîâ, ñîäåðæàùèõ óñòîé÷èâî âîçðàñòàþùèå êîíöåíòðàöèè ýëåìåí- òà, çíà÷åíèÿ ýìèññèè êîòîðîãî, åñëè ýòî âîç- ìîæíî, íàõîäÿòñÿ â ëèíåéíîé îáëàñòè êàëèáðî- âî÷íîãî ãðàôèêà. Äîâîäÿò ñîäåðæèìîå êàæäîé êîëáû ðàñòâîðèòåëåì äî ìåòêè. Ââîäÿò ðàñòâîðû, èñïîëüçóÿ îäèíàêîâîå êî- ëè÷åñòâî ïîâòîðîâ äëÿ ïîëó÷åíèÿ óñòîé÷èâûõ ðåçóëüòàòîâ. Ðàñ÷åò. Ìåòîäîì íàèìåíüøèõ êâàäðàòîâ ðàññ÷èòûâàþò ëèíåéíîå óðàâíåíèå ãðàôèêà è ïî íåìó – êîíöåíòðàöèþ îïðåäåëÿåìîãî ýëå- ìåíòà â èñïûòóåìîì ðàñòâîðå. ÂÀËÈÄÀÖÈß ÌÅÒÎÄÈÊÈ ×åðåç îïðåäåëåííûå âðåìåííûå èíòåðâàëû âåðèôèöèðóþò óäîâëåòâîðèòåëüíîå èñïîëíåíèå ìåòîäèêè, îïèñàííîé â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. ËÈÍÅÉÍÎÑÒÜ Ãîòîâÿò è àíàëèçèðóþò íå ìåíåå ÷åòûðåõ ðàñòâîðîâ ñðàâíåíèÿ, êîíöåíòðàöèÿ êîòîðûõ íà- õîäèòñÿ â ïðåäåëàõ äèàïàçîíà êàëèáðîâêè, è êîíòðîëüíûé ðàñòâîð. Ïðîâîäÿò íå ìåíåå ïÿòè èçìåðåíèé. Èñïîëüçóÿ âñå ïîëó÷åííûå äàííûå, ðàññ÷è- òûâàþò êàëèáðîâî÷íóþ êðèâóþ ìåòîäîì íàè- ìåíüøèõ êâàäðàòîâ. Ñòðîÿò êðèâóþ ðåãðåññèè, îòìå÷àÿ ñðåäíèå çíà÷åíèÿ, èçìåðåííûå çíà÷å- 51 íèÿ è äîâåðèòåëüíûé èíòåðâàë êàëèáðîâî÷íîãî ãðàôèêà. Ìåòîä ÿâëÿåòñÿ ïðèãîäíûì ïðè óñëî- âèè ñîáëþäåíèÿ ñëåäóþùèõ òðåáîâàíèé: – êîýôôèöèåíò êîððåëÿöèè äîëæåí áûòü íå ìåíåå 0,99; – íà êàëèáðîâî÷íîì ãðàôèêå ïîãðåøíîñòè êàæäîãî êàëèáðîâî÷íîãî óðîâíÿ äîëæíû áûòü ðàñïðåäåëåíû ñëó÷àéíûì îáðàçîì. Ðàññ÷èòûâàþò ñðåäíåå çíà÷åíèå è îòíîñè- òåëüíîå ñòàíäàðòíîå îòêëîíåíèå äëÿ íàèìåíü- øåãî è íàèáîëüøåãî êàëèáðîâî÷íîãî óðîâíÿ.  ñëó÷àå åñëè îòíîøåíèå ðàññ÷èòàííîãî ñòàíäàðòíîãî îòêëîíåíèÿ íàèìåíüøåãî è íàè- áîëüøåãî êàëèáðîâî÷íîãî óðîâíÿ ìåíåå 0,5 èëè áîëåå 2,0, òî áîëåå òî÷íàÿ îöåíêà êàëèáðîâî÷- íîãî ãðàôèêà ìîæåò áûòü ïîëó÷åíà ñ èñïîëüçî- âàíèåì âçâåøåííîé ëèíåéíîé ðåãðåññèè. Ëè- íåéíàÿ è êâàäðàòè÷íàÿ âåñîâàÿ ôóíêöèè ïðèìå- íÿþòñÿ ê ïîëó÷åííûì äàííûì äëÿ íàõîæäåíèÿ íàèáîëåå ïîäõîäÿùåé äëÿ èñïîëüçîâàíèÿ âåñî- âîé ôóíêöèè. Åñëè ñðåäíèå çíà÷åíèÿ ïðè ñðàâ- íåíèè ñ êàëèáðîâî÷íûì ãðàôèêîì ïðîÿâëÿþò îòêëîíåíèå îò ëèíåéíîñòè, èñïîëüçóþò äâóõ- ìåðíóþ ëèíåéíóþ ðåãðåññèþ. ÏÐÀÂÈËÜÍÎÑÒÜ Ïðåäïî÷òèòåëüíî âåðèôèöèðîâàòü ïðàâèëü- íîñòü ñ èñïîëüçîâàíèåì ñåðòèôèöèðîâàííûõ ñòàíäàðòíûõ îáðàçöîâ. Åñëè ýòî íåâîçìîæíî, ïðîâåðÿþò îòêðûâàåìîñòü. Îòêðûâàåìîñòü.  ñëó÷àå ìåòîäèê êîëè÷å- ñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ îòêðûâàåìîñòü äîëæíà áûòü îò 90 % äî 110 %. Äëÿ äðóãèõ îïðåäåëå- íèé, íàïðèìåð äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñëåäîâûõ êîëè- ÷åñòâ ýëåìåíòà, îòêðûâàåìîñòü äîëæíà áûòü îò 80 % äî 120 % îò òåîðåòè÷åñêîãî çíà÷åíèÿ. Îò- êðûâàåìîñòü ìîæåò áûòü îïðåäåëåíà ñ èñïîëü- çîâàíèåì ïîäõîäÿùåãî ðàñòâîðà ñðàâíåíèÿ (ìàòðèêñíîãî ðàñòâîðà), ñîäåðæàùåãî èçâåñò- íîå êîëè÷åñòâî îïðåäåëÿåìîãî ýëåìåíòà (ñðåä- íÿÿ êîíöåíòðàöèÿ êàëèáðîâî÷íîãî ãðàôèêà). ÏÎÂÒÎÐßÅÌÎÑÒÜ Ïîâòîðÿåìîñòü äîëæíà áûòü íå áîëåå 3 % äëÿ êîëè÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ è íå áîëåå 5 % äëÿ èñïûòàíèÿ íà ñîäåðæàíèå ïðèìåñåé. ÏÐÅÄÅË ÊÎËÈ×ÅÑÒÂÅÍÍÎÃÎ ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈß Óäîñòîâåðÿþòñÿ, ÷òî ïðåäåë êîëè÷åñòâåííî- ãî îïðåäåëåíèÿ (íàïðèìåð, îïðåäåëåííûé ñ èñ- ïîëüçîâàíèåì ïðèáëèæåíèÿ 10ó) íèæå èçìåðÿå- ìîãî çíà÷åíèÿ. 201020022-2019 2.1.2.22. Àòîìíî-àáñîðáöèîííàÿ ñïåêòðîìåòðèÿ ÎÑÍÎÂÍÎÉ ÏÐÈÍÖÈÏ Àòîìíàÿ àáñîðáöèÿ — ïðîöåññ ïîãëîùåíèÿ ýëåêòðîìàãíèòíîãî èçëó÷åíèÿ ñïåöèôè÷åñêîé äëèíû âîëíû àòîìîì â îñíîâíîì ñîñòîÿíèè ñ ïåðåõîäîì â âîçáóæäåííîå ñîñòîÿíèå. Àòîìû â îñíîâíîì ñîñòîÿíèè ïîãëîùàþò ýíåðãèþ ñ ðå- çîíàíñíîé ÷àñòîòîé, è âñëåäñòâèå òàêîãî ðåçî- íàíñíîãî ïîãëîùåíèÿ ýëåêòðîìàãíèòíîå èçëó- ÷åíèå îñëàáëÿåòñÿ. Ïîãëîùåííàÿ ýíåðãèÿ ôàê- òè÷åñêè ïðÿìî ïðîïîðöèîíàëüíà êîëè÷åñòâó ïðèñóòñòâóþùèõ àòîìîâ.
Äàííàÿ îáùàÿ ôàðìàêîïåéíàÿ ñòàòüÿ ïðèâî- äèò îáùóþ èíôîðìàöèþ è îïðåäåëÿåò ïîðÿäîê äåéñòâèÿ ïðè îïðåäåëåíèè ýëåìåíòîâ àòîìíî- àáñîðáöèîííîé ñïåêòðîìåòðèåé ëèáî ñ ïîìî- ùüþ àòîìèçàöèè ñ èñïîëüçîâàíèåì ïëàìåíè, ýëåêòðîòåðìè÷åñêîãî èñïàðåíèÿ â ãðàôèòîâîé ïå÷è, ïîëó÷åíèÿ ãèäðèäîâ, ëèáî ñïîñîáîì õî- ëîäíîãî ïàðà äëÿ îïðåäåëåíèÿ ðòóòè. Àòîìíî-àáñîðáöèîííàÿ ñïåêòðîìåòðèÿ — òåõíèêà îïðåäåëåíèÿ êîíöåíòðàöèè ýëåìåíòà â èñïûòóåìîì îáðàçöå ïóòåì èçìåðåíèÿ ïîãëîùå- íèÿ ýëåêòðîìàãíèòíîãî èçëó÷åíèÿ àòîìíûì ïà- ðîì ýëåìåíòà èñïûòóåìîãî îáðàçöà. Èñïûòàíèå ïðîâîäÿò ïðè äëèíå âîëíû îäíîé èç ëèíèé ïî- ãëîùåíèÿ (ðåçîíàíñíûõ ëèíèé) îïðåäåëÿåìîãî ýëåìåíòà. Êîëè÷åñòâî ïîãëîùåííîãî èçëó÷åíèÿ, â ñîîòâåòñòâèè ñ çàêîíîì Áóãåðà-Ëàìáåðòà-Áå- ðà, ïðîïîðöèîíàëüíî êîíöåíòðàöèè ýëåìåíòà. ÏÐÈÁÎÐ Îñíîâíûìè ñîñòàâëÿþùèìè ÷àñòÿìè ïðè- áîðà ÿâëÿþòñÿ: – èñòî÷íèê èçëó÷åíèÿ; – ñèñòåìà ââåäåíèÿ è ðàñïûëåíèÿ îáðàçöà; – àòîìèçàòîð; – ìîíîõðîìàòîð èëè ïîëèõðîìàòîð; – äåòåêòîð; – áëîê ñáîðà äàííûõ. Ïðèáîð îáû÷íî îñíàùàþò ñèñòåìîé êîððåê- öèè ôîíà.  êà÷åñòâå èñòî÷íèêà èçëó÷åíèÿ èñ- ïîëüçóþò ëàìïû ñ ïîëûì êàòîäîì (ËÏÊ, HCL — hollow-cathodelamp) è áåçýëåêòðîäíûå ãàçîðàç- ðÿäíûå ëàìïû (ÁÝÃË, EDL — electrodeless- dischargelamp). Èçëó÷åíèå òàêèõ ëàìï èìååò ñïåêòð îïðåäåëÿåìîãî ýëåìåíòà, ñîñòîÿùèé èç 52 î÷åíü óçêèõ ëèíèé ñ ïîëóøèðèíîé îêîëî 0,002 íì. Ñóùåñòâóåò òðè òèïà àòîìèçàòîðîâ: – Ïëàìåííûé ñïîñîá Ïëàìåííûé àòîìèçàòîð ñîñòîèò èç ñèñòåìû ðàñïûëåíèÿ ñ ïíåâìàòè÷åñêèì ïðèñïîñîáëåíè- åì äëÿ ïîëó÷åíèÿ àýðîçîëÿ, ðåãóëÿòîðà ãàçà è ãîðåëêè. Äëÿ ïîëó÷åíèÿ òåìïåðàòóðû îò 2000 K äî 3000 K èñïîëüçóþò ðàçëè÷íûå ñìåñè ãîðþ÷å- ãî ãàçà (ïðîïàí, âîäîðîä è àöåòèëåí) è îêèñëè- òåëÿ (âîçäóõ è îêñèä àçîòà). Êîíôèãóðàöèþ ãî- ðåëêè àäàïòèðóþò ïîä èñïîëüçóåìûå ãàçû, ñêî- ðîñòü ïîäà÷è ãàçà ðåãóëèðóåòñÿ. Îáðàçöû ðàñïûëÿþò, èñïîëüçóÿ ïîäêèñëåííóþ âîäó êàê ïðåäïî÷òèòåëüíûé ðàñòâîðèòåëü äëÿ ïðèãîòîâ- ëåíèÿ èñïûòóåìûõ ðàñòâîðîâ è ðàñòâîðîâ ñðàâ- íåíèÿ. Ìîãóò áûòü èñïîëüçîâàíû è îðãàíè÷å- ñêèå ðàñòâîðèòåëè, åñëè ãàðàíòèðîâàíî, ÷òî îíè íå âëèÿþò íà ñòàáèëüíîñòü ïëàìåíè. – Ñïîñîá ýëåêòðîòåðìè÷åñêîé àòîìèçàöèè Îñíîâíûìè ñîñòàâëÿþùèìè ýëåêòðîòåðìè- ÷åñêîãî àòîìèçàòîðà ÿâëÿþòñÿ ãðàôèòîâàÿ òðóá- ÷àòàÿ ïå÷ü è èñòî÷íèê ýëåêòðîýíåðãèè. Ïðè èñ- ïîëüçîâàíèè ãðàôèòîâîé òðóá÷àòîé ïå÷è ïðîèñ- õîäèò ïîëíàÿ àòîìèçàöèÿ îáðàçöà è àòîìíûé ïàð óäåðæèâàåòñÿ íà ïóòè èçëó÷åíèÿ â òå÷åíèå äëèòåëüíîãî âðåìåíè, ÷òî óëó÷øàåò ïðåäåë îï- ðåäåëåíèÿ. Îáðàçöû (æèäêîñòè è òâåðäûå âåùå- ñòâà) ââîäÿò íåïîñðåäñòâåííî â ãðàôèòîâóþ òðóá÷àòóþ ïå÷ü, êîòîðàÿ íàãðåâàåòñÿ ïîñòåïåí- íî ïî çàäàííîé ïðîãðàììå, ñíà÷àëà âûñóøèâàÿ îáðàçåö, çàòåì óäàëÿÿ îñíîâíûå êîìïîíåíòû ìàòðèêñà ïóòåì ïèðîëèçà, ïîñëå ÷åãî àòîìèçè- ðóÿ âåñü îïðåäåëÿåìûé ýëåìåíò. Î÷èùàþò ïå÷ü, íàãðåâàÿ åå äî òåìïåðàòóðû áîëåå âûñîêîé, ÷åì òåìïåðàòóðà àòîìèçàöèè. Ïðîäóâàíèå ãðàôèòî- âîé ïå÷è èíåðòíûì ãàçîì âî âðåìÿ ïèðîëèçà ïðèâîäèò ê áîëåå êà÷åñòâåííîìó ïðîöåññó àòî- ìèçàöèè. – Ñïîñîá õîëîäíîãî ïàðà è ãèäðèäíûé ìåòîä Àòîìíûé ïàð ìîæåò áûòü ïîëó÷åí è âíå ñïåêòðîìåòðà. Òàêîé ñïîñîá ïîëó÷åíèÿ àòîìíî- ãî ïàðà èñïîëüçóþò â ìåòîäå õîëîäíîãî ïàðà ïðè îïðåäåëåíèè ðòóòè èëè äëÿ îïðåäåëåíèÿ òà- êèõ ýëåìåíòîâ, îáðàçóþùèõ ãèäðèäû, êàê ìûøüÿê, ñóðüìà, âèñìóò, ñåëåí è îëîâî.  ñëó- ÷àå îïðåäåëåíèÿ ðòóòè, àòîìû ãåíåðèðóþò õè- ìè÷åñêèì âîññòàíîâëåíèåì ñ ïîìîùüþ îëîâà õëîðèäà èëè íàòðèÿ íàòðèÿ, ïîñëå ÷åãî àòîìíûé ïàð áûñòðî ïåðåíîñÿò ñ ïîìîùüþ èíåðòíîãî ãàçà â õîëîäíóþ êâàðöåâóþ êþâåòó, ðàñïîëî- æåííóþ íà ïóòè èçëó÷åíèÿ, èñïóñêàåìîãî ëàì- ïîé. Ãèäðèäû, ãåíåðèðîâàííûå òàêèì îáðàçîì, ïåðåíîñÿòñÿ ñ ïîìîùüþ èíåðòíîãî ãàçà â ãîðÿ- ÷óþ êþâåòó, ãäå îíè äèññîöèèðóþò íà àòîìû.
ÈÍÒÅÐÔÅÐÅÍÖÈß Ïðè èçìåðåíèÿõ àòîìíîé àáñîðáöèè ìîãóò èìåòü ìåñòî õèìè÷åñêàÿ, ôèçè÷åñêàÿ, èîíèçà- öèîííàÿ è ñïåêòðàëüíàÿ èíòåðôåðåíöèè. Õèìè- ÷åñêóþ èíòåðôåðåíöèþ êîìïåíñèðóþò èñïîëü- çîâàíèåì ìîäèôèêàòîðîâ ìàòðèêñà èëè âûñâî- áîæäàþùèõ àãåíòîâ, ëèáî èñïîëüçîâàíèåì âûñîêèõ òåìïåðàòóð ïëàìåíè àçîòà îêñèäà — àöåòèëåí. Èîíèçàöèîííóþ èíòåðôåðåíöèþ êîìïåíñèðóþò èñïîëüçîâàíèåì ñïåöèàëüíûõ èîíèçàöèîííûõ áóôåðîâ (íàïðèìåð, ëàíòàíî- âûõ èëè öåçèåâûõ). Ôèçè÷åñêóþ èíòåðôåðåí- öèþ, îáóñëîâëåííóþ âûñîêèì ñîäåðæàíèåì ñîëè èëè âÿçêîñòüþ, êîìïåíñèðóþò, èñïîëüçóÿ ðàçâåäåíèå îáðàçöà, ïîñðåäñòâîì ìåòîäà ñòàí- äàðòíûõ äîáàâîê èëè ïîäáîðîì ìàòðèêñà. Ñïåê- òðàëüíàÿ èíòåðôåðåíöèÿ ïðîèñõîäèò ïðè ïåðå- êðûâàíèè ðåçîíàíñíûõ ëèíèé, è äëÿ åå èñêëþ- ÷åíèÿ èñïîëüçóþò äðóãóþ ðåçîíàíñíóþ ëèíèþ. Èñïîëüçîâàíèå êîððåêöèè ôîíà Çååìàíà òàêæå êîìïåíñèðóåò ñïåêòðàëüíóþ èíòåðôåðåíöèþ è ïîìåõè, ñâÿçàííûå ñ ïîãëîùåíèåì èçëó÷åíèÿ ìîëåêóëàìè, îñîáåííî ïðè èñïîëüçîâàíèè ñïî- ñîáà ýëåêòðîòåðìè÷åñêîé àòîìèçàöèè. Òàêæå ê ñïåêòðàëüíîé èíòåðôåðåíöèè ìîæåò ïðèâîäèòü èñïîëüçîâàíèå ìíîãîýëåìåíòíûõ ëàìï ñ ïîëûì êàòîäîì. Ñïåöèôè÷åñêîå èëè íåñïåöèôè÷åñêîå ïîãëîùåíèå èçìåðÿþò â ñïåêòðàëüíîì äèàïàçî- íå, îïðåäåëÿåìîì âûáðàííîé øèðèíîé ùåëè ìîíîõðîìàòîðà (0,2 – 2 íì). ÊÎÐÐÅÊÖÈß ÔÎÍÀ Ðàññåèâàíèå è ôîí óâåëè÷èâàþò çíà÷åíèå èçìåðÿåìîãî ïîãëîùåíèÿ ïðè àòîìèçàöèè ïëà- ìåíåì èëè ïðè ýëåêòðîòåðìè÷åñêîé àòîìèçà- öèè. Ïîãëîùåíèå ôîíîì îõâàòûâàåò øèðîêèé äèàïàçîí äëèí âîëí, â òî âðåìÿ êàê àòîìû ïî- ãëîùàþò â î÷åíü óçêèõ äèàïàçîíàõ ïîðÿäêà 0,005 – 0,02 íì. Ïîãëîùåíèå ôîíîì ìîæåò áûòü ñêîððåêòèðîâàíî èñïîëüçîâàíèåì êîíòðîëüíîãî ðàñòâîðà, èìåþùåãî òî÷íî òàêîé æå ñîñòàâ, ÷òî è ðàñòâîð îáðàçöà, çà èñêëþ÷åíèåì îïðåäåëÿå- ìîãî ýëåìåíòà, ÷òî, îäíàêî, ÷àñòî ÿâëÿåòñÿ íå- îñóùåñòâèìûì. Ïðè ýëåêòðîòåðìè÷åñêîé àòî- ìèçàöèè òåìïåðàòóðà ïèðîëèçà äîëæíà áûòü ïî- äîáðàíà òàê, ÷òîáû èñêëþ÷èòü ïðîäóêòû ðàçëîæåíèÿ ìàòðèêñà, âûçûâàþùèå ôîíîâîå 53 ïîãëîùåíèå. Êîððåêöèÿ ôîíà ìîæåò áûòü ïðî- âåäåíà òàêæå ñ èñïîëüçîâàíèåì äâóõ ðàçëè÷íûõ èñòî÷íèêîâ ýíåðãèè: ëàìïû ñ ïîëûì êàòîäîì, ñ ïîìîùüþ êîòîðîé èçìåðÿþò îáùåå ïîãëîùåíèå (ýëåìåíò + ôîí), è äåéòåðèåâîé ëàìïû ñ íåïðå- ðûâíîé ýìèññèåé, ñ ïîìîùüþ êîòîðîé èçìåðÿ- þò ôîíîâîå ïîãëîùåíèå. Äëÿ êîððåêöèè ôîíà ñèãíàë, ïîëó÷åííûé îò äåéòåðèåâîé ëàìïû, âû- ÷èòàþò èç ñèãíàëà, ïîëó÷åííîãî îò ëàìïû ñ ïî- ëûì êàòîäîì. Ýòîò ñïîñîá ëèìèòèðîâàí ñïåê- òðàëüíûì äèàïàçîíîì äåéòåðèåâîé ëàìïû (îò 190 íì äî 400 íì). Ôîíîâîå ïîãëîùåíèå òàêæå ìîæåò áûòü íàéäåíî ïóòåì èçìåðåíèÿ ïîãëîùå- íèÿ ïðè äâóõ äëèíàõ âîëí: ðåçîíàíñíîé ëèíèè è äëèíå âîëíû, áëèçêîé ê ðåçîíàíñíîé, íî ïðè êî- òîðîé íå íàáëþäàåòñÿ ïîãëîùåíèÿ îáðàçöîì, è ïîñëåäóþùèì âû÷èòàíèåì èç ïîãëîùåíèÿ ðåçî- íàíñíîé ëèíèè ïîãëîùåíèÿ âòîðîé äëèíû âîë- íû. Åùå îäèí ñïîñîá êîððåêöèè ôîíà — ýôôåêò Çååìàíà (îñíîâàí íà ðàñùåïëåíèè Çååìàíà ëè- íèè ïîãëîùåíèÿ â ìàãíèòíîì ïîëå). Äàííûé ñïîñîá îñîáåííî ïîëåçåí â ñëó÷àå, åñëè ôîí èìååò òîíêóþ ñòðóêòóðó, à òàêæå ïîçâîëÿåò çíà- ÷èòåëüíî ñêîððåêòèðîâàòü ôîí â äèàïàçîíå îò 185 íì äî 900 íì.
ÂÛÁÎÐ ÓÑËÎÂÈÉ ÏÐÎÂÅÄÅÍÈß ÈÑÏÛÒÀÍÈß Ïîñëå ïîäáîðà ïîäõîäÿùåé äëèíû âîëíû è øèðèíû ùåëè äëÿ îïðåäåëÿåìîãî ýëåìåíòà ðàñ- ñìàòðèâàþò ñëåäóþùèå ìîìåíòû: – êîððåêöèþ íåñïåöèôè÷åñêîãî ôîíîâîãî ïîãëîùåíèÿ; – íåîáõîäèìîñòü ïðèáàâëåíèÿ õèìè÷åñêèõ ìîäèôèêàòîðîâ èëè èîíèçàöèîííûõ áóôåðîâ ê îáðàçöó, à òàêæå ê êîíòðîëüíîìó ðàñòâîðó è ðàñ- òâîðàì ñðàâíåíèÿ; – ðàçâåäåíèå îáðàçöà (íàïðèìåð, äëÿ ìèíè- ìèçàöèè ôèçè÷åñêîé èíòåðôåðåíöèè); – äåòàëè òåìïåðàòóðíîé ïðîãðàììû, ïðåä- âàðèòåëüíûé íàãðåâ, âûñóøèâàíèå, ïèðîëèç, àòîìèçàöèþ, ïîñòàòîìèçàöèþ ñî âðåìåíåì ëè- íåéíîãî íàðàñòàíèÿ è âðåìåíåì óäåðæèâàíèÿ; – ðàñõîä èíåðòíîãî ãàçà; – ìîäèôèêàòîðû ìàòðèêñà äëÿ ýëåêòðîòåð- ìè÷åñêîé àòîìèçàöèè (ïå÷ü); – õèìè÷åñêèå âîññòàíàâëèâàþùèå ðåàãåí- òû äëÿ îïðåäåëåíèé ðòóòè èëè äðóãèõ ãèäðè- äîáðàçóþùèõ ýëåìåíòîâ âìåñòå ñ òåìïåðàòóðîé êþâåòû ñ õîëîäíûì ïàðîì èëè òåìïåðàòóðû íà- ãðåâàåìîé êþâåòû; – òåõíè÷åñêèå òðåáîâàíèÿ ïî èñïîëíåíèþ ïå÷è (êàìåðà, ïëàòôîðìà Ëüâîâà è äðóãèå). ÌÅÒÎÄ Îïðåäåëåíèÿ ïðîâîäÿò ïóòåì ñðàâíåíèÿ ñî ñòàíäàðòíûìè ðàñòâîðàìè ñ èçâåñòíûìè êîí- öåíòðàöèÿìè îïðåäåëÿåìîãî ýëåìåíòà ìåòîäîì êàëèáðîâî÷íîãî ãðàôèêà (ìåòîä I), èëè ìåòîäîì ñòàíäàðòíûõ äîáàâîê (ìåòîä II). Àòîìíî-àáñîðáöèîííûé ñïåêòðîìåòð âûâî- äÿò íà ðåæèì â ñîîòâåòñòâèè ñ èíñòðóêöèåé çà- âîäà-ïðîèçâîäèòåëÿ è óñòàíàâëèâàþò íåîáõîäè- ìóþ äëèíó âîëíû.  ãåíåðàòîð àòîìíîãî ïàðà ââîäÿò êîíòðîëüíûé ðàñòâîð è íàñòðàèâàþò ðå- ãèñòðèðóþùåå óñòðîéñòâî íà ìàêñèìóì ïðîïóñ- êàíèÿ. Çíà÷åíèå äëÿ êîíòðîëüíîãî ðàñòâîðà ìî- æåò áûòü îïðåäåëåíî ïóòåì èñïîëüçîâàíèÿ ðàñ- òâîðèòåëÿ äëÿ óñòàíîâêè ïðèáîðà íà íóëåâîå çíà÷åíèå. Ââîäÿò ðàñòâîð ñðàâíåíèÿ îïðåäåëÿå- ìîãî ýëåìåíòà ñ íàèáîëüøåé êîíöåíòðàöèåé è íàñòðàèâàþò ïðèáîð òàê, ÷òîáû ïîëó÷èòü ìàê- ñèìàëüíûé ðåãèñòðèðóåìûé ñèãíàë. Âî èçáåæà- íèå çàãðÿçíåíèÿ è ýôôåêòà ïàìÿòè òùàòåëüíî ïðîìûâàþò ïðèáîð. Ïîñëå çàâåðøåíèÿ àíàëèçà ïðèáîð ïðîìûâàþò âîäîé Ð èëè ïîäêèñëåííîé âîäîé.  ñëó÷àå èñïîëüçîâàíèÿ òåõíèêè ââîäà òâåð- äûõ ïðîá, âñå óñëîâèÿ ïðîâåäåíèÿ èñïûòàíèÿ îïèñûâàþò â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. Ïðåäïî÷òèòåëüíî, ÷òîáû êîíöåíòðàöèè ðàñ- òâîðîâ íàõîäèëèñü â ëèíåéíîé ÷àñòè êàëèáðî- âî÷íîãî ãðàôèêà. Åñëè ýòî íåâîçìîæíî, ìîãóò áûòü èñïîëüçîâàíû êðèâîëèíåéíûå êàëèáðî- âî÷íûå ãðàôèêè ñ ïðèìåíåíèåì ïîäõîäÿùåãî ïðîãðàììíîãî îáåñïå÷åíèÿ. Íà âñåõ ýòàïàõ ïðîâåäåíèÿ èñïûòàíèÿ ðåêî- ìåíäóåòñÿ ïî âîçìîæíîñòè èñïîëüçîâàòü ïîëè- ìåðíóþ ëàáîðàòîðíóþ ïîñóäó. Äëÿ ïîäãîòîâêè îáðàçöà ìîæåò ïîòðåáîâàòüñÿ ðàñòâîðåíèå, ðàç- ëîæåíèå (êàê ïðàâèëî, â ìèêðîâîëíîâîé ïå÷è), îçîëåíèå èëè ñî÷åòàíèå óêàçàííûõ îïåðàöèé äëÿ òîãî, ÷òîáû î÷èñòèòü ìàòðèêñ îáðàçöà è/èëè óäàëèòü óãëåðîäñîäåðæàùèå âåùåñòâà. Åñëè ïðîöåññ ïðîèñõîäèò â îòêðûòîé ñèñòåìå, ïðè îòñóòñòâèè äðóãèõ óêàçàíèé â ÷àñòíîé ôàðìàêî- ïåéíîé ñòàòüå, òåìïåðàòóðà ïðîêàëèâàíèÿ íå äîëæíà ïðåâûøàòü 600 °Ñ ïî ïðè÷èíå ëåòó÷å- ñòè íåêîòîðûõ ìåòàëëîâ. 54 ÌÅÒÎÄ I — ÌÅÒÎÄ ÊÀËÈÁÐÎÂÎ×ÍÎÃÎ ÃÐÀÔÈÊÀ Îáû÷íî äëÿ èçìåðåíèé ãîòîâÿò è èñïîëüçó- þò òðè ðàñòâîðà ñðàâíåíèÿ îïðåäåëÿåìîãî ýëå- ìåíòà è êîíòðîëüíûé ðàñòâîð. Èñïûòóåìûé ðàñòâîð ãîòîâÿò, êàê óêàçàíî â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. Íå ìåíåå òðåõ ðàñòâîðîâ ñðàâíåíèÿ îïðåäåëÿåìîãî ýëåìåíòà ãîòîâÿò òàê, ÷òîáû äèàïàçîí êîíöåíòðàöèé ýòèõ ðàñòâîðîâ âêëþ÷àë îæèäàåìîå çíà÷åíèå êîí- öåíòðàöèè îïðåäåëÿåìîãî ýëåìåíòà â èñïûòóå- ìîì ðàñòâîðå. Äëÿ êîëè÷åñòâåííîãî àíàëèçà îï- òèìàëüíûå çíà÷åíèÿ êàëèáðîâêè äîëæíû íàõî- äèòüñÿ â äèàïàçîíå îò 0,7 äî 1,3 îò îæèäàåìîãî ñîäåðæàíèÿ îïðåäåëÿåìîãî ýëåìåíòà èëè îò ïðåäåëà, óêàçàííîãî â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå.
Äëÿ àíàëèçà íà ñîäåðæàíèå ïðèìåñåé îïòèìàëüíûå çíà÷åíèÿ êàëèáðîâêè äîëæíû íà- õîäèòüñÿ â äèàïàçîíå îò ïðåäåëà îáíàðóæåíèÿ äî 1,2 îò ïðåäåëüíîãî çíà÷åíèÿ äëÿ îïðåäåëÿå- ìîãî ýëåìåíòà. Ëþáûå ðåàêòèâû, èñïîëüçóåìûå ïðè ïðèãîòîâëåíèè èñïûòóåìîãî ðàñòâîðà, ïðè- áàâëÿþò â êîíòðîëüíûé ðàñòâîð è ðàñòâîðû ñðàâíåíèÿ â òàêèõ æå êîëè÷åñòâàõ, êàê è â èñïû- òóåìûé ðàñòâîð. Ââîäÿò ðàñòâîðû, èñïîëüçóÿ îäèíàêîâîå êî- ëè÷åñòâî ïîâòîðîâ äëÿ ïîëó÷åíèÿ óñòîé÷èâûõ ðåçóëüòàòîâ. Ðàñ÷åò. Ñòðîÿò êàëèáðîâî÷íóþ êðèâóþ çà- âèñèìîñòè ñðåäíèõ çíà÷åíèé ïîãëîùåíèÿ ðàñ- òâîðîâ ñðàâíåíèÿ îò êîíöåíòðàöèè, ïî êîòîðîé îïðåäåëÿþò êîíöåíòðàöèþ ýëåìåíòà â èñïûòóå- ìîì ðàñòâîðå. ÌÅÒÎÄ II — ÌÅÒÎÄ ÑÒÀÍÄÀÐÒÍÛÕ ÄÎÁÀÂÎÊ Èñïûòóåìûé ðàñòâîð ãîòîâÿò, êàê óêàçàíî â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. Ðàâíûå îáúåìû èñïûòóåìîãî ðàñòâîðà ïîìåùàþò íå ìåíåå, ÷åì â òðè ìåðíûå êîëáû îäèíàêîâîãî îáúåìà. Âî âñå ìåðíûå êîëáû êðîìå îäíîé ïðèáàâëÿþò ïðî- ïîðöèîíàëüíî óâåëè÷èâàþùèåñÿ îáúåìû ðàñ- òâîðà ñðàâíåíèÿ ñ èçâåñòíîé êîíöåíòðàöèåé îï- ðåäåëÿåìîãî ýëåìåíòà, ïîëó÷àÿ ñåðèþ ðàñòâî- ðîâ, ñîäåðæàùèõ óñòîé÷èâî âîçðàñòàþùèå êîíöåíòðàöèè îïðåäåëÿåìîãî ýëåìåíòà, ïîëó- ÷àÿ, åñëè ýòî âîçìîæíî, çíà÷åíèÿ â ëèíåéíîé îáëàñòè êðèâîé. Äîâîäÿò ñîäåðæèìîå êàæäîé êîëáû ðàñòâîðèòåëåì äî ìåòêè. Ââîäÿò ðàñòâîðû, èñïîëüçóÿ îäèíàêîâîå êî- ëè÷åñòâî ïîâòîðîâ äëÿ ïîëó÷åíèÿ óñòîé÷èâûõ ðåçóëüòàòîâ. Ðàñ÷åò. Ìåòîäîì íàèìåíüøèõ êâàäðàòîâ íà- õîäÿò ëèíåéíîå óðàâíåíèå ãðàôèêà è ïî íåìó ðàññ÷èòûâàþò êîíöåíòðàöèþ îïðåäåëÿåìîãî ýëåìåíòà â èñïûòóåìîì ðàñòâîðå. ÂÀËÈÄÀÖÈß ÌÅÒÎÄÈÊÈ ×åðåç îïðåäåëåííûå âðåìåííûå èíòåðâàëû âåðèôèöèðóþò óäîâëåòâîðèòåëüíîå èñïîëíåíèå ìåòîäèêè, îïèñàííîéâ ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. ËÈÍÅÉÍÎÑÒÜ Ãîòîâÿò è àíàëèçèðóþò íå ìåíåå ÷åòûðåõ ðàñòâîðîâ ñðàâíåíèÿ, êîíöåíòðàöèÿ êîòîðûõ íà- õîäèòñÿ â ïðåäåëàõ äèàïàçîíà êàëèáðîâêè, è êîíòðîëüíûé ðàñòâîð. Ïðîâîäÿò íå ìåíåå ïÿòè èçìåðåíèé. Èñïîëüçóÿ âñå ïîëó÷åííûå äàííûå, ðàññ÷è- òûâàþò êàëèáðîâî÷íóþ êðèâóþ ìåòîäîì íàè- ìåíüøèõ êâàäðàòîâ. Ñòðîÿò êðèâóþ ðåãðåññèè, îòìå÷àÿ ñðåäíèå çíà÷åíèÿ, èçìåðåííûå çíà÷å- íèÿ è äîâåðèòåëüíûé èíòåðâàë êàëèáðîâî÷íîãî ãðàôèêà. Ìåòîä ÿâëÿåòñÿ ïðèãîäíûì ïðè óñëî- âèè ñîáëþäåíèÿ ñëåäóþùèõ òðåáîâàíèé: – êîýôôèöèåíò êîððåëÿöèè äîëæåí áûòü íå ìåíåå 0,99; – íà êàëèáðîâî÷íîì ãðàôèêå ïîãðåøíîñòè êàæäîãî êàëèáðîâî÷íîãî óðîâíÿ äîëæíû áûòü ðàñïðåäåëåíû ñëó÷àéíûì îáðàçîì. Ðàññ÷èòûâàþò ñðåäíåå çíà÷åíèå è îòíîñè- òåëüíîå ñòàíäàðòíîå îòêëîíåíèå äëÿ íàèìåíü- øåãî è íàèáîëüøåãî êàëèáðîâî÷íîãî óðîâíÿ.  ñëó÷àå åñëè îòíîøåíèå ðàññ÷èòàííîãî ñòàíäàðòíîãî îòêëîíåíèÿ íàèìåíüøåãî è íàè- áîëüøåãî êàëèáðîâî÷íîãî óðîâíÿ ìåíåå 0,5 èëè áîëåå 2,0, ìîæåò áûòü ïîëó÷åíà áîëåå òî÷íàÿ îöåíêà êàëèáðîâî÷íîãî ãðàôèêà ñ èñïîëüçîâà- íèåì âçâåøåííîé ëèíåéíîé ðåãðåññèè. È ëè- íåéíàÿ, è êâàäðàòè÷íàÿ âåñîâàÿ ôóíêöèè ïðèìå- íÿþòñÿ ê ïîëó÷åííûì äàííûì äëÿ íàõîæäåíèÿ íàèáîëåå ïîäõîäÿùåé äëÿ èñïîëüçîâàíèÿ âåñî- âîé ôóíêöèè. Åñëè ñðåäíèå çíà÷åíèÿ ïðè ñðàâ- íåíèè ñ êàëèáðîâî÷íûì ãðàôèêîì ïðîÿâëÿþò îòêëîíåíèå îò ëèíåéíîñòè, èñïîëüçóþò äâóõ- ìåðíóþ ëèíåéíóþ ðåãðåññèþ. ÏÐÀÂÈËÜÍÎÑÒÜ Ïðåäïî÷òèòåëüíî âåðèôèöèðîâàòü ïðàâèëü- íîñòü ñ èñïîëüçîâàíèåì ñåðòèôèöèðîâàííûõ ñòàíäàðòíûõ îáðàçöîâ. Åñëè ýòî íåâîçìîæíî, ïðîâåðÿþò îòêðûâàåìîñòü. 55 Îòêðûâàåìîñòü.  ñëó÷àå ìåòîäèê êîëè÷å- ñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ îòêðûâàåìîñòü äîëæíà áûòü îò 90 % äî 110 %. Äëÿ äðóãèõ îïðåäåëå- íèé, íàïðèìåð äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñëåäîâûõ êîëè- ÷åñòâ ýëåìåíòà, îòêðûâàåìîñòü äîëæíà áûòü îò 80% äî 120% îò òåîðåòè÷åñêîãî çíà÷åíèÿ. Îò- êðûâàåìîñòü ìîæåò áûòü îïðåäåëåíà ñ èñïîëü- çîâàíèåì ïîäõîäÿùåãî ðàñòâîðà ñðàâíåíèÿ (ìàòðèêñíîãî ðàñòâîðà), ñîäåðæàùåãî èçâåñò- íîå êîëè÷åñòâî îïðåäåëÿåìîãî ýëåìåíòà (ñðåä- íÿÿ êîíöåíòðàöèÿ êàëèáðîâî÷íîãî ãðàôèêà).
ÏÎÂÒÎÐßÅÌÎÑÒÜ Ïîâòîðÿåìîñòü äîëæíà áûòü íå áîëåå 3 % äëÿ êîëè÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ è íå áîëåå 5 % äëÿ èñïûòàíèÿ íà ñîäåðæàíèå ïðèìåñåé. ÏÐÅÄÅË ÊÎËÈ×ÅÑÒÂÅÍÍÎÃÎ ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈß Óäîñòîâåðÿþòñÿ, ÷òî ïðåäåë êîëè÷åñòâåííî- ãî îïðåäåëåíèÿ (íàïðèìåð, îïðåäåëåííûé ñ èñ- ïîëüçîâàíèåì ïðèáëèæåíèÿ 10ó) íèæå èçìåðÿå- ìîãî çíà÷åíèÿ. 201020023-2019 2.1.2.23. Àáñîðáöèîííàÿ ñïåêòðîôîòîìåòðèÿ â èíôðàêðàñíîé îáëàñòè Èíôðàêðàñíûå ñïåêòðîôîòîìåòðû ïðèìåíÿ- þò äëÿ çàïèñè ñïåêòðîâ â îáëàñòè îò 4000 ñì–1 äî 650 ñì–1 (îò 2,5 ìêì äî 15,4 ìêì), à â íåêîòî- ðûõ ñëó÷àÿõ äî 200 ñì–1 (äî 50 ìêì). ÏÐÈÁÎÐ Ñïåêòðîôîòîìåòðû äëÿ çàïèñèñïåêòðîâ ñî- ñòîÿò èç ïîäõîäÿùåãî èñòî÷íèêà èçëó÷åíèÿ, ìî- íîõðîìàòîðà èëè èíòåðôåðîìåòðà è äåòåêòîðà.  ñïåêòðîôîòîìåòðàõ ñ Ôóðüå-ïðåîáðàçîâà- íèåì èñïîëüçóåòñÿ ïîëèõðîìàòè÷åñêîå èçëó÷å- íèå è ðàññ÷èòûâàåòñÿ ñïåêòð â çàäàííîé îáëàñ- òè ÷àñòîò ïóòåì Ôóðüå-ïðåîáðàçîâàíèÿ èñõîä- íûõ äàííûõ. Òàêæå ìîãóò áûòü èñïîëüçîâàíû ñïåêòðîôîòîìåòðû, ñíàáæåííûå îïòè÷åñêîé ñèñòåìîé, ñïîñîáíîé âûäåëÿòü ìîíîõðîìàòè÷å- ñêîå èçëó÷åíèå â èçìåðÿåìîé îáëàñòè. Îáû÷íî ñïåêòð ïðåäñòàâëÿåòñÿ êàê ôóíêöèÿ ïðîïóñêà- íèÿ, ò.å. îòíîøåíèÿ èíòåíñèâíîñòè ïðîøåäøåãî ê ïàäàþùåìó íà îáðàçåö èçëó÷åíèþ. Íî òàêæå ìîæåò áûòü ïðåäñòàâëåí êàê ôóíêöèÿ ïîãëîùå- íèÿ. Îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü (À) îïðåäåëÿþò êàê äåñÿòè÷íûé ëîãàðèôì îáðàòíîé âåëè÷èíûïðî- ïóñêàíèÿ (Ò): À T I I = æ è ç ö ø ÷ = æ è ç ö ø ÷log log10 10 01 , ãäå: T I I = 0 ; I0 — èíòåíñèâíîñòü èçëó÷åíèÿ, ïàäàþùå- ãî íà âåùåñòâî; I — èíòåíñèâíîñòü èçëó÷åíèÿ, ïðîøåä- øåãî ÷åðåç âåùåñòâî. ÏÎÄÃÎÒÎÂÊÀ ÎÁÐÀÇÖÀ ÄËß ÏÎËÓ×ÅÍÈß ÑÏÅÊÒÐΠÏÐÎÏÓÑÊÀÍÈß ÈËÈ ÏÎÃËÎÙÅÍÈß Èñïûòóåìûé îáðàçåö ãîòîâÿò ïî îäíîé èç ñëåäóþùèõ ìåòîäèê. Æèäêîñòè. Æèäêîñòè èññëåäóþò â ôîðìå ïëåíêè, íàõîäÿùåéñÿ ìåæäó äâóìÿ ïëàñòèíêà- ìè, ïðîçðà÷íûìè äëÿ èíôðàêðàñíîãî èçëó÷å- íèÿ, èëè â êþâåòå ñ ñîîòâåòñòâóþùåé òîëùèíîé ñëîÿ, òàêæå ïðîçðà÷íîé äëÿ èíôðàêðàñíîãî èç- ëó÷åíèÿ. Æèäêîñòè èëè òâåðäûå âåùåñòâà â ðàñ- òâîðå. Ãîòîâÿò ðàñòâîð èñïûòóåìîãî îáðàçöà â ïîäõîäÿùåì ðàñòâîðèòåëå. Âûáèðàþò êîíöåí- òðàöèþ âåùåñòâà è òîëùèíó ñëîÿ êþâåòû, ïî- çâîëÿþùèå ïîëó÷èòü óäîâëåòâîðèòåëüíûé ñïåêòð. Îáû÷íî õîðîøèå ðåçóëüòàòû ïîëó÷àþò ïðè êîíöåíòðàöèÿõ îò 10 ã/ë äî 100 ã/ë èòîëùè- íå ñëîÿ îò 0,5 ìì äî 0,1 ìì. Ïîãëîùåíèå ðàñòâî- ðèòåëÿ êîìïåíñèðóþò ïóòåì ïîìåùåíèÿ â êàíàë ñðàâíåíèÿ àíàëîãè÷íîé êþâåòû, ñîäåðæàùåé âûáðàííûé ðàñòâîðèòåëü. Ïðè èñïîëüçîâàíèè ïðèáîðà ñ Ôóðüå-ïðåîáðàçîâàíèåì çàïèñûâàþò ïîî÷åðåäíî ñïåêòð ðàñòâîðèòåëÿ è ñïåêòð îá- ðàçöà, è âû÷èòàþò ïîãëîùåíèå ðàñòâîðèòåëÿ ñ ó÷åòîì êîýôôèöèåíòà êîìïåíñàöèè. Òâåðäûå âåùåñòâà. Òâåðäûå âåùåñòâà èñ- ñëåäóþò â âèäå ñóñïåíçèé, ïîëó÷åííûõ ïóòåì äèñïåðãèðîâàíèÿâ ïîäõîäÿùåé æèäêîñòè, èëè â òâåðäîì ñîñòîÿíèè (äèñêè èç ãàëîãåíèäîâ). Åñëè óêàçàíî â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå, ôîðìèðóþò ïëåíêó èç ðàñïëàâëåííîé ìàññû ìå- æäó äâóìÿ ïëàñòèíàìè, ïðîçðà÷íûìè äëÿ èí- ôðàêðàñíîãî èçëó÷åíèÿ. à) Ñóñïåíçèÿ. Íåáîëüøîå êîëè÷åñòâî èñïû- òóåìîãî âåùåñòâà ðàñòèðàþò ñ ìèíèìàëüíûì êîëè÷åñòâîì âàçåëèíîâîãî ìàñëà Ð èëè äðóãîé ïîäõîäÿùåé æèäêîñòè; îáû÷íî îò 5 ìã äî 56 10 ìã èñïûòóåìîãî âåùåñòâà äîñòàòî÷íî äëÿ ïî- ëó÷åíèÿ ïîäõîäÿùåé ñóñïåíçèè ñ èñïîëüçîâàíè- åì îäíîé êàïëè âàçåëèíîâîãî ìàñëà Ð. Ïîëó÷åí- íóþ ñóñïåíçèþ ñæèìàþò ìåæäó äâóìÿ ïëàñòèí- êàìè, ïðîçðà÷íûìè äëÿ èíôðàêðàñíîãî èçëó÷åíèÿ. á) Äèñêè. Îò 1 ìã äî 2 ìã èñïûòóåìîãî âåùå- ñòâà ðàñòèðàþò ñ 300—400 ìã, ïðè îòñóòñòâèè äðóãèõ óêàçàíèé â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòà- òüå, òùàòåëüíî èçìåëü÷åííîãî è âûñóøåííîãî êàëèÿ áðîìèäà Ð èëè êàëèÿ õëîðèäà Ð. Îáû÷íî ýòèõ êîëè÷åñòâ äîñòàòî÷íî äëÿ ïîëó÷åíèÿ äèñêà äèàìåòðîì 10 – 15 ìì è ñïåêòðà ñîîòâåòñòâóþ- ùåé èíòåíñèâíîñòè.
Åñëè âåùåñòâî ÿâëÿåòñÿ ãèäðîõëîðèäîì, ðåêîìåíäóþò èñïîëüçîâàòü êà- ëèÿ õëîðèä Ð. Ñìåñü òùàòåëüíî ðàñòèðàþò, ïî- ìåùàþò ðàâíîìåðíî â ïóàíñîí è ïðåññóþò ïðè äàâëåíèè îêîëî 800 ÌÏà (8 ò·ñì–2). Äèñêè èç íå- ñòàáèëüíûõ ïðè îáû÷íûõ àòìîñôåðíûõ óñëîâè- ÿõ èëè ãèãðîñêîïè÷íûõ âåùåñòâïðåññóþò â âà- êóóìå. Ïðè÷èíîé îáðàçîâàíèÿ íåêà÷åñòâåííûõ äèñêîâ ìîãóò áûòü òàêèå ôàêòîðû, êàê íåäîñòà- òî÷íîå èëè ÷ðåçìåðíîå ðàñòèðàíèå, âëàæíîñòü èëè èíûå ïðèìåñè â äèñïåðñèîííîé ñðåäå è íå- äîñòàòî÷íîå èçìåëü÷åíèå ÷àñòèö. Äèñê íåïðèãî- äåí äëÿ èñïûòàíèÿ, åñëè îí ïðè âèçóàëüíîì îñ- ìîòðå íåîäíîðîäåí ïî ïðîçðà÷íîñòè èëè ïðî- ïóñêàíèå ïðè 2000 ñì–1 (5 ìêì) ñîñòàâëÿåò ìåíåå 60 % áåç êîìïåíñàöèè ïðè îòñóòñòâèè ñïåöèôè÷åñêîé ïîëîñû ïîãëîùåíèÿ âåùåñòâà. Ãàçû. Ãàçû èññëåäóþò â êþâåòå, ïðîçðà÷íîé äëÿ èíôðàêðàñíîãî èçëó÷åíèÿ, ñ äëèíîé îïòè- ÷åñêîãî ïóòè îêîëî 100 ìì. Èç êþâåòû îòêà÷è- âàþò âîçäóõ è çàïîëíÿþò åå íåîáõîäèìûì ãàçîì äî òðåáóåìîãî äàâëåíèÿ ÷åðåç êðàí èëè ïðè ïî- ìîùè èãîëü÷àòîãî êëàïàíà ÷åðåç ïîäõîäÿùóþ ãàçîâóþ ëèíèþ ìåæäó êþâåòîé è êîíòåéíåðîì ñ âåùåñòâîì, ïðåäíàçíà÷åííûìäëÿ èñïûòàíèÿ. Ïðèíåîáõîäèìîñòè, äàâëåíèå â êþâåòå äî- âîäÿò äî àòìîñôåðíîãî, èñïîëüçóÿ ãàç, ïðîçðà÷- íûé äëÿ èíôðàêðàñíîãî èçëó÷åíèÿ (íàïðèìåð, àçîò Ð èëè àðãîí Ð). Ìåøàþùåå âëèÿíèå ïîãëî- ùåíèÿ âîäû, óãëåðîäà äèîêñèäà èëè äðóãèõ àò- ìîñôåðíûõ ãàçîâ èñêëþ÷àþò ïóòåì ïîìåùåíèÿ â êàíàë ñðàâíåíèÿ èäåíòè÷íîé êþâåòû, êîòîðàÿ ëèáî âàêóóìèðîâàíà, ëèáî çàïîëíåíà ãàçîì, ïðîçðà÷íûì äëÿ èíôðàêðàñíîãî èçëó÷åíèÿ. ÄËß ÏÎËÓ×ÅÍÈß ÑÏÅÊÒÐΠÄÈÔÔÓÇÍÎÃÎ ÎÒÐÀÆÅÍÈß Òâåðäûå âåùåñòâà. Ñìåñü èñïûòóåìîãî âå- ùåñòâàñòîíêîèçìåëü÷åííûì è âûñóøåííûìêà- ëèÿ áðîìèäîì Ð èëè êàëèÿ õëîðèäîì Ð ðàñòèðà- þò â ïîðîøîê. Ïðè îòñóòñòâèè äðóãèõ óêàçàíèé â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå, ãîòîâÿò ñìåñü, ñîäåðæàùóþ îêîëî 5 % âåùåñòâà. Ñìåñü ðàñòè- ðàþò, ïîìåùàþò â ÷àøêó äëÿ îáðàçöà è çàïèñû- âàþò ñïåêòð îòðàæåíèÿ. Ïîñëå ìàòåìàòè÷åñêîé îáðàáîòêè çàïèñàí- íîãî ñïåêòðà ïî ôóíêöèè Êóáåëêà – Ìóíêà ìî- æåò áûòü ïîëó÷åí ñïåêòð ïîãëîùåíèÿ âåùåñòâà. ÄËß ÏÎËÓ×ÅÍÈß ÑÏÅÊÒÐΠÍÀÐÓØÅÍÍÎÃÎ ÏÎËÍÎÃÎ ÂÍÓÒÐÅÍÍÅÃÎ ÎÒÐÀÆÅÍÈß Íàðóøåííîå ïîëíîå îòðàæåíèå (âêëþ÷àÿ ìíîãîêðàòíîå îòðàæåíèå) êàñàåòñÿ ñâåòà, îáû÷- íî ìíîãîêðàòíî âíóòðåííå îòðàæåííîãî ïðî- ïóñêàþùåé ñðåäîé. Ñóùåñòâóþò ïðèáîðû, ãäå ïðîèñõîäèò òîëüêî îäíî îòðàæåíèå. Èñïûòóå- ìîå âåùåñòâîïîìåùàþò íà âíóòðåííèé îòðà- æàþùèé ýëåìåíò (ÂÎÝ, IRE), íàïðèìåð, èç àë- ìàçà, ãåðìàíèÿ, öèíêà ñåëåíèäà, òàëëèÿ áðîìè- äà — òàëëèÿ éîäèäà (KRS-5) èëè èç äðóãîãî ïîäõîäÿùåãî âåùåñòâà ñ âûñîêèì ïîêàçàòåëåì- ïðåëîìëåíèÿ, è äîáèâàþòñÿ ïëîòíîãî è îäíî- ðîäíîãî êîíòàêòà ñî âñåé ïîâåðõíîñòüþ êðè- ñòàëëà âíóòðåííåãî îòðàæàþùåãî ýëåìåíòà ñ ïîìîùüþ äàâëåíèÿ èëè ðàñòâîðÿÿ âåùåñòâîâ ïîäõîäÿùåì ðàñòâîðèòåëå è âûñóøèâàÿ ïîëó- ÷åííûé ðàñòâîð íà âíóòðåííåì îòðàæàþùåì ýëåìåíòå. Ïðîñìàòðèâàþò ñïåêòð íàðóøåííîãî ïîëíîãî âíóòðåííåãî îòðàæåíèÿ (ÍÏÂÎ, ATR). ÈÄÅÍÒÈÔÈÊÀÖÈß Ñ ÈÑÏÎËÜÇÎÂÀÍÈÅÌ ÑÒÀÍÄÀÐÒÍÛÕ ÎÁÐÀÇÖΠÎáðàçöû èñïûòóåìîãî âåùåñòâàè ñòàíäàðò- íîãî îáðàçöà ãîòîâÿò ïî îäíîé è òîé æå ìåòîäè- êå è çàïèñûâàþò ñïåêòðû â îáëàñòè îò 4000 ñì–1 äî 650 ñì–1 (îò 2,5 ìêì äî 15,4 ìêì) â îäíèõ è òåõ æå óñëîâèÿõ. Ìèíèìóìû ïðîïóñêàíèÿ (ìàê- ñèìóìû ïîãëîùåíèÿ) â ñïåêòðàõ èñïûòóåìîãî âåùåñòâàäîëæíû ñîîòâåòñòâîâàòü ïî ïîëîæå- íèþ è îòíîñèòåëüíîé âåëè÷èíå òàêîâûì â ñïåê- òðå ñòàíäàðòíîãî îáðàçöà.
Åñëè ñïåêòðû, ïîëó÷åííûå â òâåðäîì ñî- ñòîÿíèè, îòëè÷àþòñÿ ïî ïîëîæåíèþ ìèíèìóìîâ ïðîïóñêàíèÿ (ìàêñèìóìîâ ïîãëîùåíèÿ), òî èñ- ïûòóåìîå âåùåñòâîè ñòàíäàðòíûé îáðàçåö îá- ðàáàòûâàþò îäíèì è òåì æå ñïîñîáîì òàê, ÷òî- áû îíè êðèñòàëëèçîâàëèñü èëè ïîëó÷àëèñü â îä- íîé è òîé æå ôîðìå, èëè îáðàáàòûâàþò ñïîñîáîì, óêàçàííûì â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå, à çàòåì ñíèìàþò ñïåêòðû. 57 ÈÄÅÍÒÈÔÈÊÀÖÈß Ñ ÈÑÏÎËÜÇÎÂÀÍÈÅÌ ÑÒÀÍÄÀÐÒÍÛÕ ÑÏÅÊÒÐΠÊîíòðîëü ðàçðåøàþùåé ñïîñîáíîñòè.  ñëó÷àå ïðèáîðîâ ñ ìîíîõðîìàòîðîì çàïèñûâàþò ñïåêòð ïëåíêè ïîëèñòèðîëà òîëùèíîé îêîëî 35 ìêì. Ðàçíîñòü x (ñì. ðèñóíîê 2.1.2.23,-1) ìå- æäó ïðîöåíòîì ïðîïóñêàíèÿ â ìàêñèìóìå ïðî- ïóñêàíèÿ À ïðè 2870 ñì–1 (3,48 ìêì) è ìèíèìó- ìå ïðîïóñêàíèÿ  ïðè 2849,5 ñì–1 (3,51 ìêì) äîëæíà áûòü áîëåå 18. Ðàçíîñòü y ìåæäó ïðî- öåíòîì ïðîïóñêàíèÿ â ìàêñèìóìå ïðîïóñêàíèÿ Ñ ïðè 1589 ñì–1 (6,29 ìêì) è ìèíèìóìå ïðîïóñ- êàíèÿ D ïðè 1583 ñì–1 (6,32 ìêì) äîëæíà áûòü áîëåå 10.  ñëó÷àå ïðèáîðîâ ñ Ôóðüå-ïðåîáðàçîâàíè- åì óñòàíàâëèâàþò ïîäõîäÿùåå ðàçðåøåíèå ñ ñî- îòâåòñòâóþùåé àïîäèçàöèåé, ðåêîìåíäóåìîå ïðîèçâîäèòåëåì. Äëÿ êîíòðîëÿ ðàçðåøàþùåé ñïîñîáíîñòè èñïîëüçóþò ïîäõîäÿùèå ìåòîäû, íàïðèìåð, çàïèñûâàþò ñïåêòð ïëåíêè ïîëèñòè- ðîëà òîëùèíîé îêîëî 35 ìêì. Ðàçíîñòü ìåæäó ïîãëîùåíèåì â ìèíèìóìå ïîãëîùåíèÿ ïðè 2870 ñì–1 è ìàêñèìóìå ïîãëîùåíèÿ ïðè 2849,5 ñì–1 äîëæíà áûòü áîëåå 0,33. Ðàçíîñòü ìåæäó ïîãëîùåíèåì â ìèíèìóìå ïîãëîùåíèÿ ïðè 1589 ñì–1è ìàêñèìóìå ïîãëîùåíèÿ ïðè 1583 ñì–1 äîëæíà áûòü áîëåå 0,08. Òèïè÷íûé ñïåêòð ïîëèñòèðîëà, èñïîëüçóå- ìîãî äëÿ ïðîâåðêè ðàçðåøàþùåé ñïîñîáíîñòè. Ïðîâåðêà øêàëû âîëíîâûõ ÷èñåë. Øêàëà âîëíîâûõ ÷èñåë ìîæåò áûòü ïðîâåðåíà ñ èñ- ïîëüçîâàíèåì ïëåíêè ïîëèñòèðîëà, êîòîðàÿ èìååò ìèíèìóì ïðîïóñêàíèÿ (ìàêñèìóì ïîãëî- ùåíèÿ) ïðè âîëíîâûõ ÷èñëàõ (ñì–1), ïðèâåäåí- íûõ â òàáëèöå 2.1.2.23.-1. Ìåòîäèêà. Èñïûòóåìîå âåùåñòâî ãîòîâÿò ê èñïûòàíèþ ñîãëàñíî èíñòðóêöèè, ïðèëîæåííîé ê ñòàíäàðòíîìó ñïåêòðó/ñòàíäàðòíîìó îáðàçöó. Èñïîëüçóÿ óñëîâèÿ, ïðè êîòîðûõ ïðîâîäèëàñü ïðîâåðêà ðàçðåøàþùåé ñïîñîáíîñòè è ïîëó÷åí ñòàíäàðòíûé ñïåêòð, çàïèñûâàþò ñïåêòð èñïû- òóåìîãî âåùåñòâà. Ïîëîæåíèÿ è îòíîñèòåëüíûå âåëè÷èíû ïî- ëîñ âñïåêòðå èñïûòóåìîãî âåùåñòâà è ñòàíäàðò- íîìñïåêòðå äîëæíû ñîãëàñîâûâàòüñÿ ìåæäó ñî- áîé. Êîìïåíñàöèÿ âëèÿíèÿ ïàðîâ âîäû è àò- ìîñôåðíîãî óãëåðîäà äèîêñèäà. Ïðè èñïîëüçî- âàíèè ïðèáîðîâ ñ Ôóðüå-ïðåîáðàçîâàíèåì ñïåê- òðàëüíàÿ èíòåðôåðåíöèÿ, âûçûâàåìàÿ ïàðàìè âîäû è äèîêñèäîì óãëåðîäà, êîìïåíñèðóåòñÿ ñ èñïîëüçîâàíèåì ïîäõîäÿùèõ àëãîðèòìîâ â ñî- îòâåòñòâèè ñ èíñòðóêöèÿìè ïðîèçâîäèòåëÿ. Êðîìå òîãî, ñïåêòðû ìîãóò áûòü ïîëó÷åíû ëèáî íà ïðèáîðàõ, î÷èùåííûõ ñîîòâåòñòâóþùèì îá- ðàçîì, ëèáî ïðè àáñîëþòíî îäèíàêîâûõ óñëîâè- ÿõ çàïèñè îäíîëó÷åâîãî ñïåêòðà ôîíà è ñïåêòðà îáðàçöà. ÏÐÈÌÅÑÈ Â ÃÀÇÀÕ Äëÿ àíàëèçà ïðèìåñåé èñïîëüçóþò êþâåòó, ïðîçðà÷íóþ äëÿ èíôðàêðàñíîãî èçëó÷åíèÿ è 58 Ðèñóíîê 2.1.2.23.-1. Òàáëèöà 2.1.2.23.-1. — Ìèíèìóìû ïðîïóñêàíèÿ è äî- ïóñòèìûå îòêëîíåíèÿ äëÿ ïëåíêè ïîëèñòèðîëà Ìèíèìóì ïðîïóñêàíèÿ (ñì–1) Äîïóñòèìûå îòêëîíåíèÿ(ñì–1) Ïðèáîð ñ ìîíîõðîìàòîðîì Ïðèáîð ñ Ôóðüå- ïðåîáðàçîâàíèåì 3060,0 ±1,5 ±1,0 2849,5 ±2,0 ±1,0 1942,9 ±1,5 ±1,0 1601,2 ±1,0 ±1,0 1583,0 ±1,0 ±1,0 1154,5 ±1,0 ±1,0 1028,3 ±1,0 ±1,0 èìåþùóþ ñîîòâåòñòâóþùóþ äëèíó îïòè÷åñêî- ãî ïóòè (íàïðèìåð, îò 1 ì äî 20 ì). Êþâåòó çà- ïîëíÿþò òàê, êàê óêàçàíî â ðàçäåëå «Ãàçû». Äëÿ îïðåäåëåíèÿ è êîëè÷åñòâåííîé îöåíêè ïðèìå- ñåé èñïîëüçóþò ìåòîäèêè, óêàçàííûå â ÷àñòíûõ ôàðìàêîïåéíûõ ñòàòüÿõ. 201020024-2019 2.1.2.24. Àáñîðáöèîííàÿ ñïåêòðîôîòîìåòðèÿ â óëüòðàôèîëåòîâîé è âèäèìîé îáëàñòÿõ Îïðåäåëåíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè.
Îï- òè÷åñêàÿ ïëîòíîñòü (À) ðàñòâîðà ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé äåñÿòè÷íûé ëîãàðèôì îáðàòíîé âåëè÷è- íû ïðîïóñêàíèÿ (Ò) äëÿ ìîíîõðîìàòè÷åñêîãî èçëó÷åíèÿ è âûðàæàåòñÿ ñîîòíîøåíèåì: À T I I = æ è ç ö ø ÷ = æ è ç ö ø ÷log log10 10 01 ãäå: T I I = 0 ; I0 — èíòåíñèâíîñòü ïàäàþùåãî ìîíîõðî- ìàòè÷åñêîãî èçëó÷åíèÿ; I — èíòåíñèâíîñòü ïðîøåäøåãî ìîíî- õðîìàòè÷åñêîãî èçëó÷åíèÿ.  îòñóòñòâèå äðóãèõ ôèçèêî-õèìè÷åñêèõ ôàêòîðîâ èçìåðåííàÿ îïòè÷åñêàÿ ïëîòíîñòü (À) ïðîïîðöèîíàëüíà äëèíå ïóòè (b), ÷åðåç êîòîðûé ïðîõîäèò èçëó÷åíèå, è êîíöåíòðàöèè (ñ) âåùå- ñòâà â ðàñòâîðå â ñîîòâåòñòâèè ñ óðàâíåíèåì: A c b= × ×e , ãäå: e — ìîëÿðíûé êîýôôèöèåíò ïîãëîùåíèÿ; b — äëèíà îïòè÷åñêîãî ïóòè, â ñàíòèìåò- ðàõ; ñ — êîíöåíòðàöèÿ âåùåñòâà â ðàñòâîðå, â ìîëü íà ëèòð. Âåëè÷èíà A1 1 ñì % ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé óäåëü- íûé ïîêàçàòåëü ïîãëîùåíèÿ, òî åñòü îïòè÷å- ñêóþ ïëîòíîñòü ðàñòâîðà âåùåñòâà ñ êîíöåíòðà- öèåé 10 ã/ë â êþâåòå ñ òîëùèíîé ñëîÿ 1 ñì: A1 1 10 ñì Ì.ì. % = ×e . Ïðè îòñóòñòâèè äðóãèõ óêàçàíèé â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå èçìåðåíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ïðîâîäÿò ïðè óêàçàííîé äëèíå âîëíû ñ èñïîëüçîâàíèåì êþâåòû 1 ñì. Ïðè îòñóòñòâèè äðóãèõ óêàçàíèé â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòà- òüå èçìåðåíèå ïðîâîäÿò ïî ñðàâíåíèþ ñ òåì æå ðàñòâîðèòåëåì èëè òîé æå ñìåñüþ ðàñòâîðèòå- ëåé, â êîòîðîé ðàñòâîðåíî âåùåñòâî. Îïòè÷å- ñêàÿ ïëîòíîñòü ðàñòâîðèòåëÿ, èçìåðåííàÿ ïðî- òèâ âîçäóõà ïðè óêàçàííîé äëèíå âîëíû, íå äîëæíà ïðåâûøàòü 0,4 è æåëàòåëüíî, ÷òîáû îíà áûëà ìåíåå 0,2. Ñïåêòð ïîãëîùåíèÿ ïðåäñòàâëÿ- þò òàêèì îáðàçîì, ÷òîáû îïòè÷åñêàÿ ïëîòíîñòü èëè åå íåêîòîðàÿ ôóíêöèÿ áûëè ïðèâåäåíû ïî îñè îðäèíàò, à äëèíà âîëíû èëè íåêîòîðàÿ ôóíê- öèÿ îò äëèíû âîëíû — ïî îñè àáñöèññ. Åñëè â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå ïðè- âîäÿò òîëüêî îäíî çíà÷åíèå äëÿ ïîëîæåíèÿ ìàê- ñèìóìà ïîãëîùåíèÿ, òî ýòî îçíà÷àåò, ÷òî ïîëó- ÷åííîå çíà÷åíèå ìàêñèìóìà íå äîëæíî îòëè- ÷àòüñÿ îò óêàçàííîãî áîëåå ÷åì íà ±2 íì. Ïðèáîð. Ñïåêòðîôîòîìåòðû, ïðåäíàçíà÷åí- íûå äëÿ èçìåðåíèé â óëüòðàôèîëåòîâîé è âèäè- ìîé îáëàñòÿõ ñïåêòðà, ñîñòîÿò èç îïòè÷åñêîé ñèñòåìû, âûäåëÿþùåé ìîíîõðîìàòè÷åñêîå èç- ëó÷åíèå â îáëàñòè îò 200 íì äî 800 íì, è óñò- ðîéñòâà äëÿ èçìåðåíèÿ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè. Ïðîâåðêà øêàëû äëèí âîëí. Äëÿ ïðîâåðêè øêàëû äëèí âîëí èñïîëüçóþò ëèíèè âîäîðîä- íîé èëè äåéòåðèåâîé ðàçðÿäíîé ëàìïû èëè ëè- íèè ïàðîâ ðòóòè, à òàêæå ìàêñèìóìû ïîãëîùå- íèÿ ãîëüìèÿ ïåðõëîðàòà ðàñòâîð Ð, êîòîðûå ïðåäñòàâëåíû â òàáëèöå 2.2.2.24.-1. Äîïóñòèìîå îòêëîíåíèå ñîñòàâëÿåò ±1 íì äëÿ óëüòðàôèîëå- òîâîãî è ±3 íì äëÿ âèäèìîãî äèàïàçîíîâ. Òàêæå ìîãóò áûòü èñïîëüçîâàíû è äðóãèå ñåðòèôèöè- ðîâàííûå ñòàíäàðòíûå îáðàçöû. Ïðîâåðêà øêàëû îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè. Ïðîâåðÿþò çíà÷åíèÿ îïòè÷åñêèõ ïëîòíîñòåé, èñïîëüçóÿ ïîäõîäÿùèå ôèëüòðû èëè êàëèÿ äè- õðîìàòà ðàñòâîð Ð ïðè äëèíàõ âîëí, óêàçàí- íûõ â òàáëèöå 2.1.2.24.-2.  òàáëèöå 2.1.2.24.-2 ïðèâåäåíû òî÷íûå çíà÷åíèÿ óäåëüíîãî ïîêàçà- 59 Òàáëèöà 2.1.2.24.-1. Ìàêñèìóìû ïîãëîùåíèÿ (èëè èñ- ïóñêàíèÿ) äëÿ ïðîâåðêè øêàëû äëèí âîëí 241,15 íì (Ho) 404,66 íì (Hg) 253,7 íì (Hg) 435,83 íì (Hg) 287,15 íì (Ho) 486,0 íì (Db) 302,25 íì (Hg) 486,1 íì (Hb) 313,16 íì (Hg) 536,3 íì (Ho) 334,15 íì (Hg) 546,07 íì (Hg) 361,5 íì (Ho) 576,96 íì (Hg) 365,48 íì (Hg) 579,07 íì (Hg) òåëÿ ïîãëîùåíèÿ è åãî äîïóñòèìûå ïðåäåëû äëÿ êàæäîé äëèíû âîëíû. Äàííûå òàáëèöû îñíîâà- íû íà äîïóñòèìîé ïîãðåøíîñòè ïðè èçìåðåíèè ïîãëîùåíèÿ ±0,01. Äëÿ ïðîâåðêè øêàëû îïòè÷åñêèõ ïëîòíî- ñòåé èñïîëüçóþò ðàñòâîðû êàëèÿ äèõðîìàòà Ð, êîòîðûé ïðåäâàðèòåëüíî ñóøàò ïðè òåìïåðàòó- ðå 130 °Ñ äî ïîñòîÿííîé ìàññû.
Äëÿ ïðîâåðêè øêàëû îïòè÷åñêèõ ïëîòíîñòåé ïðè äëèíàõ âîëí 235 íì, 257 íì, 313 íì è 350 íì ðàñòâîðÿþò (57,0 – 63,0) ìã êàëèÿ äèõðîìàòà Ð â 0,005 Ì ðàñòâîðå ñåðíîé êèñëîòû è äîâîäÿò äî îáúåìà 1000,0 ìë ýòèì æå ðàñòâîðèòåëåì. Äëÿ ïðîâåðêè øêàëû îïòè÷åñêèõ ïëîòíîñòåé ïðè äëèíå âîë- íû 430 íì ðàñòâîðÿþò (57,0—63,0) ìã êàëèÿ äè- õðîìàòà Ð â 0,005 Ì ðàñòâîðå ñåðíîéêèñëîòûè äîâîäÿò äî îáúåìà 100,0 ìë ýòèì æå ðàñòâîðèòå- ëåì. Òàêæå ìîãóò áûòü èñïîëüçîâàíû è äðóãèå ñåðòèôèöèðîâàííûå ñòàíäàðòíûå îáðàçöû. Ïðåäåëüíûé óðîâåíü ðàññåÿííîãî ñâåòà. Ðàññåÿííûé ñâåò ìîæåò áûòü îïðåäåëåí ïðè äàííîé äëèíå âîëíû ñ èñïîëüçîâàíèåì ñîîòâåò- ñòâóþùèõ ôèëüòðîâ èëè ðàñòâîðîâ. Íàïðèìåð, îïòè÷åñêàÿ ïëîòíîñòü ðàñòâîðà 12 ã/ë êàëèÿ õëî- ðèäà Ð â êþâåòå ñ òîëùèíîé ñëîÿ 1 ñì ðåçêî âîç- ðàñòàåò ìåæäó 220 íì è 200 íì è èìååò çíà÷å- íèå áîëåå 2,0 ïðè 198 íì ïðè èñïîëüçîâàíèè âîäû â êà÷åñòâå êîìïåíñàöèîííîãî ðàñòâîðà. Òàêæå ìîãóò áûòü èñïîëüçîâàíû è äðóãèå ñåð- òèôèöèðîâàííûå ñòàíäàðòíûå îáðàçöû. Ðàçðåøàþùàÿ ñïîñîáíîñòü (äëÿ êà÷åñò- âåííîãî àíàëèçà). Åñëè óêàçàíî â ÷àñòíîé ôàð- ìàêîïåéíîé ñòàòüå, òî îïðåäåëÿþò ðàçðåøàþ- ùóþ ñïîñîáíîñòü ñïåêòðîôîòîìåòðà ñëåäóþ- ùèì îáðàçîì. Çàïèñûâàþò ñïåêòð 0,02 % (îá/îá) ðàñòâîðà òîëóîëà Ð â ãåêñàíå Ð. Ìèíè- ìàëüíî äîïóñòèìîå çíà÷åíèå îòíîøåíèÿ îïòè- ÷åñêîé ïëîòíîñòè â ìàêñèìóìå ïîãëîùåíèÿ ïðè 269 íì ê îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè â ìèíèìóìå ïî- ãëîùåíèÿ ïðè 266 íì óêàçûâàþò â ÷àñòíîé ôàð- ìàêîïåéíîé ñòàòüå. Òàêæå ìîãóò áûòü èñïîëüçî- âàíû è äðóãèå ñåðòèôèöèðîâàííûå ñòàíäàðòíûå îáðàçöû. Øèðèíà ñïåêòðàëüíîé ùåëè (äëÿ êîëè÷å- ñòâåííîãî àíàëèçà).  ñëó÷àå èñïîëüçîâàíèÿ ñïåêòðîôîòîìåòðà ñ èçìåíÿåìîé øèðèíîé ñïåê- òðàëüíîé ùåëè ïðè âûáðàííîé äëèíå âîëíû âîçìîæíû ïîãðåøíîñòè, ñâÿçàííûå ñ øèðèíîé ýòîé ùåëè. Äëÿ èõ èñêëþ÷åíèÿ øèðèíà ñïåê- òðàëüíîé ùåëè äîëæíà áûòü ìàëîé ïî ñðàâíå- íèþ ñ ïîëóøèðèíîé ïîëîñû ïîãëîùåíèÿ è â òî æå âðåìÿ äîëæíà áûòü ìàêñèìàëüíî âåëèêà äëÿ ïîëó÷åíèÿ âûñîêîãî óðîâíÿ I0. Òàêèì îáðàçîì, øèðèíà ùåëè äîëæíà áûòü òàêîé, ÷òîáû äàëü- íåéøåå åå óìåíüøåíèå íå èçìåíÿëî âåëè÷èíó èçìåðÿåìîé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè. Êþâåòû. Äîïóñòèìûå âàðèàöèè â òîëùèíå ñëîÿ èñïîëüçóåìûõ êþâåò äîëæíû áûòü íå áî- ëåå ±0,005 ñì. Êþâåòû, ïðåäíàçíà÷åííûå äëÿ èñïûòóåìîãî è êîìïåíñàöèîííîãî ðàñòâîðîâ, äîëæíû èìåòü îäèíàêîâîå ïðîïóñêàíèå (èëè îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü) ïðè çàïîëíåíèè îäíèì è òåì æå ðàñòâîðèòåëåì.  ïðîòèâíîì ñëó÷àå ýòî ðàçëè÷èå ñëåäóåò ó÷èòûâàòü. ×èñòêà è îáðàùåíèå ñ êþâåòàìè äîëæíû áûòü àêêóðàòíûìè. ÏÐÎÈÇÂÎÄÍÀß ÑÏÅÊÒÐÎÔÎÒÎÌÅÒÐÈß Â ïðîèçâîäíîé ñïåêòðîôîòîìåòðèè èñïîëü- çóåòñÿ ïðåîáðàçîâàíèå èñõîäíîãî ñïåêòðà ïî- ãëîùåíèÿ (íóëåâîé ïîðÿäîê) â ïðîèçâîäíûå ñïåêòðû ïåðâîãî, âòîðîãî è áîëåå âûñîêèõ ïî- ðÿäêîâ. Ïðîèçâîäíûé ñïåêòð ïåðâîãî ïîðÿäêà ïðåä- ñòàâëÿåò ñîáîé ãðàôèê çàâèñèìîñòè ãðàäèåíòà êðèâîé ïîãëîùåíèÿ (ñêîðîñòü èçìåíåíèÿ îïòè- ÷åñêîé ïëîòíîñòè ñ äëèíîé âîëíû, dA/dl) îò äëèíû âîëíû. Ïðîèçâîäíûé ñïåêòð âòîðîãî ïîðÿäêà ïðåä- ñòàâëÿåò ñîáîé ãðàôèê çàâèñèìîñòè êðèâèçíû ñïåêòðà ïîãëîùåíèÿ îò äëèíû âîëíû (d2A/dl2). Âòîðàÿ ïðîèçâîäíàÿ ïðè ëþáîé äëèíå âîëíû l ñâÿçàíà ñ êîíöåíòðàöèåé ñëåäóþùèì ñîîòíîøå- íèåì: d d d d d d ñì 2 2 2 1 1 2 2 2 10 10 A A c b A cb l l e l = × ¢ = × % ãäå: c¢ — êîíöåíòðàöèÿ ïîãëîùàþùåãî ðàñòâî- ðà, â ãðàììàõ íà ëèòð. Ïðèáîð.
Èñïîëüçóþò ñïåêòðîôîòîìåòð, îò- âå÷àþùèé óêàçàííûì âûøå òðåáîâàíèÿì è îñ- 60 Òàáëèöà 2.1.2.24.-2 Çíà÷åíèÿ óäåëüíîãî ïîêàçàòåëÿ ïîãëîùåíèÿ è åãî äîïóñòèìûå ïðåäåëû Äëèíà âîëíû, íì Óäåëüíûé ïîêàçàòåëü ïîãëîùåíèÿ À1 1 ñì % Äîïóñòèìûå ïðåäåëû À1 1 ñì % 235 124,5 îò 122,9 äî 126,2 257 144,5 îò 142,8 äî 146,2 313 48,6 îò 47,0 äî 50,3 350 107,3 îò 105,6 äî 109,0 430 15,9 îò 15,7 äî 16,1 íàùåííûé àíàëîãîâûì ðåçèñòåíòíîåìêîñòíûì äèôôåðåíöèðóþùèì ìîäóëåì, öèôðîâûì äèô- ôåðåíöèàòîðîì èëè äðóãèìè ñðåäñòâàìè ïîëó- ÷åíèÿ ïðîèçâîäíûõ ñïåêòðîâ. Íåêîòîðûå ìåòî- äû ïîëó÷åíèÿ ïðîèçâîäíûõ ñïåêòðîâ âòîðîãî ïîðÿäêà ñäâèãàþò èõ îòíîñèòåëüíî ñïåêòðà íó- ëåâîãî ïîðÿäêà, ÷òî ñëåäóåò ó÷èòûâàòü â ñëó÷àå ïðèìåíèìîñòè. Ðàçðåøàþùàÿ ñïîñîáíîñòü. Åñëè óêàçàíî â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå, çàïèñûâàþò ïðîèçâîäíûé ñïåêòð âòîðîãî ïîðÿäêà äëÿ ðàñ- òâîðà 0,02 % (îá/îá) òîëóîëà Ð â ìåòàíîëå Ð, èñïîëüçóÿ ìåòàíîë Ð â êà÷åñòâå êîìïåíñàöèîí- íîãî ðàñòâîðà. Íà ñïåêòðå äîëæåí ïðèñóòñòâî- âàòü íåáîëüøîé îòðèöàòåëüíûé ýêñòðåìóì, ðàñ- ïîëîæåííûé ìåæäó äâóìÿ áîëüøèìè îòðèöà- òåëüíûìè ýêñòðåìóìàìè ïðè 261 íì è 268 íì, ñîîòâåòñòâåííî, êàê ïîêàçàíî íà ðèñóíêå 2.1.2.24.-1. Ïðè îòñóòñòâèè äðóãèõ óêàçàíèé â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå îòíîøåíèå À/ (ñì. ðèñóíîê 2.1.2.24.-1) äîëæíî áûòü íå ìåíåå 0,2. Ìåòîäèêà. Ãîòîâÿò ðàñòâîð èñïûòóåìîãî âå- ùåñòâà, óñòàíàâëèâàþò ðàçëè÷íûå èíñòðóìåí- òàëüíûå õàðàêòåðèñòèêè â ñîîòâåòñòâèè ñ èíñò- ðóêöèåé ê ïðèáîðó è ðàññ÷èòûâàþò êîëè÷åñòâî îïðåäåëÿåìîãî âåùåñòâà, êàê óêàçàíî â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. 201020025-2019 2.1.2.25. Áóìàæíàÿ õðîìàòîãðàôèÿ Áóìàæíàÿ õðîìàòîãðàôèÿ ïðåäñòàâëÿåò ñî- áîé ìåòîä ðàçäåëåíèÿ, îñíîâàííûé íà ïåðåìå- ùåíèè ïîäâèæíîé ôàçû ïî êàïèëëÿðàì è ïî- âåðõíîñòè ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãè. Íåïîäâèæíîé ôàçîé ÿâëÿåòñÿ áóìàãà èëè âå- ùåñòâà, ïðåäâàðèòåëüíî íàíåñåííûå íà åå âî- ëîêíà. Ìåõàíèçì õðîìàòîãðàôèè íà áóìàãå ìîæåò áûòü ðàñïðåäåëèòåëüíûì èëè àäñîðáöè- îííûì. Ïåðåìåùåíèå ïîäâèæíîé ôàçû ïðîèñ- õîäèò ëèáî òîëüêî ïîä äåéñòâèåì êàïèëëÿðíûõ ñèë (âîñõîäÿùàÿ áóìàæíàÿ õðîìàòîãðàôèÿ), ëèáî ïîä äåéñòâèåì êàïèëëÿðíûõ ñèë è ñèëû òÿ- æåñòè (íèñõîäÿùàÿ áóìàæíàÿ õðîìàòîãðàôèÿ). Ïðè õðîìàòîãðàôèðîâàíèè îïðåäåëÿåìûå âåùåñòâà îáðàçóþò íà áóìàãå çîíû àäñîðáöèè â âèäå êðóãëûõ èëè îâàëüíûõ ïÿòåí èëè ïîëîñ â çàâèñèìîñòè îò ñïîñîáà íàíåñåíèÿ (â òî÷êó èëè ïîëîñîé). Ïîäâèæíîñòü âåùåñòâà ïðè õðîìàòîãðàôè- ðîâàíèè õàðàêòåðèçóåòñÿ êîýôôèöèåíòîì çà- ìåäëåíèÿ (Rf) (îáùàÿ ôàðìàêîïåéíàÿ ñòàòüÿ 2.2.2.36. Õðîìàòîãðàôè÷åñêèå ìåòîäû ðàçäåëå- íèÿ). Áóìàæíàÿ õðîìàòîãðàôèÿ ìîæåò èñïîëüçî- âàòüñÿ äëÿ èäåíòèôèêàöèè, èñïûòàíèÿ íà ÷èñòî- òó è êîëè÷åñòâåííîå îïðåäåëåíèå. ÂÎÑÕÎÄßÙÀß ÁÓÌÀÆÍÀß ÕÐÎÌÀÒÎÃÐÀÔÈß Îáîðóäîâàíèå. Îáîðóäîâàíèå ñîñòîèò èç ñòåêëÿííîé êàìåðû, ïî ðàçìåðó ñîîòâåòñòâóþ- ùåé èñïîëüçóåìîé õðîìàòîãðàôè÷åñêîé áóìàãå, ñ ïëîòíî ïðèøëèôîâàííîé êðûøêîé.  âåðõíåé ÷àñòè êàìåðû èìååòñÿ ñïåöèàëüíîå ïðèñïîñîá- ëåíèå, óäåðæèâàþùåå â ïîäâåøåííîì ñîñòîÿ- íèè õðîìàòîãðàôè÷åñêóþ áóìàãó è ñïîñîáíîå îïóñêàòü åå ïðè çàêðûòîé êàìåðå. Íà äíî êàìå- ðû ïîìåùàþò ëîäî÷êó ñ ïîäâèæíîé ôàçîé, â êî- òîðóþ îïóñêàþò êîíåö áóìàãè. Õðîìàòîãðàôè- ÷åñêóþ áóìàãó, ïðåäñòàâëÿþùóþ ñîáîé ïîäõî- äÿùóþ ôèëüòðîâàëüíóþ áóìàãó, ðàçðåçàþò â 61 Ðèñóíîê 2.1.2.24.-1. — Ïðîèçâîäíûé ñïåêòð âòîðîãî ïîðÿäêà ðàñòâîðà 0,02 % (îá/îá) òîëóîëà Ð â ìåòà- íîëå Ð íàïðàâëåíèè åå òåêñòóðû íà ïîëîñû äîñòàòî÷- íîé äëèíû è øèðèíîé íå ìåíåå 2,5 ñì. Ìåòîäèêà. Ëîäî÷êó çàïîëíÿþò ïîäâèæíîé ôàçîé äî îáðàçîâàíèÿ ñëîÿ ãëóáèíîé 2,5 ñì. Ïðè óêàçàíèè â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå ìåæ- äó ñòåíêàìè êàìåðû è ëîäî÷êè ïîìåùàþò õðî- ìàòîãðàôè÷åñêóþ áóìàãó.
Äëÿ íàñûùåíèÿ êàìå- ðó çàêðûâàþò êðûøêîé è âûäåðæèâàþò îáû÷íî â òå÷åíèå 24 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå îò 20 °Ñ äî 25 °Ñ. Êàìåðó òåðìîñòàòèðóþò ïðè äàííîé òåì- ïåðàòóðå â òå÷åíèå âñåãî èñïûòàíèÿ. Îòñòóïèâ îò êðàÿ 3 ñì, íà õðîìàòîãðàôè÷åñêîé áóìàãå êà- ðàíäàøîì ïðîâîäÿò ãîðèçîíòàëüíóþ ëèíèþ (ëèíèÿ ñòàðòà), íà êîòîðóþ ìèêðîïèïåòêîé íà- íîñÿò îáúåì ðàñòâîðà â ñîîòâåòñòâèè ñ îïèñàíè- åì â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. Ïîñêîëüêó äèàìåòð ïÿòíà íå äîëæåí ïðåâûøàòü 10 ìì, áîëüøîé îáúåì ðàñòâîðà íàíîñÿò â íåñêîëüêî ïðèåìîâ, ïîçâîëÿÿ êàæäîé ïîðöèè âûñîõíóòü ïåðåä ñëåäóþùèì íàíåñåíèåì. Ïðè ñîâìåñòíîì õðîìàòîãðàôèðîâàíèè íåñêîëüêèõ ðàñòâîðîâ ðàññòîÿíèå ìåæäó ïÿòíàìè íà ëèíèè ñòàðòà äîëæíî áûòü íå ìåíåå 3 ñì. Áóìàãó ïîìåùàþò â êàìåðó, çàêðûâàþò åå êðûøêîé è âûäåðæèâàþò â òå÷åíèå 1 ÷ 30 ìèí. Õðîìàòîãðàôèðóþò â òå÷å- íèå âðåìåíè èëè äî ðàññòîÿíèÿ, óêàçàííûõ â ÷à- ñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. Õðîìàòîãðàììó âûíèìàþò èç êàìåðû, ñóøàò íà âîçäóõå. Õðîìà- òîãðàôè÷åñêóþ áóìàãó çàùèùàþò îò ÿðêîãî ñâåòà â òå÷åíèå âñåãî ïðîöåññà ðàçäåëåíèÿ. ÍÈÑÕÎÄßÙÀß ÁÓÌÀÆÍÀß ÕÐÎÌÀÒÎÃÐÀÔÈß Îáîðóäîâàíèå. Îáîðóäîâàíèå ñîñòîèò èç ñòåêëÿííîé êàìåðû, ïî ðàçìåðó ñîîòâåòñòâóþ- ùåé èñïîëüçóåìîé õðîìàòîãðàôè÷åñêîé áóìàãå, ñ ïëîòíî ïðèøëèôîâàííîé êðûøêîé.  öåíòðå êðûøêè äîëæíî áûòü îòâåðñòèå äèàìåòðîì îêî- ëî 1,5 ñì, çàêðûòîå òÿæåëîé ñòåêëÿííîé ïëàñòè- íîé èëè ïðîáêîé.  âåðõíåé ÷àñòè êàìåðû ïîä- âåøèâàþò ëîäî÷êó äëÿ ïîäâèæíîé ôàçû. Íà êà- æäîé ñòîðîíå ëîäî÷êè ïàðàëëåëüíî è ÷óòü âûøå åå âåðõíèõ êðàåâ óñòàíàâëèâàþò äâà ñòåêëÿí- íûõ ðåãóëèðóþùèõ ñòåðæíÿ, óäåðæèâàþùèõ áóìàãó òàêèì îáðàçîì, ÷òîáû îíà íå ñîïðèêàñà- ëàñü ñî ñòåíêàìè êàìåðû. Õðîìàòîãðàôè÷åñêóþ áóìàãó, ïðåäñòàâëÿþùóþ ñîáîé ïîäõîäÿùóþ ôèëüòðîâàëüíóþ áóìàãó, ðàçðåçàþò â íàïðàâëå- íèè åå òåêñòóðû íà ïîëîñû äîñòàòî÷íîé äëèíû è øèðèíîé íå ìåíåå 2,5 ñì è íå áîëåå äëèíû ëî- äî÷êè. Ìåòîäèêà. Íà äíî êàìåðû ïîìåùàþò óêà- çàííóþ â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå ïîä- âèæíóþ ôàçó äî îáðàçîâàíèÿ ñëîÿ ãëóáèíîé 2,5 ñì, çàêðûâàþò êðûøêîé è âûäåðæèâàþò â òå÷åíèå 24 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå îò 20 °Ñ äî 25 °Ñ. Êàìåðó òåðìîñòàòèðóþò ïðè äàííîé òåìïåðàòó- ðå â òå÷åíèå âñåãî èñïûòàíèÿ. Êàðàíäàøîì ïðî- âîäÿò ëèíèþ ñòàðòà íà îäíîì êîíöå áóìàãè, îò- ñòóïèâ îò åå êðàÿ íà òàêîå ðàññòîÿíèå, ÷òîáû ëè- íèÿ íàõîäèëàñü íà íåñêîëüêî ñàíòèìåòðîâ âûøå ðåãóëèðóþùåãî ñòåðæíÿ è áûëà ïàðàëëåëüíà åìó ïîñëå çàêðåïëåíèÿ êîíöà áóìàãè â ëîäî÷êå. Îñòàëüíàÿ ÷àñòü ëèñòà áóìàãè äîëæíà ñâîáîäíî ñâèñàòü íàä ðåãóëèðóþùèì ñòåðæíåì. Íà ëè- íèþ ñòàðòà ìèêðîïèïåòêîé íàíîñÿò óêàçàííûé â ÷àñòíîé ìîíîãðàôèè îáúåì ðàñòâîðà. Ïî- ñêîëüêó äèàìåòð ïÿòíà íå äîëæåí ïðåâûøàòü 10 ìì, áîëüøîé îáúåì ðàñòâîðà íàíîñÿò â íå- ñêîëüêî ïðèåìîâ, ïîçâîëÿÿ êàæäîé ïîðöèè âû- ñîõíóòü ïåðåä ñëåäóþùèì íàíåñåíèåì. Ïðè ñî- âìåñòíîì õðîìàòîãðàôèðîâàíèè íåñêîëüêèõ ðàñòâîðîâ ðàññòîÿíèå ìåæäó ïÿòíàìè íà ëèíèè ñòàðòà äîëæíî áûòü íå ìåíåå 3 ñì. Õðîìàòîãðàììó ïîìåùàþò â êàìåðó, çàêðû- âàþò åå êðûøêîé è âûäåðæèâàþò â òå÷åíèå 1 ÷ 30 ìèí. Çàòåì ÷åðåç îòâåðñòèå â êðûøêå çàïîë- íÿþò ëîäî÷êó ïîäâèæíîé ôàçîé, çàêðûâàþò îò- âåðñòèå è õðîìàòîãðàôèðóþò â òå÷åíèå âðåìåíè èëè äî ðàññòîÿíèÿ, óêàçàííûõ â ÷àñòíîé ôàðìà- êîïåéíîé ñòàòüå. Õðîìàòîãðàììó âûíèìàþò èç êàìåðû è ñóøàò íà âîçäóõå.  ïðîöåññå ðàçäåëå- íèÿ õðîìàòîãðàôè÷åñêóþ áóìàãó çàùèùàþò îò ÿðêîãî ñâåòà. 201020026-2019 2.1.2.26.
Òîíêîñëîéíàÿ õðîìàòîãðàôèÿ Òîíêîñëîéíàÿ õðîìàòîãðàôèÿ (ÒÑÕ) ïðåä- ñòàâëÿåò ñîáîé ìåòîä ðàçäåëåíèÿ, îñíîâàííûé íà ïðîöåññàõ àäñîðáöèè, ðàñïðåäåëåíèÿ, èîííî- ãî îáìåíà èëè íà èõ êîìáèíàöèè è îñóùåñòâëÿ- åòñÿ ïîñðåäñòâîì ïåðåìåùåíèÿ â òîíêîì ñëîå (íåïîäâèæíîé ôàçå) îïðåäåëÿåìûõ âåùåñòâ (àíàëèòîâ), ðàñòâîðåííûõ â ðàñòâîðèòåëå èëè â ñîîòâåòñòâóþùåé ñìåñè ðàñòâîðèòåëåé (ïîä- âèæíîé ôàçå). Íåïîäâèæíàÿ ôàçà ñîñòîèò èç ïîäõîäÿùåãî ìàòåðèàëà, íàíåñåííîãî â âèäå òîíêîãî ñëîÿ è çàôèêñèðîâàííîãî íà ïîäëîæêå (ïëàñòèíêå) èç ñòåêëà, ìåòàëëà èëè ïîëèìåðà. 62 Ïåðåä õðîìàòîãðàôèðîâàíèåì ðàñòâîðû îïðå- äåëÿåìûõ âåùåñòâ íàíîñÿò íà ïëàñòèíêó. Óñîâåðøåíñòâîâàííûé ìåòîä, ïîçâîëÿþùèé äîñòèãàòü ëó÷øèõ ïîêàçàòåëåé ÷óâñòâèòåëüíî- ñòè è ýôôåêòèâíîñòè ðàçäåëåíèÿçà ñ÷åò èñïîëü- çîâàíèÿ ñïåöèàëüíûõ ïëàñòèíîê ñ áîëåå ìåëêèì ðàçìåðîì ÷àñòèö ñîðáåíòà, íîñèò íàçâàíèå âû- ñîêîýôôåêòèâíîé òîíêîñëîéíîé õðîìàòîãðàôèè (ÂÝÒÑÕ). ÎÁÎÐÓÄÎÂÀÍÈÅ Ïëàñòèíêè. Õðîìàòîãðàôèðîâàíèå ïðîâî- äÿò ñ èñïîëüçîâàíèåì ïëàñòèíîê, ïîëó÷åííûõ â ñîîòâåòñòâèè ñ óêàçàíèÿìè îáùåé ôàðìàêîïåé- íîé ñòàòüå 2.2.1.1. Ðåàêòèâû. Ïðè îïèñàíèè èñ- ïûòàíèé ðàçìåð ÷àñòèö ñèëèêàãåëÿ óêàçûâàåòñÿ ïîñëå åãî íàçâàíèÿ. Ïðåäâàðèòåëüíàÿ ïîäãîòîâêà ïëàñòèíîê. Ïðè íåîáõîäèìîñòè ïåðåä èñïîëüçîâàíèåì ïëà- ñòèíêè ëèáî ïðîìûâàþò ïóòåì õðîìàòîãðàôè- ðîâàíèÿ â ïîäõîäÿùåì ðàñòâîðèòåëå, ëèáî ïðîïèòûâàþò ïîñðåäñòâîì ýëþèðîâàíèÿ, ïîãðó- æåíèÿ èëè îïðûñêèâàíèÿ, ëèáî, ïðè íåîáõîäè- ìîñòè, àêòèâèðóþò, íàãðåâàÿ â ñóøèëüíîì øêà- ôó ïðè òåìïåðàòóðå 120 °C â òå÷åíèå 20 ìèí. Õðîìàòîãðàôè÷åñêàÿ êàìåðà äëÿ âåðòè- êàëüíîãî ýëþèðîâàíèÿ ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé åì- êîñòü ñ ïëîòíî ïîäîãíàííîé êðûøêîé è ïëî- ñêèì äíîì èëè äíîì ñ äâóìÿ æåëîáàìè èç èíåðòíîãî ïðîçðà÷íîãî ìàòåðèàëà, ñîîòâåòñò- âóþùèìè ïî ðàçìåðó èñïîëüçóåìûì ïëàñòèí- êàì. Äëÿ ãîðèçîíòàëüíîãî ýëþèðîâàíèÿ õðîìà- òîãðàôè÷åñêàÿ êàìåðà èìååò æåëîá äëÿ ïîäâèæ- íîé ôàçû è äîïîëíèòåëüíî ñîäåðæèò óñòðîéñòâî äëÿ ïîäà÷è ïîäâèæíîé ôàçû ê íå- ïîäâèæíîé ôàçå. Ìèêðîïèïåòêè, ìèêðîøïðèöû, êàëèáðî- âàííûå êàïèëëÿðû èëè äðóãèå óñòðîéñòâà, ïðèãîäíûå äëÿ íàíåñåíèÿ ðàñòâîðîâ. Óñòðîéñòâî äëÿ îáíàðóæåíèÿ ôëóîðåñ- öåíöèè. Äëÿ èçìåðåíèÿ íåïîñðåäñòâåííîé ôëóîðåñöåíöèè èëè îáíàðóæåíèÿ òóøåíèÿ ôëóîðåñöåíöèè. Ïðîÿâëÿþùèå óñòðîéñòâà è ðåàêòèâû. Äëÿ ïðîÿâëåíèÿ ðàçäåëåííûõ âåùåñòâ èñïîëü- çóþò ïîäõîäÿùèå óñòðîéñòâà, ïðèãîäíûå äëÿ íàíåñåíèÿ ðåàêòèâîâ íà ïëàñòèíêó (ïîñðåäñò- âîì îïðûñêèâàíèÿ, ïîãðóæåíèÿ èëè îáðàáîòêè ïàðàìè) è, â ñëó÷àå ïðèìåíèìîñòè, íàãðåâàíèÿ. Äîêóìåíòèðîâàíèå. Äîïóñêàåòñÿ èñïîëüçî- âàíèå óñòðîéñòâ, îáåñïå÷èâàþùèõ ðåãèñòðà- öèþ âèçóàëèçèðîâàííûõ õðîìàòîãðàìì, íàïðè- ìåð, ôîòîãðàôèðîâàíèå èëè ñîçäàíèå êîìïüþ- òåðíîãî ôàéëà. ÌÅÒÎÄ Íàíåñåíèå. Íà ëèíèþ, ïàðàëëåëüíóþ íèæ- íåìó êðàþ ïëàñòèíêè, íà ñîîòâåòñòâóþùåì ðàñ- ñòîÿíèè îò åå íèæíåãî êðàÿ è ñòîðîí íàíîñÿò óêàçàííûå îáúåìû ðàñòâîðîâ; ðàññòîÿíèå ìåæ- äó öåíòðàìè êðóãëûõ ïÿòåí äîëæíî ñîñòàâëÿòü íå ìåíåå 10 ìì (5 ìì äëÿ ïëàñòèíîê äëÿ ÂÝÒÑÕ), ðàññòîÿíèå ìåæäó êðàÿìè ïîëîñ — íå ìåíåå 5 ìì (2 ìì äëÿ ïëàñòèíîê äëÿ ÂÝÒÑÕ). Ðàñòâîðû íàíîñÿò ìèíèìàëüíûìè ïîðöèÿìè äëÿ ïîëó÷åíèÿ ïÿòåí äèàìåòðîì 2 – 5 ìì (1 – 2 ìì äëÿ ïëàñòèíîê äëÿ ÂÝÒÑÕ) èëè ïîëîñ äëèíîé 10 – 20 ìì (5 – 10 ìì äëÿ ïëàñòèíîê äëÿ ÂÝÒÑÕ) è øèðèíîé 1 – 2 ìì. Åñëè â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå ïðå- äóñìîòðåíî èñïîëüçîâàíèå íàðÿäó ñ îáû÷íûìè ïëàñòèíêàìè ïëàñòèíîê äëÿ ÂÝÒÑÕ, ðàáî÷èå óñëîâèÿ äëÿ âûñîêîýôôåêòèâíîé òîíêîñëîéíîé õðîìàòîãðàôèè óêàçûâàþò â êâàäðàòíûõ ñêîá- êàõ [ ] ïîñëå óêàçàíèÿ óñëîâèé äëÿ îáû÷íûõ ïëàñòèíîê. Âåðòèêàëüíîå õðîìàòîãðàôèðîâàíèå. Ñòåíêè õðîìàòîãðàôè÷åñêîé êàìåðû âûñòèëàþò ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãîé.
Ïîäâèæíóþ ôàçó íà- ëèâàþò â êàìåðó â êîëè÷åñòâå, äîñòàòî÷íîì äëÿ òîãî, ÷òîáû ïîñëå ñìà÷èâàíèÿ ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãè ïîêðûòü äíî êàìåðû ñëîåì æèäêîñòè, íåîáõîäèìûì äëÿ õðîìàòîãðàôèðîâàíèÿ. Äëÿ íàñûùåíèÿ õðîìàòîãðàôè÷åñêóþ êàìåðó ñ ïîäâèæíîé ôàçîé çàêðûâàþò êðûøêîé è âûäåð- æèâàþò ïðè òåìïåðàòóðå îò 20 °Ñ äî 25 °Ñ â òå- ÷åíèå 1 ÷. Ïðè îòñóòñòâèè äðóãèõ óêàçàíèé â ÷à- ñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå õðîìàòîãðàôèðî- âàíèå ïðîâîäÿò â íàñûùåííîé êàìåðå. Íàíîñÿò óêàçàííûå îáúåìû ðàñòâîðîâ êàê îïèñàíî âûøå. Ïîñëå èñïàðåíèÿ ðàñòâîðèòåëåé èç íàíå- ñåííûõ ïðîá ïëàñòèíêó ïîìåùàþò â õðîìàòî- ãðàôè÷åñêóþ êàìåðó êàê ìîæíî áîëåå âåðòè- êàëüíî, ñëåäÿ çà òåì, ÷òîáû ïÿòíà èëè ïîëîñû íàõîäèëèñü âûøå ïîâåðõíîñòè ïîäâèæíîé ôàçû. Êàìåðó çàêðûâàþò, îñòàâëÿþò åå ïðè òåì- ïåðàòóðå îò 20 °Ñ äî 25 °Ñ â çàùèùåííîì îò ïî- ïàäàíèÿ ïðÿìûõ ñîëíå÷íûõ ëó÷åé ìåñòå. Ïîñëå òîãî, êàê ïîäâèæíàÿ ôàçà ïðîéäåò ðàññòîÿíèå, óêàçàííîå â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå, ïëàñòèíêó âûíèìàþò, ñóøàò è îáíàðóæèâàþò ïÿòíà ñïîñîáîì, óêàçàííûì â ÷àñòíîé ôàðìàêî- ïåéíîé ñòàòüå. 63  ñëó÷àå äâóìåðíîé õðîìàòîãðàôèè ïîñëå ïåðâîãî õðîìàòîãðàôèðîâàíèÿ ïëàñòèíêó ñóøàò è âûïîëíÿþò âòîðîå õðîìàòîãðàôèðîâàíèå â íà- ïðàâëåíèè, ïåðïåíäèêóëÿðíîì ïåðâîìó. Ãîðèçîíòàëüíîå õðîìàòîãðàôèðîâàíèå. Íàíîñÿò óêàçàííûå îáúåìû ðàñòâîðîâ êàê îïè- ñàíî âûøå. Ïîñëå èñïàðåíèÿ ðàñòâîðèòåëåé èç íàíåñåííûõ ïðîá â æåëîá õðîìàòîãðàôè÷åñêîé êàìåðû ââîäÿò ñ ïîìîùüþ øïðèöà èëè ïèïåòêè äîñòàòî÷íîå êîëè÷åñòâî ïîäâèæíîé ôàçû, ïîìå- ùàþò ïëàñòèíêó, óáåæäàÿñü, ÷òî îíà ðàñïîëîæå- íà ãîðèçîíòàëüíî è ïîäñîåäèíåíà ê óñòðîéñòâó äëÿ ïîäà÷è ïîäâèæíîé ôàçû â ñîîòâåòñòâèè ñ èíñòðóêöèÿìè ïðîèçâîäèòåëÿ. Åñëè óêàçàíî â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå, ïëàñòèíêó ýëþèðóþò, íà÷èíàÿ îäíîâðåìåííî ñ äâóõ êîí- öîâ. Êàìåðó çàêðûâàþò è ïðîâîäÿò õðîìàòîãðà- ôèðîâàíèå ïðè òåìïåðàòóðå îò 20 °Ñ äî 25 °Ñ. Ïîñëå òîãî, êàê ïîäâèæíàÿ ôàçà ïðîéäåò ðàñ- ñòîÿíèå, óêàçàííîå â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå, ïëàñòèíêó âûíèìàþò, ñóøàò è îáíàðó- æèâàþò ïÿòíà óêàçàííûì ñïîñîáîì.  ñëó÷àå äâóìåðíîé õðîìàòîãðàôèè ïîñëå ïåðâîãî õðîìàòîãðàôèðîâàíèÿ ïëàñòèíêó ñóøàò è âûïîëíÿþò âòîðîå õðîìàòîãðàôèðîâàíèå â íà- ïðàâëåíèè, ïåðïåíäèêóëÿðíîì ïåðâîìó. Ñòóïåí÷àòîå õðîìàòîãðàôèðîâàíèå. Íà- íîñÿò óêàçàííûå îáúåìû ðàñòâîðîâ êàê îïèñàíî âûøå.  ïðîöåññå õðîìàòîãðàôèðîâàíèÿ ñòó- ïåí÷àòî èçìåíÿþò ñîñòàâ ïîäâèæíîé ôàçû ëèáî èíûå óñëîâèÿ õðîìàòîãðàôèðîâàíèÿ. Íàïðèìåð, ñòóïåí÷àòîå õðîìàòîãðàôèðîâàíèå ñ ðàçëè÷íû- ìè ïîäâèæíûìè ôàçàìè ïðèìåíÿþò â ñëó÷àå, åñëè äëÿ ðàçäåëåíèÿ àíàëèçèðóåìîé ñìåñè íå- äîñòàòî÷íî õðîìàòîãðàôèðîâàíèÿ ñ èñïîëüçîâà- íèåì ëèøü îäíîé ïîäâèæíîé ôàçû. ÂÈÇÓÀËÜÍÀß ÎÖÅÍÊÀ Èäåíòèôèêàöèÿ. Âèçóàëüíî ñðàâíèâàþò öâåò, ðàçìåð è êîýôôèöèåíò çàìåäëåíèÿ (RF) ëèáî êîýôôèöèåíò Rst îñíîâíîãî ïÿòíà íà õðî- ìàòîãðàììå èñïûòóåìîãî ðàñòâîðà ñ ñîîòâåòñò- âóþùèì ïÿòíîì íà õðîìàòîãðàììå ðàñòâîðà ñðàâíåíèÿ. Êîýôôèöèåíò çàìåäëåíèÿ îïðåäåëÿþò êàê îòíîøåíèå ðàññòîÿíèÿ îò òî÷êè íàíåñåíèÿ ïðî- áû äî öåíòðà ïÿòíà è ðàññòîÿíèÿ, ïðîéäåííîãî ôðîíòîì ðàñòâîðèòåëÿ îò òî÷êè íàíåñåíèÿ ïðî- áû (ñì. îáùóþ ôàðìàêîïåéíóþ ñòàòüþ 2.1.2.36.). Ïðîâåðêà ðàçäåëÿþùåé ñïîñîáíîñòè íåïîä- âèæíîé ôàçû äëÿ èäåíòèôèêàöèè. Îáû÷íî äëÿ îöåíêè ïðèãîäíîñòè äîñòàòî÷íî èñïûòàíèÿ íà ïðèãîäíîñòü íåïîäâèæíîé ôàçû, îïèñàííîãî â îáùåé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå 2.2.1.1. Ðåàêòèâû.  îñîáûõ ñëó÷àÿõ äîïîëíèòåëüíûå òðåáîâàíèÿ óêàçûâàþò â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. Èñïûòàíèå íà ðîäñòâåííûå ïðèìåñè.
Äî- ïîëíèòåëüíîå(ûå) ïÿòíî(à) íà õðîìàòîãðàììå èñïûòóåìîãî ðàñòâîðà ñðàâíèâàþò âèçóàëüíî ñ ñîîòâåòñòâóþùèì(è) ïÿòíîì(àìè) íà õðîìàòî- ãðàììå ðàñòâîðà ñðàâíåíèÿ, ñîäåðæàùåãî ïðè- ìåñü (ïðèìåñè), èëè ðàñòâîðà ñðàâíåíèÿ, ïðèãî- òîâëåííîãî ïóòåì ðàçâåäåíèÿ èñïûòóåìîãî ðàñ- òâîðà. Ïðîâåðêà ðàçäåëÿþùåé ñïîñîáíîñòè. Òðå- áîâàíèÿ äëÿ ïðîâåðêè ðàçäåëÿþùåé ñïîñîáíî- ñòè ïðèâîäÿò â ñîîòâåòñòâóþùèõ ÷àñòíûõ ôàð- ìàêîïåéíûõ ñòàòüÿõ. Ïðîâåðêà ÷óâñòâèòåëüíîñòè. ×óâñòâèòåëü- íîñòü ñ÷èòàåòñÿ óäîâëåòâîðèòåëüíîé, åñëè íà õðîìàòîãðàììå íàèáîëåå ðàçâåäåííîãî ðàñòâîðà ñðàâíåíèÿ ÷åòêî îáíàðóæèâàåòñÿ ïÿòíî èëè ïî- ëîñà. ÊÎËÈ×ÅÑÒÂÅÍÍÛÅ ÈÇÌÅÐÅÍÈß Òðåáîâàíèÿ ê ðàçðåøåíèþ è ðàçäåëåíèþ ïðèâîäÿò â ñîîòâåòñòâóþùèõ ÷àñòíûõ ôàðìàêî- ïåéíûõ ñòàòüÿõ.  òîì ñëó÷àå, êîãäà âåùåñòâà, ðàçäåëÿåìûå ìåòîäîì òîíêîñëîéíîé õðîìàòîãðàôèè, ïîãëî- ùàþò èëè ôëóîðåñöèðóþò â óëüòðàôèîëåòîâîì èëè âèäèìîì ñâåòå, èõ ìîæíî êîëè÷åñòâåííî îïðåäåëèòü íåïîñðåäñòâåííî íà ïëàñòèíêå, èñ- ïîëüçóÿ ïîäõîäÿùåå îáîðóäîâàíèå. Äëÿ ýòîãî èçìåðÿþò îòðàæåíèå èëè ïðîïóñêàíèå ïàäàþ- ùåãî ñâåòà, ïåðåäâèãàÿ ïëàñòèíêó èëè èçìåðÿþ- ùåå óñòðîéñòâî. Àíàëîãè÷íûì îáðàçîì, èñ- ïîëüçóÿ ïîäõîäÿùåå îïòè÷åñêîå îáîðóäîâàíèå, ìîæíî èçìåðÿòü ôëóîðåñöåíöèþ. Âåùåñòâà, ñî- äåðæàùèå ðàäèîíóêëèäû, ìîãóò áûòü êîëè÷åñò- âåííî îïðåäåëåíû òðåìÿ ñïîñîáàìè: – íåïîñðåäñòâåííî íà ïëàñòèíêå — ïåðå- äâèãàÿ ïëàñòèíêè âäîëü ïîäõîäÿùåãî ñ÷åò÷èêà ðàäèîàêòèâíîñòè èëè ñ÷åò÷èêà ðàäèîàêòèâíî- ñòè âäîëü ïëàñòèíû (ñì. îáùóþ ôàðìàêîïåé- íóþ ñòàòüþ Ðàäèîôàðìàöåâòè÷åñêèå ïðåïàðà- òû); – ðàçðåçàíèåì ïëàñòèíêè íà ïîëîñû è èçìå- ðåíèåì ðàäèîàêòèâíîñòè íà êàæäîé ïîëîñå, èñ- ïîëüçóÿ ïîäõîäÿùèé ñ÷åò÷èê ðàäèîàêòèâíîñòè; – ñîñêðåáàíèåì íåïîäâèæíîé ôàçû, ðàñòâî- ðåíèåì åå â ïîäõîäÿùåì ñöèíòèëëÿöèîííîì êîêòåéëå è èçìåðåíèåì ðàäèîàêòèâíîñòè ñ èñ- 64 ïîëüçîâàíèåì æèäêîñòíîãî ñöèíòèëëÿöèîííîãî ñ÷åò÷èêà. Îáîðóäîâàíèå. Îáîðóäîâàíèå äëÿ èçìåðå- íèé íåïîñðåäñòâåííî íà ïëàñòèíêå âêëþ÷àåò â ñåáÿ: – óñòðîéñòâî äëÿ òî÷íîãî íàíåñåíèÿ â îïðå- äåëåííîì ìåñòå ïëàñòèíêè íåîáõîäèìîãî êîëè- ÷åñòâà âåùåñòâà; – ìåõàíè÷åñêîå óñòðîéñòâî äëÿ ïåðåäâèæå- íèÿ ïëàñòèíêè èëè èçìåðèòåëüíîãî óñòðîéñòâà âäîëü îñåé Õ èëè Y; – ðåãèñòðèðóþùåå óñòðîéñòâî è èíòåãðàòîð èëè êîìïüþòåð; – äëÿ âåùåñòâ, ïîãëîùàþùèõ èëè ôëóîðåñ- öèðóþùèõ â óëüòðàôèîëåòîâîì èëè âèäèìîì ñâåòå: äëÿ èçìåðåíèÿ îòðàæåíèÿ èëè ïðîïóñêà- íèÿ èñïîëüçóþòñÿ ôîòîìåòð ñ èñòî÷íèêîì ñâå- òà, îïòè÷åñêîå óñòðîéñòâî, ãåíåðèðóþùåå ìî- íîõðîìàòè÷åñêèé ñâåò, è ôîòîýëåìåíò ñîîòâåò- ñòâóþùåé ÷óâñòâèòåëüíîñòè; â òîì ñëó÷àå, êîãäà èçìåðÿåòñÿ ôëóîðåñöåíöèÿ, òðåáóåòñÿ äî- ïîëíèòåëüíî ìîíîõðîìàòè÷åñêèé ôèëüòð äëÿ âûáîðà ñîîòâåòñòâóþùåé ñïåêòðàëüíîé îáëàñòè èçëó÷àåìîãî ñâåòà; – äëÿ âåùåñòâ, ñîäåðæàùèõ ðàäèîíóêëèäû: ïîäõîäÿùèé ñ÷åò÷èê ðàäèîàêòèâíîñòè; äëÿ íåãî íåîáõîäèìî ïðîâåðèòü ëèíåéíîñòü äèàïàçîíà. Ìåòîäèêà. Ãîòîâÿò ðàñòâîð èñïûòóåìîãî îáðàçöà (èñïûòóåìûé ðàñòâîð) â ñîîòâåòñòâèè ñ óêàçàíèÿìè â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå è, ïðè íåîáõîäèìîñòè, ðàñòâîðû ñòàíäàðòíûõ îá- ðàçöîâ àíàëèçèðóåìûõ âåùåñòâ (ðàñòâîðû ñðàâ- íåíèÿ), èñïîëüçóÿ òîò æå ðàñòâîðèòåëü, ÷òî è äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ èñïûòóåìîãî ðàñòâîðà. Íà ïëàñòèíêó íàíîñÿò îäèíàêîâûå îáúåìû êàæäîãî èç ðàñòâîðîâ è õðîìàòîãðàôèðóþò. Âåùåñòâà, ïîãëîùàþùèå èëè ôëóîðåñöè- ðóþùèå â óëüòðàôèîëåòîâîì èëè âèäèìîì ñâå- òå. Ãîòîâÿò è íàíîñÿò íå ìåíåå òðåõ ðàñòâîðîâ ñðàâíåíèÿ, êîíöåíòðàöèè êîòîðûõ îõâàòûâàþò ïðåäïîëàãàåìîå çíà÷åíèå êîíöåíòðàöèè èñïû- òóåìîãî ðàñòâîðà (îêîëî 80 %, 100 % è 120 % îò ýòîé êîíöåíòðàöèè). Îáðàáàòûâàþò, ïðè íåîá- õîäèìîñòè, óêàçàííûì ðåàêòèâîì è ðåãèñòðèðó- þò îòðàæåíèå, ïðîïóñêàíèå èëè ôëóîðåñöåí- öèþ íà õðîìàòîãðàììàõ èñïûòóåìîãî ðàñòâîðà è ðàñòâîðîâ ñðàâíåíèÿ.
Ïî ïîëó÷åííûì äàííûì ðàññ÷èòûâàþò êîëè÷åñòâî âåùåñòâà â èñïûòóå- ìîì ðàñòâîðå. Âåùåñòâà, ñîäåðæàùèå ðàäèîíóêëèäû. Ãî- òîâÿò è íàíîñÿò èñïûòóåìûé ðàñòâîð, ñîäåðæà- ùèé îêîëî 100 % ïðåäïîëàãàåìîãî çíà÷åíèÿ êîíöåíòðàöèè. Èçìåðÿþò ðàäèîàêòèâíîñòü êàê ôóíêöèþ äëèíû ïóòè è çàïèñûâàþò çíà÷åíèå ðàäèîàêòèâíîñòè êàæäîãî ïîëó÷åííîãî ïèêà â ïðîöåíòàõ îò ñóììàðíîé ðàäèîàêòèâíîñòè. Êðèòåðèè îöåíêè ïðèãîäíîñòè ñèñòåìû ïðèâåäåíû â îáùåé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå 2.1.2.36. Õðîìàòîãðàôè÷åñêèå ìåòîäû ðàçäåëå- íèÿ.  äàííîé ñòàòüå òàêæå ïðèâåäåíû ïðåäåëû, â êîòîðûõ ìîãóò êîððåêòèðîâàòüñÿ ïàðàìåòðû õðîìàòîãðàôè÷åñêîé ñèñòåìû äëÿ ñîîòâåòñòâèÿ êðèòåðèÿì åå ïðèãîäíîñòè. 201020027-2019 2.1.2.27. Ãàçîâàÿ õðîìàòîãðàôèÿ Ãàçîâàÿ õðîìàòîãðàôèÿ (ÃÕ) ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ìåòîä õðîìàòîãðàôè÷åñêîãî ðàçäåëåíèÿ, îñíîâàííûé íà ðàçëè÷íîì ðàñïðåäåëåíèè âå- ùåñòâ ìåæäó äâóìÿ íåñìåøèâàþùèìèñÿ ôàçà- ìè, â êîòîðîì ãàç-íîñèòåëü, ÿâëÿþùèéñÿ ïîä- âèæíîé ôàçîé, ïðîõîäèò ÷åðåç íåïîäâèæíóþ ôàçó, íàõîäÿùóþñÿ â êîëîíêå. Ìåòîä ìîæåò áûòü ïðèìåíåí ê ëåòó÷èì èëè ëåòó÷èì ïðè íà- ãðåâàíèè âåùåñòâàì èëè èõ ïðîèçâîäíûì. Ãàçîâàÿ õðîìàòîãðàôèÿ îñíîâàíà íà ìåõà- íèçìàõ àäñîðáöèè, ðàñïðåäåëåíèÿ ïî ìàññàì èëè ðàçìåðàì (ýêñêëþçèè). ÏÐÈÁÎÐ Ïðèáîð ñîñòîèò èç áëîêà ââîäà ïðîá (èíæåê- òîðà), õðîìàòîãðàôè÷åñêîé êîëîíêè, ïîìåùåí- íîé â òåðìîñòàò, äåòåêòîðà è ðåãèñòðèðóþùåãî óñòðîéñòâà (èíòåãðèðóþùåå óñòðîéñòâî ñî ñïå- öèàëüíûì ïðîãðàììíûì îáåñïå÷åíèåì èëè ñà- ìîïèñåö). Ãàç-íîñèòåëü ïðîõîäèò ñ çàäàííîé ñêîðîñòüþ èëè äàâëåíèåì ÷åðåç êîëîíêó, à çàòåì ÷åðåç äåòåêòîð. Îïðåäåëåíèå ïðîâîäÿò ïðè ïîñòîÿííîé òåì- ïåðàòóðå êîëîíêè èëè â ñîîòâåòñòâèè ñ çàäàí- íîé òåìïåðàòóðíîé ïðîãðàììîé. ÁËÎÊ ÂÂÎÄÀ ÏÐÎÁ (ÈÍÆÅÊÒÎÐ) Ïðÿìîé ââîä ðàñòâîðîâ ÿâëÿåòñÿ îáû÷íûì ñïîñîáîì ââîäà ïðîá, ïðè îòñóòñòâèè äðóãèõ óêàçàíèé â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. Ââîä ïðîáû ìîæåò îñóùåñòâëÿòüñÿ ëèáî íåïîñðåäñò- âåííî â íà÷àëî êîëîíêè ñ èñïîëüçîâàíèåì øïðèöà èëè èíæåêòîðíîãî êëàïàíà, ëèáî â èñ- ïàðèòåëü, êîòîðûé ìîæåò îñíàùàòüñÿ äåëèòå- ëåì ïîòîêà. 65 Ââîä ïàðîâîé ôàçû ìîæåò îñóùåñòâëÿòüñÿ ñ èñïîëüçîâàíèåì ñòàòè÷åñêîé èëè äèíàìè÷åñêîé ïàðîôàçíîé ñèñòåìû ââîäà. Äèíàìè÷åñêàÿ ïàðîôàçíàÿ (ïðîäóâêà è ëî- âóøêà) ñèñòåìà ââîäà âêëþ÷àåò áàðáîòàæíóþ óñòàíîâêó, ïðè ïîìîùè êîòîðîé ëåòó÷èå âåùå- ñòâà â ðàñòâîðå ïðîäóâàþòñÿ ÷åðåç ïîãëîòèòåëü- íóþ òðóáêó ïðè íåâûñîêîé òåìïåðàòóðå. Óäåð- æèâàåìûå âåùåñòâà çàòåì äåñîðáèðóþòñÿ â ïîäâèæíóþ ôàçó ïðè áûñòðîì íàãðåâàíèè ïî- ãëîòèòåëüíîé òðóáêè. Ñòàòè÷åñêàÿ ïàðîôàçíàÿ ñèñòåìà ââîäà âêëþ÷àåò òåðìîñòàòèðóåìóþ íàãðåâàþùóþ êà- ìåðó äëÿ îáðàçöîâ, â êîòîðóþ ïîìåùåíû çàêðû- òûå ôëàêîíû ñ òâåðäûìè èëè æèäêèìè îáðàçöà- ìè íà ôèêñèðîâàííûé ïåðèîä âðåìåíè, ïîçâî- ëÿþùèé ëåòó÷èì êîìïîíåíòàì îáðàçöà äîñòè÷ü ðàâíîâåñèÿ ìåæäó íåãàçîâîé è ïàðîâîé ôàçàìè. Ïîñëå äîñòèæåíèÿ ðàâíîâåñèÿ çàäàííîå êîëè- ÷åñòâî ïàðîâîé ôàçû èç ôëàêîíîâ ââîäèòñÿ â ãà- çîâûé õðîìàòîãðàô. ÍÅÏÎÄÂÈÆÍÀß ÔÀÇÀ Òèïû êîëîíîê, çàïîëíåííûõ íåïîäâèæíûìè ôàçàìè: – êàïèëëÿðíûå, êàê ïðàâèëî, êâàðöåâûå êî- ëîíêè, âíóòðåííèå ñòåíêè êîòîðûõ ïîêðûòû íå- ïîäâèæíîé ôàçîé; – íàáèâíûå êîëîíêè, çàïîëíåííûå èíåðò- íûìè ÷àñòèöàìè, èìïðåãíèðîâàííûìè íåïîä- âèæíîé ôàçîé; – íàáèâíûå êîëîíêè, çàïîëíåííûå òâåðäîé íåïîäâèæíîé ôàçîé. Êàïèëëÿðíûå êîëîíêè, êàê ïðàâèëî, èìåþò âíóòðåííèé äèàìåòð îò 0,1 ìì äî 0,53 ìì è äëè- íó îò 5 ì äî 60 ì. Æèäêîñòü èëè íåïîäâèæíàÿ ôàçà, êîòîðàÿ ìîæåò áûòü õèìè÷åñêè ñâÿçàíà ñ âíóòðåííåé ïîâåðõíîñòüþ, ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ïëåíêó òîëùèíîé îò 0,1 ìêì äî 5,0 ìêì. Íàáèâíûå êîëîíêè, èçãîòîâëåííûå èç ñòåêëà èëè ìåòàëëà, èìåþò äëèíó îáû÷íî îò 1 ì äî 3 ì è âíóòðåííèé äèàìåòð îò 2 ìì äî 4 ìì.
Íåïîä- âèæíàÿ ôàçà îáû÷íî ñîñòîèò èç ïîðèñòûõ ïîëè- ìåðîâ èëè òâåðäûõ íîñèòåëåé, èìïðåãíèðîâàí- íûõ æèäêîé ôàçîé. Âî èçáåæàíèå îáðàçîâàíèÿ ïèêà ñ ðàñòÿíóòûì çàäíèì ôðîíòîì («õâîñòîì») ïðè îïðåäåëåíèè ïîëÿðíûõ ñîåäèíåíèé íà êî- ëîíêàõ, çàïîëíåííûõ íåïîäâèæíîé ôàçîé ñ íèç- êîé åìêîñòüþ è íèçêîé ïîëÿðíîñòüþ, ñëåäóåò èñïîëüçîâàòü èíåðòíûå íîñèòåëè. Ðåàêöèîííàÿ ñïîñîáíîñòü íîñèòåëåé ìîæåò áûòü ñíèæåíà ïóòåì ñèëàíèçàöèè, ïðåäøåñò- âóþùåé íàíåñåíèþ æèäêîé ôàçû. Îáû÷íî èñïîëüçóþò îáðàáîòàííûé êèñëîòîé è ïðîêà- ëåííûé äèàòîìèò. Ðàçìåð ÷àñòèö ìîæåò áûòü ðàçíûé, íî íàèáîëåå ÷àñòî èñïîëüçóþòñÿ ÷àñòè- öû ðàçìåðîì îò 150 ìêì äî 180 ìêì è îò 125 ìêì äî 150 ìêì. ÏÎÄÂÈÆÍÀß ÔÀÇÀ Ñêîðîñòü ïîòîêà ãàçà-íîñèòåëÿ âëèÿåò íà âðåìÿ óäåðæèâàíèÿ è õàðàêòåðèñòèêè ïèêà; âðå- ìÿ óäåðæèâàíèÿ ïðÿìî ïðîïîðöèîíàëüíî äëèíå êîëîíêè, à ðàçðåøåíèå ïðîïîðöèîíàëüíî êâàä- ðàòíîìó êîðíþ èç äëèíû êîëîíêè. Äëÿ íàáèâ- íûõ êîëîíîê ñêîðîñòü ïîòîêà ãàçà-íîñèòåëÿ îáû÷íî âûðàæàþò â ìèëëèëèòðàõ â ìèíóòó ïðè àòìîñôåðíîì äàâëåíèè è êîìíàòíîé òåìïåðàòó- ðå. Ñêîðîñòü ïîòîêà èçìåðÿåòñÿ ïðè ðàáî÷åé òåìïåðàòóðå êîëîíêè íà âûõîäå èç äåòåêòîðà ñ ïîìîùüþ êàëèáðîâàííîãî ìåõàíè÷åñêîãî óñò- ðîéñòâà èëè ïåííîãî èçìåðèòåëÿ. Ëèíåéíàÿ ñêî- ðîñòü ãàçà-íîñèòåëÿ ÷åðåç íàáèâíóþ êîëîíêó îáðàòíî ïðîïîðöèîíàëüíà êîðíþ êâàäðàòíîìó èç âíóòðåííåãî äèàìåòðà êîëîíêè äëÿ çàäàííîãî îáúåìà ïîòîêà. Ñêîðîñòè ïîòîêà 60 ìë/ìèí ïðè âíóòðåííåì äèàìåòðå êîëîíêè 4 ìì è 15 ìë/ìèí ïðè âíóòðåííåì äèàìåòðå 2 ìì äàþò èäåíòè÷- íûå ëèíåéíûå ñêîðîñòè è, ñëåäîâàòåëüíî, áëèç- êèå âðåìåíà óäåðæèâàíèÿ.  êà÷åñòâå ãàçà-íîñèòåëÿ äëÿ íàáèâíûõ êî- ëîíîê îáû÷íî èñïîëüçóþò ãåëèé èëè àçîò, äëÿ êàïèëëÿðíûõ — àçîò, ãåëèé è âîäîðîä. ÄÅÒÅÊÒÎÐÛ Îáû÷íî èñïîëüçóþò ïëàìåííî-èîíèçàöèîí- íûå äåòåêòîðû; êðîìå ýòîãî, â çàâèñèìîñòè îò öåëè àíàëèçà ìîãóò ïðèìåíÿòüñÿ ñëåäóþùèå òèïû äåòåêòîðîâ: ýëåêòðîííîãî çàõâàòà, àçîò- íî-ôîñôîðíûé, ìàññ-ñïåêòðîìåòðè÷åñêèé, òåð- ìîêîíäóêòîìåòðè÷åñêèé, ÈÊ-ñïåêòðîôîòîìåò- ðè÷åñêèé ñ Ôóðüå-ïðåîáðàçîâàíèåì è äðóãèå. ÌÅÒÎÄ Êîëîíêó, áëîê ââîäà ïðîáû è äåòåêòîð óðàâ- íîâåøèâàþò ïðè óêàçàííîé â ÷àñòíîé ôàðìàêî- ïåéíîé ñòàòüå òåìïåðàòóðå è ñêîðîñòè ãàçà-íî- ñèòåëÿ äî ïîëó÷åíèÿ ñòàáèëüíîé áàçîâîé ëè- íèè. Ãîòîâÿò èñïûòóåìûé(å) ðàñòâîð(û) è ðàñòâîð(û) ñðàâíåíèÿ, êàê óêàçàíî â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. Ðàñòâîðû íå äîëæíû ñî- äåðæàòü òâåðäûõ ÷àñòèö. Êðèòåðèè îöåíêè ïðèãîäíîñòè õðîìàòîãðà- ôè÷åñêîé ñèñòåìû îïèñàíû â îáùåé ôàðìàêî- 66 ïåéíîé ñòàòüå 2.1.2.36. Õðîìàòîãðàôè÷åñêèå ìåòîäû ðàçäåëåíèÿ.  äàííîé ñòàòüå òàêæå ïðè- âåäåíû ïðåäåëû, â êîòîðûõ ìîãóò êîððåêòèðî- âàòüñÿ ïàðàìåòðû õðîìàòîãðàôè÷åñêîé ñèñòåìû äëÿ ñîîòâåòñòâèÿ êðèòåðèÿì åå ïðèãîäíîñòè. Ñòàòè÷åñêàÿ ïàðîôàçíàÿ ãàçîâàÿ õðîìàòî- ãðàôèÿ Ñòàòè÷åñêàÿ ïàðîôàçíàÿ ãàçîâàÿ õðîìàòî- ãðàôèÿ ÿâëÿåòñÿ ìåòîäîì, íàèáîëåå ïîäõîäÿ- ùèì äëÿ ðàçäåëåíèÿ è îïðåäåëåíèÿ ëåòó÷èõ ñî- åäèíåíèé, êîòîðûå ïðèñóòñòâóþò â òâåðäûõ èëè æèäêèõ îáðàçöàõ. Ìåòîä îñíîâàí íà àíàëèçå ïà- ðîâîé ôàçû, íàõîäÿùåéñÿ â ðàâíîâåñèè ñ òâåð- äîé èëè æèäêîé ôàçîé. ÏÐÈÁÎÐ Ïðèáîð ñîñòîèò èç ãàçîâîãî õðîìàòîãðàôà, ñíàáæåííîãî áëîêîì äëÿ ââîäà èñïûòóåìîãî îá- ðàçöà, êîòîðûé ìîæåò áûòü ñâÿçàí ñ ìîäóëåì àâ- òîìàòè÷åñêîãî êîíòðîëÿ äàâëåíèÿ è òåìïåðàòó- ðû. Ïðè íåîáõîäèìîñòè èñïîëüçóþò óñòðîéñòâî äëÿ óäàëåíèÿ ðàñòâîðèòåëåé. Èñïûòóåìûé îáðàçåö âíîñÿò âî ôëàêîí, ñíàáæåííûé ïîäõîäÿùåé ïðîáêîé è êëàïàííîé ñèñòåìîé, êîòîðàÿ ðåãóëèðóåò ïðîõîæäåíèå ãà- çà-íîñèòåëÿ. Ôëàêîí ïîìåùàþò â òåðìîñòàòè- ðóåìóþ êàìåðó ñ òåìïåðàòóðîé, óñòàíàâëèâàå- ìîé â ñîîòâåòñòâèè ñî ñâîéñòâàìè èñïûòóåìîãî îáðàçöà.
Ôëàêîí âûäåðæèâàþò ïðè çàäàííîé òåìïåðàòóðå â òå÷åíèå âðåìåíè, äîñòàòî÷íîãî äëÿ óñòàíîâëåíèÿ ðàâíîâåñèÿ ìåæäó òâåðäîé èëè æèäêîé ôàçîé è ïàðîâîé ôàçîé. Âî ôëàêîí ââîäÿò ãàç-íîñèòåëü è ïî èñòå÷å- íèè óêàçàííîãî âðåìåíè îòêðûâàþò êëàïàí, ÷òîáû ãàç ïîñòóïàë â õðîìàòîãðàôè÷åñêóþ êî- ëîíêó, ïåðåíîñÿ ñ ñîáîé ïåðåøåäøèå â ïàðîâóþ ôàçó êîìïîíåíòû. Âìåñòî ñïåöèàëüíî îñíàùåííîãî áëîêà äëÿ ââîäà ïðîá õðîìàòîãðàôà âîçìîæíî èñïîëüçîâà- íèå ãàçîâûõ øïðèöîâ è îáû÷íîãî õðîìàòîãðà- ôà. Óðàâíîâåøèâàíèå â òàêîì ñëó÷àå ïðîâîäèò- ñÿ â îòäåëüíîé êàìåðå, à ïàðîâàÿ ôàçà ââîäèòñÿ â êîëîíêó ñ ñîáëþäåíèåì íåîáõîäèìûõ ìåð ïðå- äîñòîðîæíîñòè äëÿ ïðåäîòâðàùåíèÿ ëþáûõ èç- ìåíåíèé â ðàâíîâåñíîé ñèñòåìå. ÌÅÒÎÄ Íàñòðàèâàþò ïðèáîð äëÿ ïîëó÷åíèÿ íåîáõî- äèìîãî ñèãíàëà, èñïîëüçóÿ ïîäãîòîâëåííûå îá- ðàçöû ñðàâíåíèÿ. ÌÅÒÎÄ ÏÐßÌÎÉ ÊÀËÈÁÐÎÂÊÈ Â îäèíàêîâûå ôëàêîíû ðàçäåëüíî ïîìåùà- þò èñïûòóåìûé îáðàçåö è êàæäûé èç îáðàçöîâ ñðàâíåíèÿ, ïðèãîòîâëåííûå, êàê óêàçàíî â ÷àñò- íîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå, èçáåãàÿ êîíòàêòà ìåæäó áëîêîì äëÿ ââîäà ïðîá è îáðàçöàìè. Ôëàêîíû ãåðìåòè÷íî çàêðûâàþò è ïîìåùà- þò â òåðìîñòàòèðóåìóþ êàìåðó ñ òåìïåðàòóðîé è äàâëåíèåì, óêàçàííûìè â ÷àñòíîé ôàðìàêî- ïåéíîé ñòàòüå. Ïîñëå óñòàíîâëåíèÿ ðàâíîâåñèÿ ïàðîâóþ ôàçó õðîìàòîãðàôèðóþò â óêàçàííûõ óñëîâèÿõ. ÌÅÒÎÄ ÑÒÀÍÄÀÐÒÍÛÕ ÄÎÁÀÂÎÊ Ðàâíûå îáúåìû èñïûòóåìîãî îáðàçöà ïîìå- ùàþò â îäèíàêîâûå ïîäõîäÿùèå ôëàêîíû. Âî âñå ôëàêîíû, êðîìå îäíîãî, ïðèáàâëÿþò óêàçàí- íûå êîëè÷åñòâà ðàñòâîðà ñðàâíåíèÿ, ñîäåðæà- ùåãî èçâåñòíóþ êîíöåíòðàöèþ îïðåäåëÿåìîãî âåùåñòâà, äëÿ ïîëó÷åíèÿ ðÿäà îáðàçöîâ ñ ðàâíî- ìåðíî óâåëè÷èâàþùèìèñÿ êîíöåíòðàöèÿìè ýòîãî âåùåñòâà. Ôëàêîíû ãåðìåòè÷íî çàêðûâàþò è ïîìåùà- þò â òåðìîñòàòèðóåìóþ êàìåðó ñ òåìïåðàòóðîé è äàâëåíèåì, óêàçàííûìè â ÷àñòíîé ôàðìàêî- ïåéíîé ñòàòüå. Ïîñëå óñòàíîâëåíèÿ ðàâíîâåñèÿ õðîìàòîãðàôèðîâàíèå ïðîâîäÿò â óêàçàííûõ óñ- ëîâèÿõ. Óðàâíåíèå ëèíåéíîé çàâèñèìîñòè ðàññ÷è- òûâàþò ìåòîäîì íàèìåíüøèõ êâàäðàòîâ. Ïî ïî- ëó÷åííîìó óðàâíåíèþ îïðåäåëÿþò êîíöåíòðà- öèþ îïðåäåëÿåìîãî âåùåñòâà â èñïûòóåìîì îá- ðàçöå. Äîïóñêàåòñÿ îïðåäåëåíèå êîíöåíòðàöèè ñ èñïîëüçîâàíèåì ãðàôè÷åñêîãî ìåòîäà. Äëÿ ýòî- ãî ïî îñè îðäèíàò îòêëàäûâàþò ñðåäíèå çíà÷å- íèÿ ïîëó÷åííûõ ðåçóëüòàòîâ, à ïî îñè àáñöèññ — êîíöåíòðàöèè ñòàíäàðòíûõ äîáàâîê îïðåäå- ëÿåìîãî âåùåñòâà. Ýêñòðàïîëèðóþò ëèíèþ, ïðîõîäÿùóþ ÷åðåç ïîëó÷åííûå òî÷êè, äî ïåðå- ñå÷åíèÿ ñ îñüþ àáñöèññ. Ðàññòîÿíèå ìåæäó ýòîé òî÷êîé è íà÷àëîì êîîðäèíàò ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé êîíöåíòðàöèþ îïðåäåëÿåìîãî âåùåñòâà â èñïû- òóåìîì îáðàçöå. ÌÅÒÎÄ ÏÎÑËÅÄÎÂÀÒÅËÜÍÛÕ ÎÒÁÎÐΠ(ÌÍÎÃÎÊÐÀÒÍÀß ÏÀÐÎÔÀÇÍÀß ÝÊÑÒÐÀÊÖÈß) Åñëè èñïîëüçóåòñÿ ìíîãîêðàòíàÿ ïàðîôàç- íàÿ ýêñòðàêöèÿ, ýòîò ìåòîä äîëæåí áûòü ïîëíî- ñòüþ îïèñàí â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. 67 201010028-2019 2.1.2.28. Âûñîêîýôôåêòèâíàÿ æèäêîñòíàÿ õðîìàòîãðàôèÿ Âûñîêîýôôåêòèâíàÿ æèäêîñòíàÿ õðîìàòî- ãðàôèÿ (ÂÝÆÕ) ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ìåòîä ðàç- äåëåíèÿ, îñíîâàííûé íà ðàçëè÷íîì ðàñïðåäåëå- íèè âåùåñòâ ìåæäó äâóìÿ íå ñìåøèâàþùèìèñÿ ôàçàìè, â êîòîðîì æèäêîñòü, ÿâëÿþùàÿñÿ ïîä- âèæíîé ôàçîé, ïðîõîäèò ÷åðåç íåïîäâèæíóþ ôàçó, ïîìåùåííóþ â êîëîíêó ñ âûñîêèì ãèäðàâ- ëè÷åñêèì ñîïðîòèâëåíèåì. Æèäêîñòíàÿ õðîìà- òîãðàôèÿ, â êîòîðîé èñïîëüçóþòñÿ êîëîíêè ñ óìåíüøåííûì ðàçìåðîì ÷àñòèö (íàïðèìåð, ìå- íåå 2 ìêì) íàçûâàåòñÿ ñâåðõâûñîêîýôôåêòèâ- íîé æèäêîñòíîé õðîìàòîãðàôèåé (ÑÂÝÆÕ).  ïîñëåäíåì ñëó÷àå òðåáóåòñÿ îáîðóäîâà- íèå, õàðàêòåðèçóþùååñÿ ñëåäóþùèì: âîçìîæ- íîñòü èñïîëüçîâàíèÿ âûñîêèõ äàâëåíèé (îáû÷- íî äî 100 ÌÏà, òî åñòü îêîëî 15 000 psi), óìåíü- øåííîå âíåêîëîíî÷íîå óøèðåíèå ïèêîâ, óëó÷øåííûå ïàðàìåòðû ãðàäèåíòíîãî ñìåøèâà- íèÿ è óâåëè÷åííàÿ ñêîðîñòü ïîëó÷åíèÿ äàííûõ ñèñòåìîé äåòåêòèðîâàíèÿ.
Æèäêîñòíàÿ õðîìàòîãðàôèÿ â çàâèñèìîñòè îò ìåõàíèçìà ðàçäåëåíèÿ âåùåñòâ ìîæåò áûòü àäñîðáöèîííîé, ðàñïðåäåëèòåëüíîé, èîíîîá- ìåííîé, ýêñêëþçèîííîé, õèðàëüíîé è äð. â ñîîòâåòñòâèè ñ õàðàêòåðîì îñíîâíûõ ïðîÿâëÿþ- ùèõñÿ ìåæìîëåêóëÿðíûõ âçàèìîäåéñòâèé. Êàæ- äûé èç ýòèõ âèäîâ ìîæåò áûòü âûñîêîýôôåêòèâ- íûì, åñëè äëÿ ïðîâåäåíèÿ õðîìàòîãðàôèè èñïîëüçóåòñÿ ðåæèì õðîìàòîãðàôèðîâàíèÿ ñ âûñîêèì äàâëåíèåì â êîëîíêå. ÏÐÈÁÎÐ Ïðèáîð îáû÷íî ñîñòîèò èç óçëà ïîäãîòîâêè ïîäâèæíîé ôàçû ñ ñèñòåìîé äåãàçàöèè, íàñîñ- íîé ñèñòåìû, ñìåñèòåëÿ ïîäâèæíîé ôàçû (ïðè íåîáõîäèìîñòè), áëîêà ââîäà ïðîáû (èíæåêòî- ðà), õðîìàòîãðàôè÷åñêîé êîëîíêè (ìîæåò èñ- ïîëüçîâàòüñÿ óñòðîéñòâî êîíòðîëÿ òåìïåðàòóðû êîëîíêè), äåòåêòîðà è ñèñòåìû ñáîðà è îáðàáîò- êè äàííûõ (èíòåãðèðóþùåå óñòðîéñòâî èëè ñà- ìîïèñåö). Ïîìèìî ýòîãî â ñîñòàâ õðîìàòîãðàôà ìîãóò âõîäèòü: ñèñòåìà ïðîáîïîäãîòîâêè è ïðåäêîëîíî÷íûé ðåàêòîð, ñèñòåìà ïåðåêëþ÷å- íèÿ êîëîíîê, ïîñòêîëîíî÷íûé ðåàêòîð è äðóãîå îáîðóäîâàíèå. Ïîäâèæíàÿ ôàçà èç îäíîé èëè íåñêîëüêèõ åìêîñòåé ïðîòåêàåò îáû÷íî ñ ïîñòî- ÿííîé ñêîðîñòüþ ÷åðåç êîëîíêó, à çàòåì ÷åðåç äåòåêòîð. ÍÀÑÎÑÍÀß ÑÈÑÒÅÌÀ Íàñîñíàÿ ñèñòåìà íåîáõîäèìà äëÿ ïîääåð- æàíèÿ êîíòðîëèðóåìîé ñêîðîñòè ïîäà÷è ïîä- âèæíîé ôàçû. Êîëåáàíèÿ äàâëåíèÿ äîëæíû áûòü ìèíèìèçèðîâàíû, íàïðèìåð, ïóòåì ïðî- ïóñêàíèÿ ïîäâèæíîé ôàçû, íàõîäÿùåéñÿ ïîä äàâëåíèåì, ÷åðåç äåìïôåðíîå óñòðîéñòâî. Ïðî- âîäÿùàÿ ñèñòåìà êàïèëëÿðîâ è ñîåäèíèòåëüíûå óçëû äîëæíû âûäåðæèâàòü äàâëåíèå, êîòîðîå ðàçâèâàåòñÿ ïðè ðàáîòå íàñîñíîé ñèñòåìû. Íà- ñîñíûå ñèñòåìû, èñïîëüçóþùèåñÿ â âûñîêîýô- ôåêòèâíîé æèäêîñòíîé õðîìàòîãðàôèè, ìîãóò îñíàùàòüñÿ äåãàçàòîðàìè. Ñèñòåìû ïîäà÷è ïîäâèæíîé ôàçû, êîíòðî- ëèðóåìûå ìèêðîïðîöåññîðîì, äîëæíû îáåñïå- ÷èâàòü òî÷íóþ ïîäà÷ó ïîäâèæíîé ôàçû ïîñòî- ÿííîãî (èçîêðàòè÷åñêîå ýëþèðîâàíèå) èëè ïåðå- ìåííîãî (ãðàäèåíòíîå ýëþèðîâàíèå) ñîñòàâà â ñîîòâåòñòâèè ñ îïðåäåëåííîé ïðîãðàììîé.  ñëó÷àå ãðàäèåíòíîãî ýëþèðîâàíèÿ èñïîëüçóþò íàñîñíûå ñèñòåìû, ïîäàþùèå ðàñòâîðèòåëü (ðàñòâîðèòåëè) èç íåñêîëüêèõ ðåçåðâóàðîâ, ñìå- øèâàíèå êîòîðûõ ïðîèñõîäèò ïðè íèçêîì ëèáî âûñîêîì äàâëåíèè, ñîçäàâàåìîì íàñîñàìè. ÁËÎÊ ÂÂÎÄÀ ÏÐÎÁ (ÈÍÆÅÊÒÎÐ) Ðàñòâîð èñïûòóåìîãî îáðàçöà ââîäèòñÿ â ïî- òîê ïîäâèæíîé ôàçû, ïîñòóïàþùåé â êîëîíêó, ïðè ïîìîùè áëîêà ââîäà ïðîá, ôóíêöèîíèðóþ- ùåãî ïðè âûñîêîì äàâëåíèè. Äëÿ ââîäà ïðîáû èñïîëüçóþò ïåòëåâûå äîçàòîðû ôèêñèðîâàííîãî îáúåìà èëè óñòðîéñòâà ñ ðåãóëèðóåìûì îáúå- ìîì, êîòîðûå ìîãóò óïðàâëÿòüñÿ âðó÷íóþ èëè àâòîìàòè÷åñêè. ×àñòè÷íîå çàïîëíåíèå ïåòëåâî- ãî äîçàòîðà âðó÷íóþ ñíèæàåò òî÷íîñòü ââîäè- ìîãî îáúåìà ïðîáû.
ÍÅÏÎÄÂÈÆÍÀß ÔÀÇÀ  âûñîêîýôôåêòèâíîé æèäêîñòíîé õðîìàòî- ãðàôèè èñïîëüçóþòñÿ íåïîäâèæíûå ôàçû ñëå- äóþùèõ òèïîâ: – ñèëèêàãåëü, îêñèä àëþìèíèÿ èëè ïîðèñ- òûé ãðàôèò, èñïîëüçóåìûé â íîðìàëüíî-ôàçî- âîé õðîìàòîãðàôèè, â êîòîðîé ðàçäåëåíèå îñíî- âàíî íà ðàçíèöå â àäñîðáöèè è/èëè ìàññîâîì ðàñïðåäåëåíèè (ðàñïðåäåëèòåëüíàÿ õðîìàòîãðà- ôèÿ); – áîëüøîå êîëè÷åñòâî õèìè÷åñêè ìîäèôè- öèðîâàííûõ íîñèòåëåé, èçãîòîâëåííûõ èç ïîëè- ìåðîâ, ñèëèêàãåëÿ èëè ïîðèñòîãî ãðàôèòà, èñ- 68 ïîëüçóåìûõ â íîðìàëüíî-ôàçîâîé (àäñîðáöèîí- íàÿ õðîìàòîãðàôèÿ) è îáðàùåííî-ôàçîâîé õðîìàòîãðàôèè, â êîòîðîé ðàçäåëåíèå îñíîâàíî íà ðàçäåëåíèè ìîëåêóë ìåæäó ïîäâèæíîé è íå- ïîäâèæíîé ôàçîé; – ñìîëû èëè ïîëèìåðû, ìîäèôèöèðîâàí- íûå êèñëîòíûìè èëè îñíîâíûìè ãðóïïàìè, èñ- ïîëüçóåìûå â èîíîîáìåííîé õðîìàòîãðàôèè, â êîòîðîé ðàçäåëåíèå îñíîâàíî íà êîíêóðèðóþ- ùåì âçàèìîäåéñòâèè ìåæäó ðàçäåëÿåìûìè èî- íàìè è èîíàìè ïîäâèæíîé ôàçû; – ïîðèñòûé ñèëèêàãåëü èëè ïîëèìåðû, èñ- ïîëüçóåìûå â ýêñêëþçèîííîé õðîìàòîãðàôèè, â êîòîðîé ðàçäåëåíèå îñíîâàíî íà ðàçíèöå â ðàç- ìåðàõ ìîëåêóë, ñîîòâåòñòâóþùèõ ñòåðè÷åñêîé ýêñêëþçèè; – ñïåöèàëüíûå õèìè÷åñêè ìîäèôèöèðîâàí- íûå íåïîäâèæíûå ôàçû, íàïðèìåð, ïðîèçâîä- íûìè öåëëþëîçû èëè àìèëîçû, áåëêàìè è ïåï- òèäàìè, öèêëîäåêñòðèíàìè è ò.ä., èñïîëüçóåìûå äëÿ ðàçäåëåíèÿ ýíàíòèîìåðîâ (õðîìàòîãðàôèÿ íà õèðàëüíûõ íåïîäâèæíûõ ôàçàõ); – äðóãèå íåïîäâèæíûå ôàçû, èñïîëüçóåìûå â âûñîêîýôôåêòèâíûõ ìîäèôèêàöèÿõ ðàçëè÷- íûõ òèïîâ æèäêîñòíîé õðîìàòîãðàôèè. Áîëüøàÿ ÷àñòü ðàçäåëåíèé îñíîâàíà íà ìå- õàíèçìå ðàñïðåäåëåíèÿ ìåæäó õèìè÷åñêè ìîäè- ôèöèðîâàííûì ñèëèêàãåëåì, èñïîëüçóþùèìñÿ â êà÷åñòâå íåïîäâèæíîé ôàçû, è ïîëÿðíûìè ðàñòâîðèòåëÿìè, èñïîëüçóþùèìèñÿ â êà÷åñòâå ïîäâèæíîé ôàçû. Ïîâåðõíîñòü íîñèòåëÿ, íà- ïðèìåð, ñèëàíîëüíûå ãðóïïû ñèëèêàãåëÿ, ðåà- ãèðóåò ñ ðàçëè÷íûìè ñèëàíîâûìè ðåàãåíòàìè ñ îáðàçîâàíèåì êîâàëåíòíî ñâÿçàííûõ ñèëèëüíûõ ïðîèçâîäíûõ, ïîêðûâàþùèõ ðàçëè÷íîå ÷èñëî àêòèâíûõ ãðóïï íà ïîâåðõíîñòè íîñèòåëÿ. Ïðè- ðîäà ïðèâèòîé ôàçû ÿâëÿåòñÿ âàæíîé õàðàêòå- ðèñòèêîé, îïðåäåëÿþùåé ðàçäåëÿþùèå ñâîéñò- âà õðîìàòîãðàôè÷åñêîé ñèñòåìû. Íèæå ïðåäñòàâëåíû íàèáîëåå ÷àñòî èñïîëü- çóåìûå ïðèâèòûå ôàçû: Îêòèëüíàÿ – Si–[CH2]7–CH3 C8 Îêòàäåöèëüíàÿ – Si–[CH2]17–CH3 Ñ18 Ôåíèëüíàÿ – Si–[CH2]n–C6H5 C6H5 Öèàíîïðîïèëüíàÿ – Si–[CH2]3–CN CN Àìèíîïðîïèëüíàÿ – Si–[CH2]3–NH2 NH2 Äèîëüíàÿ – Si–[CH2]3–O– –CH(OH)–CH2–OH Ïðè îòñóòñòâèè äðóãèõ óêàçàíèé ïðîèçâîäè- òåëÿ, íàõîäÿùàÿñÿ â êîëîíêàõ îáðàùåííî-ôàçî- âàÿ íåïîäâèæíàÿ ôàçà íà îñíîâå ñèëèêàãåëÿ ñ÷èòàåòñÿ ñòàáèëüíîé â ïîäâèæíûõ ôàçàõ ïðè çíà÷åíèÿõ ðÍ â äèàïàçîíå îò 2,0 äî 8,0. Êîëîí- êè, ñîäåðæàùèå ïîðèñòûé ãðàôèò èëè ÷àñòèöû ïîëèìåðíûõ ìàòåðèàëîâ, íàïðèìåð, ñîïîëèìå- ðà ñòèðîëà ñ äèâèíèëáåíçîëîì, ñòàáèëüíû â áî- ëåå øèðîêîì äèàïàçîíå çíà÷åíèé ðÍ.  íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ äëÿ àíàëèçà ïðèìåíÿ- þò íîðìàëüíî-ôàçîâóþ õðîìàòîãðàôèþ, èñ- ïîëüçóÿ â êà÷åñòâå íåïîäâèæíîé ôàçû íåìîäè- ôèöèðîâàííûé ñèëèêàãåëü, ïîðèñòûé ãðàôèò èëè ñèëèêàãåëü, õèìè÷åñêè ìîäèôèöèðîâàííûé ïîëÿðíûìè ãðóïïàìè (íàïðèìåð, öèàíîïðî- ïèëüíûìè èëè äèîëüíûìè). Ðàçìåð ÷àñòèö äëÿ áîëüøèíñòâà èñïîëüçóå- ìûõ íåïîäâèæíûõ ôàç ñîñòàâëÿåò îò 2 ìêì äî 10 ìêì. ×àñòèöû ìîãóò èìåòü ñôåðè÷åñêóþ èëè íåïðàâèëüíóþ ôîðìó, ðàçëè÷íóþ ïîðèñòîñòü è óäåëüíóþ ïëîùàäü ïîâåðõíîñòè. Ýòè ïàðàìåò- ðû îïðåäåëÿþò õðîìàòîãðàôè÷åñêîå ïîâåäåíèå êîíêðåòíûõ íåïîäâèæíûõ ôàç.  îáðàùåí- íî-ôàçîâîé õðîìàòîãðàôèè äîïîëíèòåëüíûìè îïðåäåëÿþùèìè ôàêòîðàìè ÿâëÿþòñÿ ïðèðîäà íåïîäâèæíîé ôàçû, ñòåïåíü ñâÿçûâàíèÿ, âûðà- æàåìàÿ ñîäåðæàíèåì óãëåðîäà, è ýíäêåïèðîâà- íèå (ò.å. ñèëèëèðîâàíèå îñòàâøèõñÿ ñèëàíîëü- íûõ ãðóïï).
Îñòàòî÷íûå ñèëàíîëüíûå ãðóïïû ìîãóò ÿâëÿòüñÿ ïðè÷èíîé ðàçìûâàíèÿ çàäíåãî ôðîíòà ïèêà, îñîáåííî äëÿ âåùåñòâ îñíîâíîãî õàðàêòåðà. Êðîìå ïîðèñòûõ ÷àñòèö ìîãóò áûòü èñïîëü- çîâàíû ïîâåðõíîñòíî-ïîðèñòûå èëè ìîíîëèò- íûå ìàòåðèàëû. Ïðè îòñóòñòâèè äðóãèõ óêàçàíèé â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå â àíàëèòè÷åñêîé õðîìà- òîãðàôèè èñïîëüçóþò êîëîíêè èç íåðæàâåþùåé ñòàëè ðàçëè÷íîé äëèíû è âíóòðåííåãî äèàìåò- ðà. Êîëîíêè ñ âíóòðåííèì äèàìåòðîì ìåíåå 2 ìì ÷àñòî îòíîñÿò ê ìèêðîêîëîíêàì. Òåìïåðà- òóðà ïîäâèæíîé ôàçû è êîëîíêè â òå÷åíèå àíà- ëèçà äîëæíà áûòü ïîñòîÿííîé. Áîëüøèíñòâî àíàëèçîâ ïðîâîäèòñÿ ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòó- ðå, íî äëÿ îáåñïå÷åíèÿ îïòèìàëüíîãî ôóíêöèî- íèðîâàíèÿ êîëîíêè ìîæåò ïîòðåáîâàòüñÿ èñ- ïîëüçîâàíèå äðóãèõ òåìïåðàòóð. ÏÎÄÂÈÆÍÀß ÔÀÇÀ  íîðìàëüíî-ôàçîâîé õðîìàòîãðàôèè îáû÷- íî èñïîëüçóþò ìàëîïîëÿðíûå îðãàíè÷åñêèå ðàñòâîðèòåëè (ãåêñàí, öèêëîãåêñàí, ãåïòàí è äð.) ñ íåáîëüøèìè äîáàâêàìè ïîëÿðíûõ îðãàíè- ÷åñêèõ ñîåäèíåíèé, êîòîðûå ðåãóëèðóþò ýëþè- ðóþùóþ ñèëó ïîäâèæíîé ôàçû. Äëÿ ïîëó÷åíèÿ 69 âîñïðîèçâîäèìûõ ðåçóëüòàòîâ â íîðìàëüíî-ôà- çîâîé õðîìàòîãðàôèè íåîáõîäèìî ñòðîãî êîí- òðîëèðîâàòü ñîäåðæàíèå âîäû â ðàñòâîðèòåëÿõ, èñïîëüçóþùèõñÿ â ïîäâèæíîé ôàçå.  îáðàùåííî-ôàçîâîé õðîìàòîãðàôèè èñ- ïîëüçóþò âîäíûå ïîäâèæíûå ôàçû, ñîäåðæà- ùèå èëè íå ñîäåðæàùèå îðãàíè÷åñêèå ðàñòâî- ðèòåëè. Îðãàíè÷åñêèìè äîáàâêàìè îáû÷íî ñëó- æàò ïîëÿðíûå îðãàíè÷åñêèå ðàñòâîðèòåëè (àöåòîíèòðèë è ìåòàíîë). Äëÿ îïòèìèçàöèè ðàç- äåëåíèÿ ìîãóò èñïîëüçîâàòüñÿ âîäíûå ðàñòâîðû ñ îïðåäåëåííûì çíà÷åíèåì ðÍ, â ÷àñòíîñòè áó- ôåðíûå ðàñòâîðû, à òàêæå ðàçëè÷íûå äîáàâêè â ïîäâèæíóþ ôàçó: ôîñôîðíàÿ è óêñóñíàÿ êèñëî- òû ïðè ðàçäåëåíèè ñîåäèíåíèé êèñëîòíîãî õà- ðàêòåðà; àììèàê è àëèôàòè÷åñêèå àìèíû ïðè ðàçäåëåíèè ñîåäèíåíèé îñíîâíîãî õàðàêòåðà, è äðóãèå ìîäèôèêàòîðû. Êîìïîíåíòû ïîäâèæíîé ôàçû îáû÷íî ôèëüòðóþò äëÿ óäàëåíèÿ ÷àñòèö ñ ðàçìåðîì áî- ëåå 0,45 ìêì (èëè 0,2 ìêì, åñëè íåïîäâèæíàÿ ôàçà ñîñòîèò èç ÷àñòèö ðàçìåðîì ìåíåå 2 ìêì, à òàêæå, åñëè èñïîëüçóþòñÿ ñïåöèàëüíûå äåòåê- òîðû, íàïðèìåð, äåòåêòîð ñâåòîðàññåÿíèÿ). Ïðè ïðèãîòîâëåíèè ìíîãîêîìïîíåíòíûõ ïîäâèæ- íûõ ôàç ñìåøèâàþò îòìåðåííûå îáúåìû (åñëè ìàññû íå óêàçàíû) èíäèâèäóàëüíûõ êîìïîíåí- òîâ. Êðîìå ýòîãî, ðàñòâîðèòåëè ìîãóò ïîäàâàòü- ñÿ èíäèâèäóàëüíûìè íàñîñàìè, ñíàáæåííûìè äîçèðóþùèìè êëàïàíàìè, ñ ïîìîùüþ êîòîðûõ îñóùåñòâëÿþò ñìåøèâàíèå ðàñòâîðèòåëåé â íå- îáõîäèìûõ ïðîïîðöèÿõ. Âî èçáåæàíèå îáðàçî- âàíèÿ ïóçûðüêîâ ãàçà è ïîïàäàíèÿ èõ â ÿ÷åéêó äåòåêòîðà ðàñòâîðèòåëè îáû÷íî äåãàçèðóþò ïó- òåì ïðîïóñêàíèÿ ÷åðåç íèõ ãåëèÿ, îáðàáîòêîé óëüòðàçâóêîì è/èëè èñïîëüçîâàíèåì ìåìáðàí- íî-âàêóóìíûõ ìîäóëåé, ðàáîòàþùèõ â ðåæèìå «on-line». Ðàñòâîðèòåëè äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ïîäâèæ- íûõ ôàç îáû÷íî íå ñîäåðæàò ñòàáèëèçàòîðîâ, à ïðè èñïîëüçîâàíèè óëüòðàôèîëåòîâûõ äåòåêòî- ðîâ äîëæíû áûòü ïðîçðà÷íûìè ïðè äëèíå âîë- íû äåòåêòèðîâàíèÿ. Ðàñòâîðèòåëè è äðóãèå êîì- ïîíåíòû ïîäâèæíîé ôàçû äîëæíû áûòü ïðèåì- ëåìîãî êà÷åñòâà. Ïðè íåîáõîäèìîñòè çíà÷åíèå ðÍ êîððåêòèðóþò, èñïîëüçóÿ òîëüêî âîäíûé êîìïîíåíò ïîäâèæíîé ôàçû, íî íå ñìåñè. Ïðè èñïîëüçîâàíèè áóôåðíûõ èëè ñîëåâûõ ðàñòâî- ðîâ äëÿ ïðåäîòâðàùåíèÿ êðèñòàëëèçàöèè ñîëåé ïî îêîí÷àíèè õðîìàòîãðàôèðîâàíèÿ ñèñòåìó ïðîìûâàþò ñìåñüþ âîäû è íåáîëüøîãî êîëè÷å- ñòâà îðãàíè÷åñêîé ÷àñòè ïîäâèæíîé ôàçû (5 % (îá/îá)). Ïîäâèæíûå ôàçû ìîãóò ñîäåðæàòü äðóãèå êîìïîíåíòû, íàïðèìåð, êîíòð-èîíû äëÿ èîí- ïàðíîé õðîìàòîãðàôèè èëè õèðàëüíûå ñåëåêòî- ðû äëÿ õðîìàòîãðàôèè, èñïîëüçóþùåé àõèðàëü- íûå íåïîäâèæíûå ôàçû. ÄÅÒÅÊÒÎÐÛ Íàèáîëåå ÷àñòî â êà÷åñòâå äåòåêòîðîâ èñ- ïîëüçóþò ñïåêòðîôîòîìåòðû, ðàáîòàþùèå â óëüòðàôèîëåòîâîé/âèäèìîé îáëàñòÿõ.
Ñïåêòðî- ôîòîìåòðè÷åñêèé äåòåêòîð ïîçâîëÿåò ïðîâî- äèòü äåòåêòèðîâàíèå ïðè ëþáîé äëèíå âîëíû â åãî ðàáî÷åì äèàïàçîíå (êàê ïðàâèëî, 190 – 600 íì). Ïðèìåíÿþòñÿ òàêæå ìíîãîâîëíî- âûå äåòåêòîðû, ïîçâîëÿþùèå ïðîâîäèòü äåòåê- òèðîâàíèå ïðè íåñêîëüêèõ äëèíàõ âîëí îäíî- âðåìåííî, èäèîäíîìàòðè÷íûå äåòåêòîðû, ñ ïî- ìîùüþ êîòîðûõ ìîæíî ðåãèñòðèðîâàòü îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü îäíîâðåìåííî âî âñåì ðàáî÷åì äèàïàçîíå äëèí âîëí (êàê ïðàâèëî, 190 – 950 íì). Ýòî ïîçâîëÿåò ðåãèñòðèðîâàòü ñïåêòðû ïîãëîùåíèÿ ïðîõîäÿùèõ ÷åðåç ÿ÷åéêó äåòåêòîðà êîìïîíåíòîâ. Êðîìå ýòîãî ìîãóò èñ- ïîëüçîâàòüñÿ ñïåöèàëüíûå äåòåêòîðû. Ôëóîðåñ- öåíòíûé äåòåêòîð ïðèìåíÿåòñÿ äëÿ îïðåäåëå- íèÿ ôëóîðåñöèðóþùèõ ñîåäèíåíèé èëè íå ôëóîðåñöèðóþùèõ ñîåäèíåíèé â âèäå èõ ôëóî- ðåñöèðóþùèõ ïðîèçâîäíûõ, è îáëàäàåò î÷åíü âûñîêîé ÷óâñòâèòåëüíîñòüþ è ñåëåêòèâíîñòüþ. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñîåäèíåíèé, ñëàáî ïîãëîùàþ- ùèõ â óëüòðàôèîëåòîâîé è âèäèìîé îáëàñòÿõ ñïåêòðà (íàïðèìåð, óãëåâîäîâ), èñïîëüçóþò ðåôðàêòîìåòðè÷åñêèå äåòåêòîðû (ðåôðàêòîìåò- ðû). Íåäîñòàòêè ýòèõ äåòåêòîðîâ – èõ îòíîñè- òåëüíî íèçêàÿ ÷óâñòâèòåëüíîñòü è çíà÷èòåëüíàÿ òåìïåðàòóðíàÿ çàâèñèìîñòü èíòåíñèâíîñòè ñèã- íàëà (äåòåêòîð íåîáõîäèìî òåðìîñòàòèðîâàòü), à òàêæå íåâîçìîæíîñòü èõ èñïîëüçîâàíèÿ â ðå- æèìå ãðàäèåíòíîãî ýëþèðîâàíèÿ. Êðîìå òîãî, ìîãóò èñïîëüçîâàòüñÿ ýëåêòðîõèìè÷åñêèå äå- òåêòîðû (àìïåðîìåòðè÷åñêèé, êîíäóêòîìåòðè- ÷åñêèé) äëÿ ýëåêòðîàêòèâíûõ ñîåäèíåíèé, ñâå- òîðàññåèâàþùèå äåòåêòîðû, äåòåêòîðû çàðÿ- æåííûõ àýðîçîëåé, ìàññ-ñïåêòðîìåòðè÷åñêèå äåòåêòîðû, îáëàäàþùèå î÷åíü âûñîêîé ÷óâñò- âèòåëüíîñòüþ è ñåëåêòèâíîñòüþ, Ôóðüå-ÈÊ-äå- òåêòîðû, äåòåêòîðû ðàäèîàêòèâíîñòè è äðóãèå. 70 ÑÈÑÒÅÌÀ ÑÁÎÐÀ È ÎÁÐÀÁÎÒÊÈ ÄÀÍÍÛÕ Ñîâðåìåííàÿ ñèñòåìà îáðàáîòêè äàííûõ ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ñîïðÿæåííûé ñ õðîìàòîãðà- ôîì ïåðñîíàëüíûé êîìïüþòåð ñ óñòàíîâëåííûì ïðîãðàììíûì îáåñïå÷åíèåì, ïîçâîëÿþùèì ðå- ãèñòðèðîâàòü è îáðàáàòûâàòü õðîìàòîãðàììó, à òàêæå óïðàâëÿòü ðàáîòîé õðîìàòîãðàôà è ñëå- äèòü çà îñíîâíûìè ïàðàìåòðàìè õðîìàòîãðàôè- ÷åñêîé ñèñòåìû. ÌÅÒÎÄÈÊÀ Êîëîíêó óðàâíîâåøèâàþò ïðè óêàçàííîì ñîñòàâå è ñêîðîñòè ïîäâèæíîé ôàçû, à òàêæå ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå èëè òåìïåðàòóðå, óêàçàííîé â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå, äî ïîëó÷åíèÿ ñòàáèëüíîé áàçîâîé ëèíèè. Ãîòîâÿò èñïûòóåìûé(å) ðàñòâîð(û) è ðàñòâîð(û) ñðàâíå- íèÿ, â ñîîòâåòñòâèè ñ óêàçàíèÿìè â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. Ðàñòâîðû íå äîëæíû ñî- äåðæàòü òâåðäûõ ÷àñòèö. Êðèòåðèè îöåíêè ïðè- ãîäíîñòè õðîìàòîãðàôè÷åñêîé ñèñòåìû îïèñà- íû â îáùåé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå 2.1.2.36. Õðî- ìàòîãðàôè÷åñêèå ìåòîäû ðàçäåëåíèÿ.  äàííîé ñòàòüå òàêæå ïðèâåäåíû ïðåäåëû, â êî- òîðûõ ìîãóò êîððåêòèðîâàòüñÿ ïàðàìåòðû õðî- ìàòîãðàôè÷åñêîé ñèñòåìû áåç ïðèíöèïèàëüíî- ãî èçìåíåíèÿ ìåòîäèêè äëÿ ñîîòâåòñòâèÿ êðèòå- ðèÿì åå ïðèãîäíîñòè. 201020029-2019 2.1.2.29. Ýêñêëþçèîííàÿ õðîìàòîãðàôèÿ Ýêñêëþçèîííàÿ õðîìàòîãðàôèÿ ïðåäñòàâëÿ- åò ñîáîé õðîìàòîãðàôè÷åñêèé ìåòîä ðàçäåëåíèÿ ìîëåêóë â ðàñòâîðå â ñîîòâåòñòâèè ñ èõ ðàçìåðà- ìè. Ïðè èñïîëüçîâàíèè îðãàíè÷åñêîé ïîäâèæ- íîé ôàçû ìåòîä íàçûâàþò ãåëü-ïðîíèêàþùåé õðîìàòîãðàôèåé, à ïðè èñïîëüçîâàíèè âîäíîé ïîäâèæíîé ôàçû — ãåëü-ôèëüòðàöèîííîé õðî- ìàòîãðàôèåé. Ïðîáà ââîäèòñÿ â êîëîíêó, çàïîë- íåííóþ ãåëåì èëè ïîðèñòûìè ÷àñòè÷êàìè íà- ïîëíèòåëÿ, è ïåðåíîñèòñÿ ïîäâèæíîé ôàçîé ÷å- ðåç êîëîíêó. Ðàçäåëåíèå â ñîîòâåòñòâèè ñ ðàçìåðàìè ïðîèñõîäèò çà ñ÷åò íåîäíîêðàòíîãî îáìåíà ìîëåêóë ðàñòâîðåííîãî âåùåñòâà ìåæäó ìîëåêóëàìè ðàñòâîðèòåëÿ ïîäâèæíîé ôàçû è òåì æå ðàñòâîðèòåëåì, íàõîäÿùèìñÿ â ïîðàõ ìàòåðèàëà, êîòîðûì çàïîëíåíà êîëîíêà (íåïîä- âèæíàÿ ôàçà). Äèàïàçîí ðàçìåðîâ ðàñïðåäåëÿå- ìûõ ìîëåêóë îïðåäåëÿåòñÿ äèàïàçîíîì ðàçìåðîâ ïîð íàïîëíèòåëÿ.
Äîñòàòî÷íî ìàëåíüêèå ìîëåêóëû ïðîíèêàþò âî âñå ïîðû ìàòåðèàëà íàïîëíèòåëÿ è ýëþèðó- þòñÿ â ïîëíîì ïðîíèêàþùåì îáúåìå êîëîíêè (Vt). Ìîëåêóëû ñ ðàçìåðàìè, ïðåâûøàþùèìè ðàçìåð âñåõ ïîð ìàòåðèàëà êîëîíêè, ìèãðèðóþò ëèøü ÷åðåç ïðîñòðàíñòâî ìåæäó ÷àñòèöàìè íà- ïîëíèòåëÿ, íå óäåðæèâàÿñü èì, è ýëþèðóþòñÿ â ñâîáîäíîì îáúåìå êîëîíêè èëè îáúåìå ýêñêëþ- çèè (V0, îáúåì ïóñòîò). Ðàçäåëåíèå ìîëåêóë â ñî- îòâåòñòâèè ñ ðàçìåðàìè ïðîèñõîäèò ìåæäó îáúåìîì ýêñêëþçèè è ïîëíûì ïðîíèêàþùèì îáúåìîì êîëîíêè; íàèáîëåå ýôôåêòèâíîå ðàçäå- ëåíèå ïðîèñõîäèò â ïåðâûå äâå òðåòè äàííîãî äèàïàçîíà. ÏÐÈÁÎÐ Îñíîâíîé ÷àñòüþ ïðèáîðà ÿâëÿåòñÿ õðîìà- òîãðàôè÷åñêàÿ êîëîíêà ñ ðàçëè÷íûìè äëèíîé è âíóòðåííèì äèàìåòðîì, çàïîëíåííàÿ ìàòåðèà- ëîì, îáåñïå÷èâàþùèì ðàçäåëåíèå ìîëåêóë ïî ðàçìåðàì â íåîáõîäèìîì äèàïàçîíå. Ïðè íåîá- õîäèìîñòè êîëîíêó òåðìîñòàòèðóþò. ×åðåç êî- ëîíêó ñ ïîñòîÿííîé ñêîðîñòüþ ïðîïóñêàþò ýëþåíò. Ê îäíîìó êîíöó êîëîíêè îáû÷íî ïðè- ñîåäèíÿþò áëîê äëÿ ââîäà ïðîá, íàïðèìåð, èí- æåêòîð ñ ïðåðûâàòåëåì ïîòîêà, øïðèöåâîé èí- æåêòîð ñ ìåìáðàíîé äëÿ ââîäà ïðîá áåç ïðèîñ- òàíîâêè ïîòîêà èëè ïåòëåâîé èíæåêòîð ñ êëàïàíîì, ïåðåêðûâàþùèé ïîòîê. Ê ýòîìó æå êîíöó êîëîíêè òàêæå ìîæåò áûòü ïðèñîåäèíåí ñîîòâåòñòâóþùèé íàñîñ äëÿ ïîäà÷è ýëþåíòà ñ êîíòðîëèðóåìîé ñêîðîñòüþ. Ïðîáà ìîæåò òàêæå íàíîñèòüñÿ íåïîñðåäñòâåííî íà ñóõóþ ïîâåðõ- íîñòü ìàòåðèàëà êîëîíêè èëè, åñëè ïëîòíîñòü ïðîáû ïðåâûøàåò ïëîòíîñòü ýëþåíòà, ìîæåò íàñëàèâàòüñÿ íà ïîâåðõíîñòü ìàòåðèàëà êîëîí- êè ïîä ýëþåíò. Äðóãîé êîíåö êîëîíêè îáû÷íî ïðèñîåäèíÿþò ê ñîîòâåòñòâóþùåìó äåòåêòîðó ñ àâòîìàòè÷åñêèì ðåãèñòðèðóþùèì óñòðîéñòâîì, îáåñïå÷èâàþùèì êîíòðîëü îòíîñèòåëüíûõ êîí- öåíòðàöèé ðàçäåëåííûõ êîìïîíåíòîâ ïðîáû. Îáû÷íî èñïîëüçóþò äåòåêòîðû: ôîòîìåòðè÷å- ñêèé, ðåôðàêòîìåòðè÷åñêèé èëè ëþìèíåñöåíò- íûé. Ïðè íåîáõîäèìîñòè, ìîæåò áûòü ïðèñîå- äèíåí àâòîìàòè÷åñêèé êîëëåêòîð ôðàêöèé.  êà÷åñòâå íåïîäâèæíîé ôàçû ìîæåò èñ- ïîëüçîâàòüñÿ èëè ìÿãêèé íîñèòåëü, íàïðèìåð, íàáóõøèé ãåëü, èëè òâåðäûé — ïîðèñòîå ñòåê- ëî, ñèëèêàãåëü èëè ïîäõîäÿùèé äëÿ äàííîãî 71 ðàñòâîðèòåëÿ ïîïåðå÷íî-ñøèòûé îðãàíè÷åñêèé ïîëèìåð. Ïðè èñïîëüçîâàíèè òâåðäûõ íîñèòå- ëåé îáû÷íî òðåáóåòñÿ ïîäà÷à ïîäâèæíîé ôàçû ïîä äàâëåíèåì, ÷òî óñêîðÿåò ðàçäåëåíèå. Ïîä- âèæíóþ ôàçó âûáèðàþò èñõîäÿ èç ïðèðîäû ïðî- áû, íàïîëíèòåëÿ è ìåòîäà äåòåêòèðîâàíèÿ. Ïå- ðåä ïðîâåäåíèåì ðàçäåëåíèÿ íåïîäâèæíóþ ôàçó îáðàáàòûâàþò è çàïîëíÿþò êîëîíêó â ñîîò- âåòñòâèè ñ óêàçàíèÿìè â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåé- íîé ñòàòüå èëè èíñòðóêöèåé ïðîèçâîäèòåëÿ. Êðèòåðèè îöåíêè ïðèãîäíîñòè õðîìàòîãðà- ôè÷åñêîé ñèñòåìû îïèñàíû â îáùåé ôàðìàêî- ïåéíîé ñòàòüå 2.1.2.36. Õðîìàòîãðàôè÷åñêèå ìåòîäû ðàçäåëåíèÿ.  äàííîé ñòàòüå òàêæå ïðè- âåäåíû ïðåäåëû, â êîòîðûõ ìîãóò êîððåêòèðî- âàòüñÿ ïàðàìåòðû õðîìàòîãðàôè÷åñêîé ñèñòåìû äëÿ ñîîòâåòñòâèÿ êðèòåðèÿì åå ïðèãîäíîñòè. ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈÅ ÎÒÍÎÑÈÒÅËÜÍÎÃÎ ÊÎÌÏÎÍÅÍÒÍÎÃÎ ÑÎÑÒÀÂÀ ÑÌÅÑÅÉ Ðàçäåëåíèå ïðîâîäÿò â ñîîòâåòñòâèè ñ óêàçà- íèÿìè â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. Ïî âîç- ìîæíîñòè ïîñòîÿííî êîíòðîëèðóþò ýëþèðîâà- íèå êîìïîíåíòîâ è èçìåðÿþò ïëîùàäè ñîîòâåò- ñòâóþùèõ ïèêîâ. Åñëè êîíòðîëü ïðîáû ïðîâîäèòñÿ ïî ôèçèêî-õèìè÷åñêîìó ñâîéñòâó, ïî êîòîðîìó âñå ðàññìàòðèâàåìûå êîìïîíåíòû äàþò îäèíàêîâûå àíàëèòè÷åñêèå ñèãíàëû (íà- ïðèìåð, îäèíàêîâîå óäåëüíîå îïòè÷åñêîå ïîãëî- ùåíèå), îòíîñèòåëüíîå ñîäåðæàíèå êàæäîãî êîìïîíåíòà ðàññ÷èòûâàþò êàê îòíîøåíèå ïëî- ùàäè ïèêà ñîîòâåòñòâóþùåãî êîìïîíåíòà ê ñóììå ïëîùàäåé ïèêîâ âñåõ êîìïîíåíòîâ. Åñëè àíàëèòè÷åñêèå ñèãíàëû êîìïîíåíòîâ ïî äåòåê- òèðóåìîìó ñâîéñòâó îòëè÷àþòñÿ, ñîäåðæàíèå êàæäîãî êîìïîíåíòà ðàññ÷èòûâàþò ïî êàëèáðî- âî÷íûì ãðàôèêàì, ïîëó÷åííûì ñ èñïîëüçîâàíè- åì ñîîòâåòñòâóþùèõ ñòàíäàðòíûõ îáðàçöîâ, êàê óêàçàíî â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå.
ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈÅ ÌÎËÅÊÓËßÐÍÛÕ ÌÀÑÑ Ýêñêëþçèîííàÿ õðîìàòîãðàôèÿ ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàíà äëÿ îïðåäåëåíèÿ ìîëåêóëÿðíûõ ìàññ âåùåñòâ ïóòåì ñðàâíåíèÿ ñ ñîîòâåòñòâóþ- ùèìè ñòàíäàðòíûìè îáðàçöàìè äëÿ êàëèáðîâ- êè, óêàçàííûìè â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòà- òüå. Äëÿ ñòàíäàðòíûõ îáðàçöîâ ñòðîÿò ãðàôèê çàâèñèìîñòè îáúåìà óäåðæèâàíèÿ âåùåñòâ îò ëîãàðèôìà èõ ìîëåêóëÿðíûõ ìàññ. Ãðàôèê, ïî- ñòðîåííûé â ïðåäåëàõ, îãðàíè÷åííûõ çíà÷åíèÿ- ìè îáúåìà ýêñêëþçèè è ïîëíîãî ïðîíèêàþùåãî îáúåìà, îáû÷íî ïðèáëèæàåòñÿ ê ïðÿìîé ëèíèè äëÿ äàííîé êîëîíêè â äàííûõ ýêñïåðèìåíòàëü- íûõ óñëîâèÿõ. Ïî äàííîìó ãðàôèêó ìîãóò áûòü ðàññ÷èòàíû çíà÷åíèÿ ìîëåêóëÿðíûõ ìàññ. Èñ- ïîëüçîâàíèå ìåòîäà êàëèáðîâî÷íîãî ãðàôèêà äëÿ ìîëåêóëÿðíî-ìàññîâîãî ðàñïðåäåëåíèÿ ïî- çâîëÿåò ïîëó÷àòü äîñòîâåðíûå ðåçóëüòàòû ëèøü äëÿ ÷àñòíûõ ñëó÷àåâ ñèñòåì âûñîêîìîëåêóëÿð- íîå âåùåñòâî/ðàñòâîðèòåëü â îïèñàííûõ ýêñïå- ðèìåíòàëüíûõ óñëîâèÿõ. ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈÅ ÌÎËÅÊÓËßÐÍÎ-ÌÀÑÑÎÂÎÃÎ ÐÀÑÏÐÅÄÅËÅÍÈß ÏÎËÈÌÅÐΠÝêñêëþçèîííàÿ õðîìàòîãðàôèÿ ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàíà äëÿ îïðåäåëåíèÿ ìîëåêóëÿð- íî-ìàññîâîãî ðàñïðåäåëåíèÿ ïîëèìåðîâ. Îäíà- êî ñðàâíèòü ìåæäó ñîáîé ìîæíî ëèøü ðåçóëüòà- òû, ïîëó÷åííûå â îäèíàêîâûõ ýêñïåðèìåíòàëü- íûõ óñëîâèÿõ. Ñòàíäàðòíûå îáðàçöû, èñïîëü- çóåìûå äëÿ êàëèáðîâêè, è ìåòîäèêè îïðåäåëå- íèÿ ìîëåêóëÿðíî-ìàññîâîãî ðàñïðåäåëåíèÿ ïî- ëèìåðîâ ïðèâîäÿò â ÷àñòíûõ ôàðìàêîïåéíûõ ñòàòüÿõ. 201020030-2019 2.1.2.30. Ýëåêòðîôîðåç 1. ÎÁÙÈÉ ÏÐÈÍÖÈÏ Ïîä äåéñòâèåì ýëåêòðè÷åñêîãî ïîëÿ çàðÿ- æåííûå ÷àñòèöû, ðàñòâîðåííûå èëè äèñïåðãè- ðîâàííûå â ðàñòâîðå ýëåêòðîëèòà, ïåðåäâèãàþò- ñÿ â íàïðàâëåíèè ýëåêòðîäà ïðîòèâîïîëîæíîé ïîëÿðíîñòè. Ïðè ýëåêòðîôîðåçå â ãåëå äâèæå- íèå ÷àñòèö çàìåäëÿåòñÿ âçàèìîäåéñòâèåì ñ îê- ðóæàþùåé ãåëü-ìàòðèöåé, äåéñòâóþùåé êàê ìîëåêóëÿðíîå ñèòî. Ïðîòèâîïîëîæíûå âçàèìî- äåéñòâèÿ ýëåêòðè÷åñêîãî òîêà è ìîëåêóëÿðíîãî ñèòà ïðèâîäÿò ê ðàçëè÷èÿì â ñêîðîñòè ìèãðàöèè ÷àñòèö â çàâèñèìîñòè îò èõ ðàçìåðîâ, ôîðì è çà- ðÿäîâ. Âñëåäñòâèå ðàçëè÷èé ôèçèêî-õèìè÷å- ñêèõ ñâîéñòâ ðàçíûå ìàêðîìîëåêóëû â ñìåñè áó- äóò ìèãðèðîâàòü ñ ðàçíîé ñêîðîñòüþ ïðè ýëåê- òðîôîðåçå è, òàêèì îáðàçîì, áóäóò ðàçäåëåíû íà äèñêðåòíûå ôðàêöèè. Ýëåêòðîôîðåòè÷åñêîå ðàçäåëåíèå ìîæåò áûòü ïðîâåäåíî â ñèñòåìàõ áåç îïîðíûõ ôàç (íàïðèìåð, ðàçäåëåíèå ñâîáîä- íîãî ðàñòâîðà â êàïèëëÿðíîì ýëåêòðîôîðåçå) è â ñòàáèëèçèðîâàííûõ ñðåäàõ, òàêèõ, êàê òîíêîñ- ëîéíûå ïëàñòèíû, ïëåíêè èëè ãåëè. 72 2. ÝËÅÊÒÐÎÔÎÐÅÇ Â ÑÂÎÁÎÄÍÎÌ ÐÀÑÒÂÎÐÅ ÈËÈ ÔÐÎÍÒÀËÜÍÛÉ ÝËÅÊÒÐÎÔÎÐÅÇ Ýòîò ìåòîä â îñíîâíîì èñïîëüçóåòñÿ äëÿ îï- ðåäåëåíèÿ ýëåêòðîôîðåòè÷åñêîé ïîäâèæíîñòè, ÿâëÿþùåéñÿ ýêñïåðèìåíòàëüíîé íåïîñðåäñò- âåííî èçìåðÿåìîé è âîñïðîèçâîäèìîé õàðàêòå- ðèñòèêîé âåùåñòâ. Ìåòîä îáû÷íî ïðèìåíÿåòñÿ äëÿ âåùåñòâ ñ âûñîêîé îòíîñèòåëüíîé ìîëåêó- ëÿðíîé ìàññîé, êîòîðûå èìåþò ìàëóþ ñïîñîá- íîñòü ê äèôôóçèè. Ïåðåä íà÷àëîì îïðåäåëåíèÿ ôèêñèðóþò ìåñòîðàñïîëîæåíèå ãðàíèö ôèçè÷å- ñêèìè ìåòîäàìè, íàïðèìåð, ðåôðàêòîìåòðèåé èëè êîíäóêòîìåòðèåé. Ïîñëå íàëîæåíèÿ îïðå- äåëåííîãî ýëåêòðè÷åñêîãî ïîëÿ, â òå÷åíèå òî÷íî èçìåðåííîãî âðåìåíè, îïðåäåëÿþò íîâûå ãðàíè- öû è èõ îòíîñèòåëüíîå ïîëîæåíèå. Óñëîâèÿ èñ- ïûòàíèÿ ïîäáèðàþò òàê, ÷òîáû ìîæíî áûëî îï- ðåäåëÿòü ñòîëüêî ãðàíèö, ñêîëüêî âåùåñòâ ïðè- ñóòñòâóåò â èñïûòóåìîì îáðàçöå. 3. ÇÎÍÍÛÉ ÝËÅÊÒÐÎÔÎÐÅÇ Ñ ÈÑÏÎËÜÇÎÂÀÍÈÅÌ ÔÀÇÛ ÍÎÑÈÒÅËß Äëÿ ïðîâåäåíèÿ ýòîãî èñïûòàíèÿ òðåáóåòñÿ ëèøü íåáîëüøîå êîëè÷åñòâî èñïûòóåìîãî îá- ðàçöà.
Ïðèðîäà íîñèòåëÿ, íàïðèìåð, áóìàãà, àãà- ðîçíûé ãåëü, àöåòàò öåëëþëîçû, êðàõìàë, àãàðî- çà, ïîëèàêðèëàìèä, ñìåøàííûé ãåëü, ñëóæèò ïðè÷èíîé ðÿäà äîïîëíèòåëüíûõ ôàêòîðîâ, âëèÿþùèõ íà ïîäâèæíîñòü: à) âñëåäñòâèå êàïèëëÿðíûõ ýôôåêòîâ â ôàçå íîñèòåëÿ êàæóùååñÿ ïðîéäåííîå ðàññòîÿíèå ìåíüøå ðåàëüíîãî ïðîéäåííîãî ðàññòîÿíèÿ; á) íåêîòîðûå ôàçû íîñèòåëÿ íå ÿâëÿþòñÿ ýëåêòðè÷åñêè íåéòðàëüíûìè. Ïîñêîëüêó íîñè- òåëè ÿâëÿþòñÿ íåïîäâèæíîé ôàçîé, ýòî èíîãäà ìîæåò ïðèâîäèòü ê çíà÷èòåëüíîìó ýëåêòðîýíäî- îñìîòè÷åñêîìó ïîòîêó; â) ëþáîå íàãðåâàíèå â ðåçóëüòàòå ýôôåêòà Äæîóëÿ ìîæåò âûçâàòü íåêîòîðîå èñïàðåíèå æèäêîñòè ñ ôàçû íîñèòåëÿ, ÷òî âñëåäñòâèå êà- ïèëëÿðíîãî ýôôåêòà ïðèâîäèò ê äâèæåíèþ ðàñ- òâîðà â íàïðàâëåíèè îò êðàåâ ê öåíòðó. Èîííàÿ ñèëà â ýòîì ñëó÷àå âîçðàñòàåò. Ñëåäîâàòåëüíî, ñêîðîñòü ïåðåäâèæåíèÿ çà- âèñèò îò ÷åòûðåõ ãëàâíûõ ôàêòîðîâ: ïîäâèæíî- ñòè çàðÿæåííîé ÷àñòèöû, ñêîðîñòè ïîòîêà ýëåê- òðîýíäîîñìîñà, èñïàðåíèÿ æèäêîñòè ñ ôàçû íîñèòåëÿ, íàïðÿæåííîñòè ïîëÿ. Ïîýòîìó íåîá- õîäèìî ïðîâîäèòü èñïûòàíèå â ñòðîãî îïðåäå- ëåííûõ ýêñïåðèìåíòàëüíûõ óñëîâèÿõ è, ïî âîçìîæíîñòè, èñïîëüçîâàòü ñòàíäàðòíûå âåùå- ñòâà. Îñíîâíûìè ñîñòàâëÿþùèìè ïðèáîðà äëÿ ýëåêòðîôîðåçà ÿâëÿþòñÿ: – Èñòî÷íèê ïîñòîÿííîãî òîêà, íàïðÿæå- íèå êîòîðîãî ìîæíî êîíòðîëèðîâàòü è, æåëà- òåëüíî, ñòàáèëèçèðîâàòü. – Ýëåêòðîôîðåòè÷åñêàÿ êàìåðà. Îáû÷íî ýòî êàìåðà èç ñòåêëà èëè òâåðäîãî ïîëèìåðà, ñîñòîÿùàÿ èç äâóõ îòäåëüíûõ ðåçåðâóàðîâ — àíîäíîãî è êàòîäíîãî, ñîäåðæàùèõ ðàñòâîð ýëåêòðîëèòà.  êàæäûé ðåçåðâóàð êàìåðû ïî- ãðóæàåòñÿ ýëåêòðîä, íàïðèìåð, ïëàòèíîâûé èëè ãðàôèòîâûé. Îíè ïðèñîåäèíÿþòñÿ èçîëèðîâàí- íîé ñõåìîé ê ñîîòâåòñòâóþùåìó âûõîäó èñòî÷- íèêà ïèòàíèÿ è îáðàçóþò àíîä è êàòîä. Äëÿ ïðå- äîòâðàùåíèÿñèôîíèðîâàíèÿ óðîâåíü æèäêîñòè â îáîèõ ðåçåðâóàðàõ êàìåðû ïîääåðæèâàåòñÿ îäèíàêîâûì. Ýëåêòðîôîðåòè÷åñêàÿ êàìåðà ñíàáæåíà âîç- äóõîíåïðîíèöàåìîé êðûøêîé, êîòîðàÿ ïîääåð- æèâàåò àòìîñôåðó íàñûùåííîé âëàæíîñòè íà ïðîòÿæåíèè èñïûòàíèÿ è óìåíüøàåò èñïàðåíèå ðàñòâîðèòåëÿ. Ïðè ñíÿòèè êðûøêè òîê îòêëþ÷à- åòñÿ ïðåäîõðàíèòåëåì. Åñëè ìîùíîñòü òîêà, èç- ìåðåííàÿ ïîïåðåê ïîëîñû, ïðåâûøàåò 10 Âò, æåëàòåëüíî îõëàäèòü êàìåðó. – Ïðèñïîñîáëåíèå óñòàíîâêè íîñèòåëÿ: Ýëåêòðîôîðåç íà ïîëîñêàõ. Êàæäûé êîíåö íåñóùåé ïîëîñêè, ïðåäâàðèòåëüíî ñìî÷åííîé òåì æå ýëåêòðîëèòîì, ïîãðóæàþò â ýëåêòðîä- íóþ êàìåðó, çàêðåïëÿþò è ôèêñèðóþò ñîîòâåò- ñòâóþùèì äåðæàòåëåì äëÿ ïðåäóïðåæäåíèÿ äèôôóçèè ýëåêòðîëèòà. Òàêèìè äåðæàòåëÿìè ìîãóò áûòü ãîðèçîíòàëüíàÿ ðàìêà, ïåðåâåðíó- òî-V-îáðàçíàÿ ïîäñòàâêà èëè îäíîðîäíàÿ ïî- âåðõíîñòü ñ òî÷êàìè êîíòàêòà ÷åðåç îïðåäåëåí- íûå èíòåðâàëû. Ãåëü-ýëåêòðîôîðåç. Ïðèñïîñîáëåíèå â îñ- íîâíîì ñîñòîèò èç ñòåêëÿííîé ïëàñòèíêè (íà- ïðèìåð, ïðåäìåòíîå ñòåêëî), íà ïîâåðõíîñòü êî- òîðîé íàíåñåí ñëîé õîðîøî çàêðåïëåííîãî ãåëÿ îäèíàêîâîé òîëùèíû. Ñîåäèíåíèå ãåëÿ ñ ýëåê- òðîëèòîì îñóùåñòâëÿåòñÿ ðàçíûìè ñïîñîáàìè â çàâèñèìîñòè îò òèïà èñïîëüçóåìîãî ïðèáîðà. Íåîáõîäèìî ïðèíÿòü ìåðû äëÿ ïðåäóïðåæäåíèÿ êîíäåíñàöèè âîäû èëè âûñûõàíèÿ òâåðäîãî ñëîÿ. – Èçìåðèòåëüíîå óñòðîéñòâî èëè äåòåê- òîð. 73 Ìåòîäèêà. Ðàñòâîð ýëåêòðîëèòà ïîìåùàþò â ýëåêòðîäíûå îòäåëåíèÿ. Íîñèòåëü, ïðîïèòàí- íûé ðàñòâîðîì ýëåêòðîëèòà, ïîìåùàþò â êàìå- ðó â ñîîòâåòñòâèè ñ èíñòðóêöèåé äëÿ èñïîëüçóå- ìîãî ïðèáîðà. Óñòàíàâëèâàþò ëèíèþ ñòàðòà è íàíîñÿò îáðàçåö. Ïîäàþò ýëåêòðè÷åñêèé òîê â òå÷åíèå óêàçàííîãî âðåìåíè. Ïîñëå îòêëþ÷åíèÿ òîêà íîñèòåëü âûíèìàþò èç êàìåðû, âûñóøèâà- þò è ïðîÿâëÿþò. 4. ÝËÅÊÒÐÎÔÎÐÅÇ ÍÀ ÊÎËÎÍÊÀÕ Ñ ÏÎËÈÀÊÐÈËÀÌÈÄÍÛÌ ÃÅËÅÌ Ïðè ýëåêòðîôîðåçå íà êîëîíêàõ ñ ïîëèàêðè- ëàìèäíûì ãåëåì ñòàöèîíàðíîé ôàçîé ÿâëÿåòñÿ ãåëü, ïðèãîòîâëåííûé èç ñìåñè àêðèëàìèäà è N,N¢-ìåòèëåíáèñàêðèëàìèäà.
Êîëîíêè ñ ãåëåì ãîòîâÿò ñ èñïîëüçîâàíèåì òðóáîê äëèíîé 7,5 ñì è âíóòðåííèì äèàìåòðîì 0,5 ñì, âî âñåõ òðóá- êàõ äîëæåí áûòü èñïîëüçîâàí îäèí è òîò æå ðàñ- òâîð. Ïðèáîð. Ïðèáîð ñîñòîèò èç äâóõ âñòàâëåí- íûõ âåðòèêàëüíî îäèí íàä îäíèì ðåçåðâóàðîâ äëÿ áóôåðíîãî ðàñòâîðà, èçãîòîâëåííûõ èç ïîä- õîäÿùåãî ìàòåðèàëà, íàïðèìåð, ïîëè(ìåòèëìå- òàêðèëàòà). Êàæäûé ðåçåðâóàð ñíàáæåí ïëàòè- íîâûì ýëåêòðîäîì. Ýëåêòðîäû ïðèñîåäèíåíû ê èñòî÷íèêó òîêà, ÷òî ïîçâîëÿåò ïðîâîäèòü èñïû- òàíèå ëèáî ïðè ïîñòîÿííîì òîêå, ëèáî ïðè ïî- ñòîÿííîì íàïðÿæåíèè.  îñíîâàíèè âåðõíåãî ðåçåðâóàðà èìååòñÿ ðÿä äåðæàòåëåé, ðàâíîóäà- ëåííûõ îò ýëåêòðîäà. Ìåòîäèêà. Îáû÷íî ðàñòâîðû äåãàçèðóþò äî íà÷àëà ïîëèìåðèçàöèè, ãåëè èñïîëüçóþò ñðàçó ïîñëå ïðèãîòîâëåíèÿ. Ãîòîâÿò ïðåäïèñàííóþ ñìåñü êîìïîíåíòîâ, çàëèâàþò åå â ñîîòâåòñò- âóþùèå çàêðûòûå ñíèçó ñòåêëÿííûå òðóáêè äî îäèíàêîâîãî óðîâíÿ, íå äîñòèãàÿ îêîëî 1 ñì îò âåðõíåãî êðàÿ, èçáåãàÿ ïîïàäàíèÿ ïóçûðüêîâ âîçäóõà â òðóáêè. Íà ñìåñü íàñëàèâàþò ñëîé âîäû Ð, ÷òîáû èñêëþ÷èòü êîíòàêò ñ âîçäóõîì, è îñòàâëÿþò äëÿ ïîëèìåðèçàöèè. Ãåëåîáðàçîâà- íèå îáû÷íî çàíèìàåò îêîëî 30 ìèíóò è çàâåðøà- åòñÿ, êîãäà îáðàçóåòñÿ ãðàíèöà, ÷åòêî ðàçäåëÿþ- ùàÿ ïîâåðõíîñòè ãåëÿ îòñëîÿ âîäû. Âîäíûé ñëîé óäàëÿþò. Íèæíèé ðåçåðâóàð íàïîëíÿþò ïðåäïèñàííûì áóôåðíûì ðàñòâîðîì. Ñòåêëÿí- íûå òðóáêè îòêðûâàþò (ñíèìàþò êîëïà÷êè ñ íèæíåãî êîíöà) è âñòàâëÿþò â äåðæàòåëè âåðõ- íåãî ðåçåðâóàðà òàê, ÷òîáû äíî òðóáîê áûëî ïî- ãðóæåíî â áóôåðíûé ðàñòâîð íèæíåãî ðåçåðâóà- ðà. Êîëîíêè îñòîðîæíî íàïîëíÿþò ïðåäïèñàí- íûì áóôåðíûì ðàñòâîðîì. Ãîòîâÿò èñïûòóåìûå è êîíòðîëüíûå îáðàçöû, ñîäåðæàùèå ïðåäïè- ñàííûé èíäèêàòîðíûé êðàñèòåëü, è óïëîòíÿþò ïóòåì ðàñòâîðåíèÿ â íèõ, íàïðèìåð, ñàõàðîçû Ð. Ïðèãîòîâëåííûå îáðàçöû íàñëàèâàþò íà ïî- âåðõíîñòü ãåëÿ, èñïîëüçóÿ äëÿ êàæäîãî îáðàçöà îòäåëüíóþ òðóáêó. Âåðõíèé ðåçåðâóàð íàïîëíÿ- þò òåì æå áóôåðíûì ðàñòâîðîì. Ýëåêòðîäû ïîäêëþ÷àþò ê èñòî÷íèêó òîêà è ïðîâîäÿò ïðî- öåññ ýëåêòðîôîðåçà ïðè çàäàííîé òåìïåðàòóðå è ñ èñïîëüçîâàíèåì çàäàííîãî ïîñòîÿííîãî íà- ïðÿæåíèÿ èëè òîêà. Èñòî÷íèê òîêà îòêëþ÷àþò, êîãäà èíäèêàòîð- íûé êðàñèòåëü ïî÷òè ïåðåõîäèò â íèæíèé ðå- çåðâóàð. Êàæäóþ òðóáêó ñðàçó âûíèìàþò èç ïðèáîðà è ïóòåì âûäàâëèâàíèÿ èçâëåêàþò ãåëü. Îïðåäåëÿþò, êàê ïðåäïèñàíî, ìåñòîïîëîæåíèå ïîëîñ íà ýëåêòðîôîðåãðàììå. 5. ÝËÅÊÒÐÎÔÎÐÅÇ ÁÅËÊΠ ÏÎËÈÀÊÐÈËÀÌÈÄÍÎÌ ÃÅËÅ, ÑÎÄÅÐÆÀÙÅÌ ÄÎÄÅÖÈËÑÓËÜÔÀÒ ÍÀÒÐÈß (ÄÑÍ-ÏÀÀÃ) 5-1. ÄÑÍ-ÏÀÀà — ÃÅËÈ Ñ ÎÄÍÎÐÎÄÍÎÉ ÊÎÍÖÅÍÒÐÀÖÈÅÉ Îáëàñòü ïðèìåíåíèÿ. Ýëåêòðîôîðåç â ïî- ëèàêðèëàìèäíîì ãåëå ïðèìåíÿåòñÿ äëÿ êà÷åñò- âåííîé èäåíòèôèêàöèè áåëêîâ â áèîëîãè÷åñêèõ ïðåïàðàòàõ, êîíòðîëÿ èõ ÷èñòîòû è êîëè÷åñò- âåííûõ îïðåäåëåíèé. Öåëü. Àíàëèòè÷åñêèé ãåëü-ýëåêòðîôîðåç — ìåòîä, ïîçâîëÿþùèé èäåíòèôèöèðîâàòü è îöå- íèòü ãîìîãåííîñòü áåëêîâ â ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâàõ. Ìåòîä îáû÷íî èñïîëüçóåòñÿ äëÿ îï- ðåäåëåíèÿ ìîëåêóëÿðíûõ ìàññ áåëêîâûõ ñóáúå- äèíèö è ñóáúåäèíè÷íîãî ñîñòàâà î÷èùåííûõ áåëêîâ. Ãîòîâûå ãåëè è ðåàêòèâû øèðîêî äîñòóïíû íà ðûíêå è ìîãóò áûòü èñïîëüçîâàíû âìåñòî îïèñàííûõ â äàííîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå, ïðè óñëîâèè, ÷òî îíè äàþò ýêâèâàëåíòíûå ðåçóëüòà- òû è îòâå÷àþò òðåáîâàíèÿì ðàçäåëà «Âàëèäàöèÿ èñïûòàíèÿ», ïðèâåäåííîãî íèæå. 5-1-1. ÑÂÎÉÑÒÂÀ ÏÎËÈÀÊÐÈËÀÌÈÄÍÛÕ ÃÅËÅÉ Ðàçäåëÿþùèå ñâîéñòâà ïîëèàêðèëàìèäíûõ ãåëåé (ÏÀÀÃ) îáóñëîâëåíû òðåõìåðíîé ñåòüþ âîëîêîí è ïîð, îáðàçóþùèõñÿ áëàãîäàðÿ áè- ôóíêöèîíàëüíûì áèñ-àêðèëàìèäíûì ïîïåðå÷- íûì ñâÿçÿì ìåæäó ñîñåäíèìè ïîëèàêðèëàìèä- 74 íûìè öåïÿìè. Ïðîöåññ ïîëèìåðèçàöèè êàòàëè- çèðóåòñÿ ñèñòåìîé, ãåíåðèðóþùåé ñâîáîäíûå ðàäèêàëû, ñîñòîÿùåé èç àììîíèÿ ïåðñóëüôàòà è N,N,N¢, N¢-òåòðàìåòèëýòèëåíäèàìèíà (ÒÅÌÝÄ). Ïðè óâåëè÷åíèè êîíöåíòðàöèè àêðèëàìèäà óìåíüøàåòñÿ ýôôåêòèâíûé ðàçìåð ïîð â ãåëå.
Ýôôåêòèâíûé ðàçìåð ïîð ãåëÿ ôóíêöèîíàëüíî îïðåäåëÿåòñÿ åãî ïðîñåèâàþùèìè ñâîéñòâàìè, òî åñòü ñîïðîòèâëåíèåì, êîòîðîå îí ïðèäàåò ìè- ãðàöèè ìàêðîìîëåêóë. Ñóùåñòâóþò îãðàíè÷å- íèÿ íà êîíöåíòðàöèè àêðèëàìèäà, êîòîðûå ìî- ãóò áûòü èñïîëüçîâàíû. Ïðè âûñîêèõ êîíöåí- òðàöèÿõ àêðèëàìèäà ãåëè ñòàíîâÿòñÿ áîëåå ëîìêèìè è òðóäíû â îáðàùåíèè. Ñ óìåíüøåíè- åì ðàçìåðà ïîð ãåëÿ ñêîðîñòü ìèãðàöèè áåëêà ÷åðåç ãåëü óìåíüøàåòñÿ. Ðåãóëèðóÿ ðàçìåð ïîð è êîíöåíòðàöèþ àêðèëàìèäà, ìîæíî îïòèìèçèðî- âàòü ðàçðåøàþùóþ ñïîñîáíîñòü ìåòîäà äëÿ êîíêðåòíîãî àíàëèçèðóåìîãî áåëêîâîãî ïðîäóê- òà. Òàêèì îáðàçîì, ñâîéñòâà êîíêðåòíîãî ãåëÿ îïðåäåëÿþòñÿ ïðîöåíòíûì ñîäåðæàíèåì â íåì àêðèëàìèäà è áèñàêðèëàìèäà. Êðîìå ñîñòàâà ãåëÿ, âàæíûì êîìïîíåíòîì ýëåêòðîôîðåòè÷åñêîé ïîäâèæíîñòè ÿâëÿåòñÿ ñîñòîÿíèå àíàëèçèðóåìîãî áåëêà. Ýëåêòðîôîðå- òè÷åñêàÿ ïîäâèæíîñòü áåëêà çàâèñèò îò çíà÷å- íèÿ pK çàðÿæåííûõ ãðóïï è ðàçìåðà ìîëåêóëû. Íà ïîäâèæíîñòü âëèÿþò òèï, êîíöåíòðàöèÿ è ðÍ áóôåðíîãî ðàñòâîðà, òåìïåðàòóðà è íàïðÿæå- íèå ýëåêòðè÷åñêîãî ïîëÿ, à òàêæå ïðèðîäà ìàòå- ðèàëà íîñèòåëÿ. 5-1-2. ÄÅÍÀÒÓÐÈÐÓÞÙÈÉ ÝËÅÊÒÐÎÔÎÐÅÇ Â ÏÎËÈÀÊÐÈËÀÌÈÄÍÎÌ ÃÅËÅ Äàííûé ìåòîä ïîçâîëÿåò àíàëèçèðîâàòü ìî- íîìåðû ïîëèïåïòèäîâ ñ ìîëåêóëÿðíîé ìàññîé îò 14 000 äî 100 000 äàëüòîí. Âîçìîæíî ðàñøè- ðåíèå ãðàíèö ìîëåêóëÿðíûõ ìàññ ñ èñïîëüçîâà- íèåì ðàçëè÷íûõ ìåòîäèê (íàïðèìåð, ïóòåì èñ- ïîëüçîâàíèÿ ãðàäèåíòíûõ ãåëåé, îïðåäåëåííûõ áóôåðíûõ ñèñòåì). Íàïðèìåð, òðèöèí-ÏÀÀà ãåëè, ñîäåðæàùèå òðèöèí â êà÷åñòâå îòñòàþùå- ãî èîíà â ðàçäåëÿþùåì áóôåðíîì ðàñòâîðå äëÿ ýëåêòðîôîðåçà (âìåñòî ãëèöèíà, êàê â ìåòîäå, îïèñàííîì âûøå), ïîçâîëÿþò ðàçäåëÿòü î÷åíü ìàëåíüêèå áåëêè è ïåïòèäû îò ìåíåå 10 000 äî 15 000 äàëüòîí. Äåíàòóðèðóþùèé ýëåêòðîôîðåç â ïîëèàêðè- ëàìèäíîì ãåëå ñ èñïîëüçîâàíèåì íàòðèÿ äîäå- öèëñóëüôàòà (ÄÑÍ-ÏÀÀÃ) ÿâëÿåòñÿ íàèáîëåå îáùåïðèíÿòûì ìåòîäîì ýëåêòðîôîðåçà, êîòî- ðûé èñïîëüçóåòñÿ äëÿ îöåíêè êà÷åñòâà áåëêîâ â ôàðìàöåâòè÷åñêîé ïðîäóêöèè è îïèñàí íèæå â êà÷åñòâå ïðèìåðà óêàçàííîãî ìåòîäà. Êàê ïðà- âèëî àíàëèòè÷åñêèé ýëåêòðîôîðåç áåëêîâ ïðî- âîäÿò â ïîëèàêðèëàìèäíûõ ãåëÿõ â óñëîâèÿõ, îáåñïå÷èâàþùèõ èõ äèññîöèàöèþ íà îòäåëüíûå ïîëèïåïòèäíûå ñóáúåäèíèöû è ìèíèìèçèðóþ- ùèõ àãðåãàöèþ. ×àùå âñåãî ïåðåä íàíåñåíèåì íà ãåëü áåëêè ïîäâåðãàþò äèññîöèàöèè íàãðåâà- íèåì ñ ñèëüíûì àíèîííûì äåòåðãåíòîì — íà- òðèÿ äîäåöèëñóëüôàòîì (ÄÑÍ). Äåíàòóðèðîâàí- íûå ïîëèïåïòèäû ñâÿçûâàþòñÿ ñ ÄÑÍ, ïðåâðà- ùàÿñü â îòðèöàòåëüíî çàðÿæåííûå ÷àñòèöû ñ ïîñòîÿííûì îòíîøåíèåì ìàññû ê çàðÿäó íåçà- âèñèìî îò òèïà áåëêà. Ïîñêîëüêó êîëè÷åñòâî ñâÿçàííîãî ÄÑÍ ïî÷òè âñåãäà ïðîïîðöèîíàëüíî ìîëåêóëÿðíîé ìàññå ïîëèïåïòèäà è íå çàâèñèò îò åãî ïîñëåäîâàòåëüíîñòè, ÄÑÍ-ïîëèïåïòèä- íûå êîìïëåêñû ìèãðèðóþò â ïîëèàêðèëàìèä- íîì ãåëå ñî ñêîðîñòüþ, çàâèñÿùåé îò ðàçìåðà ïîëèïåïòèäà. Ýëåêòðîôîðåòè÷åñêàÿ ïîäâèæíîñòü ïîëó- ÷åííûõ äåòåðãåíò-ïîëèïåïòèäíûõ êîìïëåêñîâ íàõîäèòñÿ â ôóíêöèîíàëüíîé âçàèìîñâÿçè ñ èõ ìîëåêóëÿðíûìè ìàññàìè. Ìèãðàöèÿ ÄÑÍ-êîì- ïëåêñîâ ïðîèñõîäèò â íàïðàâëåíèè ê àíîäó, ïðè ýòîì êîìïëåêñû ñ íèçêèìè ìîëåêóëÿðíûìè ìàñ- ñàìè äâèæóòñÿ áûñòðåå, ÷åì ñ áîëüøèìè ìîëå- êóëÿðíûìè ìàññàìè. Ñëåäîâàòåëüíî, ìîëåêó- ëÿðíàÿ ìàññà áåëêà ìîæåò áûòü îïðåäåëåíà ïî åãî îòíîñèòåëüíîé ïîäâèæíîñòè â êàëèáðîâàí- íîì ÄÑÍ-ÏÀÀÃ, à íàëè÷èå åäèíè÷íîé ïîëîñû â ãåëå ÿâëÿåòñÿ êðèòåðèåì ÷èñòîòû áåëêà. Ìîäèôèêàöèè ïîëèïåïòèäíîé öåïè, íàïðè- ìåð, N- èëè Î-ñâÿçàííîå ãëèêîçèëèðîâàíèå, ïðèâîäÿò ê çíà÷èòåëüíîìó âëèÿíèþ íà êàæó- ùóþñÿ ñðåäíþþ ìîëåêóëÿðíóþ ìàññó áåëêà, ïîñêîëüêó ÄÑÍ íå ñâÿçûâàåòñÿ ñ óãëåâîäíûì êîìïîíåíòîì òàê æå, êàê ñ ïîëèïåïòèäíûì.  ýòîì ñëó÷àå ïîñòîÿííîå îòíîøåíèå çàðÿäà ê ìî- ëåêóëÿðíîé ìàññå íå ñîõðàíÿåòñÿ.
 çàâèñèìîñòè îò ñòåïåíè ãëèêîçèëèðîâàíèÿ è äðóãèõ ïîñòòðàíñëÿöèîííûõ ìîäèôèêàöèé ñðåäíÿÿ ìîëåêóëÿðíàÿ ìàññà áåëêîâ íå ìîæåò áûòü èñòèííûì îòðàæåíèåì ìàññû ïîëèïåïòèä- íîé öåïè. Âîññòàíàâëèâàþùèå óñëîâèÿ. Ïîëèïåï- òèäíûå ñóáúåäèíèöû è òðåõìåðíàÿ ñòðóêòóðà áåëêîâ ÷àñòî ïîääåðæèâàþòñÿ áëàãîäàðÿ ïðè- ñóòñòâèþ äèñóëüôèäíûõ ñâÿçåé. Öåëü àíàëèçà ÄÑÍ-ÏÀÀà â âîññòàíàâëèâàþùèõ óñëîâèÿõ ñî- ñòîèò â òîì, ÷òîáû ðàçðóøèòü ñòðóêòóðó áåëêîâ ðàñùåïëåíèåì äèñóëüôèäíûõ ñâÿçåé. Ïîëíàÿ äåíàòóðàöèÿ è äèññîöèàöèÿ áåëêîâ îáðàáîòêîé 75 2-ìåðêàïòîýòàíîëîì èëè äèòèîòðåèòîëîì (ÄÒÒ) ïðèâîäèò ê ðàçâîðà÷èâàíèþ ïîëèïåïòèäíîé öåïè è ïîñëåäóþùåìó êîìïëåêñîîáðàçîâàíèþ ñ ÄÑÍ.  ýòèõ óñëîâèÿõ ìîëåêóëÿðíóþ ìàññó ïî- ëèïåïòèäíûõ ñóáúåäèíèö ìîæíî ðàññ÷èòàòü ìå- òîäîì ëèíåéíîé ðåãðåññèè (äëÿ ïîëó÷åíèÿ áî- ëåå òî÷íîãî ðåçóëüòàòà — ìåòîäîì íåëèíåéíîé ðåãðåññèè) ïðè èñïîëüçîâàíèè ïîäõîäÿùèõ ñòàíäàðòîâ ìîëåêóëÿðíûõ ìàññ. Íåâîññòàíàâëèâàþùèå óñëîâèÿ. Äëÿ ðÿäà èñïûòàíèé ïîëíàÿ äèññîöèàöèÿ áåëêà íà ïîëè- ïåïòèäíûå ñóáúåäèíèöû íåæåëàòåëüíà.  îò- ñóòñòâèè îáðàáîòêè âîññòàíàâëèâàþùèìè àãåí- òàìè, òàêèìè, êàê 2-ìåðêàïòîýòàíîë èëè ÄÒÒ, äèñóëüôèäíûå êîâàëåíòíûå ñâÿçè îñòàþòñÿ íå- ïîâðåæäåííûìè è ðàçäåëåíèÿ íà ïîëèïåïòèä- íûå ñóáúåäèíèöû íå ïðîèñõîäèò. Îëèãîìåðíûå ÄÑÍ-áåëêîâûå êîìïëåêñû ìèãðèðóþò ìåäëåí- íåå, ÷åì èõ ÄÑÍ-ïîëèïåïòèäíûå ñóáúåäèíèöû. Êðîìå òîãî, íåâîññòàíîâëåííûå áåëêè íå ìîãóò áûòü öåëèêîì íàñûùåíû ÄÑÍ è, ñîîòâåòñòâåí- íî, ïîýòîìó íå ìîãóò ñâÿçûâàòü äåòåðãåíò â ïî- ñòîÿííîì ìàññîâîì îòíîøåíèè. Äèñóëüôèäíûå ñâÿçè âíóòðè öåïè óêðåïëÿþò ñòðóêòóðó ïîëè- ïåïòèäà, îáû÷íî ïîñðåäñòâîì óìåíüøåíèÿ ãèä- ðîäèíàìè÷åñêîãî ðàäèóñà ìîëåêóëû, è òàêèì îáðàçîì óìåíüøàÿ êàæóùóþñÿ ñðåäíþþ ìîëå- êóëÿðíóþ ìàññó.  ñâÿçè ñ ýòèì, îïðåäåëåíèå ìîëåêóëÿðíîé ìàññû ýòèõ ìîëåêóë ñ èñïîëüçî- âàíèåì ÄÑÍ-ÏÀÀà ÿâëÿåòñÿ ìåíåå ñòàíäàðòè- çîâàííûì, ÷åì àíàëèç ïîëíîñòüþ äåíàòóðèðî- âàííûõ ïîëèïåïòèäîâ, òàê êàê íåîáõîäèìî, ÷òî- áû è ñòàíäàðòû è àíàëèçèðóåìûå áåëêè èìåëè áû îäèíàêîâûå êîíôèãóðàöèè äëÿ äîñòîâåðíîãî ñðàâíåíèÿ. 5-1-3.ÕÀÐÀÊÒÅÐÈÑÒÈÊÀ ÝËÅÊÒÐÎÔÎÐÅÇÀ  ÃÅËÅ Ñ ÏÐÅÐÛÂÈÑÒÎÉ ÁÓÔÅÐÍÎÉ ÑÈÑÒÅÌÎÉ (ÄÈÑÊ-ÝËÅÊÒÐÎÔÎÐÅÇ) Íàèáîëåå øèðîêî ïðèìåíÿåìûé ýëåêòðîôî- ðåòè÷åñêèé ìåòîä èññëåäîâàíèÿ ñëîæíûõ áåë- êîâûõ ñìåñåé, èñïîëüçóåò ïðåðûâèñòóþ áóôåð- íóþ ñèñòåìó, âêëþ÷àþùóþ äâà ñìåæíûõ, íî ðàçíûõ ãåëÿ: ðàçðåøàþùèé èëè ðàçäåëÿþùèé (íèæíèé) ãåëü è êîíöåíòðèðóþùèé (âåðõíèé) ãåëü. Ýòè äâà ãåëÿ îòëè÷àþòñÿ ðàçìåðàìè ïîð, ðÍ è èîííîé ñèëîé. Êðîìå òîãî, èñïîëüçóþòñÿ ðàçíûå ïî ïîäâèæíîñòè èîíû â ãåëå è ýëåêòðîä- íûõ áóôåðíûõ ðàñòâîðàõ. Áëàãîäàðÿ íàëè÷èþ ïðåðûâèñòîñòè áóôåðíîé ñèñòåìû ïðîèñõîäèò êîíöåíòðèðîâàíèå áîëüøèõ îáúåìîâ àíàëèçè- ðóåìîãî îáðàçöà â êîíöåíòðèðóþùåì ãåëå, ÷òî îáåñïå÷èâàåò åãî íàèëó÷øåå ðàçðåøåíèå. Ïîñëå ïîäêëþ÷åíèÿ èñòî÷íèêà òîêà ïåðåïàä íàïðÿæå- íèÿ ïðèâîäèò ê òîìó, ÷òî áåëêè ïðîíèêàþò â êîíöåíòðèðóþùèé ãåëü. Ãëèöèíàò-èîíû èç ýëåêòðîäíîãî áóôåðíîãî ðàñòâîðà äâèãàþòñÿ âñëåä çà áåëêàìè â êîíöåíòðèðóþùèé ãåëü. Áû- ñòðî îáðàçóåòñÿ îáëàñòü ïîäâèæíîé ãðàíèöû ñ âûñîêîïîäâèæíûìè õëîðèä-èîíàìè íà ïåðåä- íåì êðàþ è îòíîñèòåëüíî ìåäëåííûìè ãëèöè- íàò-èîíàìè íà çàäíåì. Îáðàçóåòñÿ ëîêàëèçîâàí- íûé âûñîêîâîëüòíûé ãðàäèåíò ìåæäó ôðîíòà- ìè ëèäèðóþùèõ è îòñòàþùèõ èîíîâ, çàñòàâëÿÿ ÄÑÍ-áåëêîâûå êîìïëåêñû ôîðìèðîâàòü òîíêèå çîíû (äèñêè) è ìèãðèðîâàòü ìåæäó ôàçàìè õëî- ðèäà è ãëèöèíàòà.  øèðîêèõ ãðàíèöàõ, íåçàâèñèìî îò âûñîòû íàíåñåííîãî îáðàçöà, âñå ÄÑÍ-áåëêè êîíöåí- òðèðóþòñÿ â î÷åíü óçêóþ îáëàñòü è äâèãàþòñÿ ïî íàïðàâëåíèþ ê ðàçðåøàþùåìó ãåëþ â âèäå ÷åòêî îïðåäåëåííîé òîíêîé çîíû ñ âûñîêîé ïëîòíîñòüþ áåëêà.
Êðóïíîïîðèñòûé êîíöåí- òðèðóþùèé ãåëü íå çàäåðæèâàåò ìèãðàöèþ áîëüøèíñòâà áåëêîâ è, â îñíîâíîì, ñëóæèò àí- òèêîíâåêöèîííîé ñðåäîé. Íà ãðàíèöå ðàçäåëà êîíöåíòðèðóþùåãî è ðàçðåøàþùåãî ãåëåé ïðî- èñõîäèò ðåçêîå âîçðàñòàíèå ýôôåêòà çàäåðæèâà- íèÿ áåëêîâ âñëåäñòâèå îãðàíè÷åííîãî ðàçìåðà ïîð ðàçðåøàþùåãî ãåëÿ è ïðåðûâèñòîñòè áó- ôåðíîãî ðàñòâîðà, ÷òî òàêæå ñïîñîáñòâóåò ôî- êóñèðîâàíèþ áåëêîâ. Îäíîâðåìåííî äâèæåíèå áåëêîâ â ðàçðåøàþùåì ãåëå ïðîäîëæàåò çàìåä- ëÿòüñÿ âñëåäñòâèå ñèòîâûõ (ðàçäåëÿþùèõ) ñâîéñòâ ìàòðèöû. Ãëèöèíàò-èîíû äîãîíÿþò áåëêè, êîòîðûå äàëåå ïåðåäâèãàþòñÿ â ïðî- ñòðàíñòâå ñ ïîñòîÿííûì ðÍ, îáðàçîâàííûì òðèñ(ãèäðîêñèìåòèë)àìèíîìåòàíîì è ãëèöè- íîì. Ìîëåêóëÿðíî-ñèòîâûå ñâîéñòâà ôàçû ïðè- âîäÿò ê ðàçäåëåíèþ ÄÑÍ-ïîëèïåïòèäíûõ êîì- ïëåêñîâ â ñîîòâåòñòâèè ñ èõ ìîëåêóëÿðíûìè ìàññàìè. 5-1-4. ÏÐÈÃÎÒÎÂËÅÍÈÅ ÂÅÐÒÈÊÀËÜÍÛÕ ÏÐÅÐÛÂÈÑÒÎ-ÁÓÔÅÐÍÛÕ ÄÑÍ-ÏÎËÈÀÊÐÈËÀÌÈÄÍÛÕ ÃÅËÅÉ Äàííûé ðàçäåë îïèñûâàåò ïðèãîòîâëåíèå ãåëåé ñ èñïîëüçîâàíèåì ñïåöèàëüíîãî èíñòðó- ìåíòàðèÿ. Ýòî íå îòíîñèòñÿ ê ñáîðíûì ãåëÿì.  ñëó÷àå ïðèìåíåíèÿ ïðåäâàðèòåëüíî ïðèãîòîâ- ëåííûõ èëè ëþáûõ äðóãèõ êîììåð÷åñêè äîñòóï- íûõ ãåëåé è èíîãî îáîðóäîâàíèÿ íåîáõîäèìî 76 ðóêîâîäñòâîâàòüñÿ èíñòðóêöèÿìè ïðîèçâîäèòå- ëÿ. Ðåêîìåíäóåòñÿ èñïîëüçîâàòü êîììåð÷åñêè äîñòóïíûå ðåàêòèâû, î÷èùåííûå â ðàñòâîðå.  èíîì ñëó÷àå, à òàêæå ïðè èñïîëüçîâàíèè íåäîñ- òàòî÷íî î÷èùåííûõ ðåàêòèâîâ, ïðîâîäÿò ïðåä- âàðèòåëüíóþ îáðàáîòêó. Íàïðèìåð, ðàñòâîð, èìåþùèé òàêóþ ñòåïåíü çàãðÿçíåíèÿ, ÷òî åãî íåîáõîäèìî ôèëüòðîâàòü, äîëæåí áûòü òàêæå äåèîíèçèðîâàí ñ èñïîëüçîâàíèåì èîíîîáìåí- íîé ñìîëû ñìåøàííîãî òèïà (êàòèîíîîáìåí- íîé/àíèîíîîáìåííîé) äëÿ óäàëåíèÿ àêðèëîâîé êèñëîòû è äðóãèõ çàðÿæåííûõ ïðîäóêòîâ ðàçëî- æåíèÿ. Ðàñòâîðû àêðèëàìèäà/áèñàêðèëàìèäà è ïåðñóëüôàò â òâåðäîì ñîñòîÿíèè îñòàþòñÿ ñòà- áèëüíûìè â òå÷åíèå äëèòåëüíîãî ïåðèîäà ïðè óñëîâèè õðàíåíèÿ â ñîîòâåòñòâèè ñ ðåêîìåíäà- öèÿìè. Ñáîðêà êàññåò, ôîðìèðóþùèõ ãåëü. Äâå ñòåêëÿííûå ïëàñòèíêè (íàïðèìåð, ðàçìåðîì 10 ñì ´ 8 ñì), ïîëèòåòðàôòîðýòèëåíîâóþ ãðå- áåíêó, äâå ïðîêëàäêè è ñèëèêîíîâûå òðóáêè (íà- ïðèìåð, äèàìåòðîì 0,6 ìì è äëèíîé 35 ñì) ìîþò ñ èñïîëüçîâàíèåì ìÿãêèõ ìîþùèõ ñðåäñòâ è òùàòåëüíî îïîëàñêèâàþò âîäîé, à çà- òåì áåçâîäíûì ýòàíîëîì è âûñóøèâàþò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå. Ïðîêëàäêè è òðóáêè ñìàçûâàþò íåñèëèêîíîâûì ìàñëîì. Ïðîêëàäêè óêëàäûâàþò âäîëü äâóõ êîðîòêèõ ñòîðîí ñòåê- ëÿííûõ ïëàñòèí íà ðàññòîÿíèè 2 ìì îò èõ êðàåâ è 2 ìì îò äëèííîé ñòîðîíû, ÿâëÿþùåéñÿ äíîì ãåëÿ. Èñïîëüçóÿ îäíó ïðîêëàäêó â êà÷åñòâå îñ- íîâû, íà÷èíàþò óêëàäûâàòü òðóáêó. Îñòîðîæíî çàãèáàþò òðóáêó ê íèçó ïðîêëàäêè è ïðîòÿãèâà- þò âäîëü äëèííîé ñòîðîíû ñòåêëÿííîé ïëàñòèí- êè. Ïðèäåðæèâàÿ òðóáêó âäîëü äëèííîé ñòîðî- íû ïëàñòèíêè, ñíîâà çàãèáàþò òðóáêó è ïðîòÿ- ãèâàþò åå ïî êîðîòêîé ñòîðîíå ñòåêëÿííîé ïëàñòèíêè, èñïîëüçóÿ ïðîêëàäêó â êà÷åñòâå íà- ïðàâëÿþùåé. Íàêðûâàþò äðóãîé ñòåêëÿííîé ïëàñòèíêîé, ïëîòíî ïðèæèìàÿ êàññåòó ðóêàìè. Óñòàíàâëèâàþò ïî äâà çàæèìà íà äâå êîðîòêèå ñòîðîíû êàññåòû. Îñòîðîæíî óñòàíàâëèâàþò ÷åòûðå çàæèìà íà äëèííóþ ñòîðîíó êàññåòû ãåëÿ, ôîðìèðóÿ äíî êàññåòû. Íåîáõîäèìî óäî- ñòîâåðèòüñÿ, ÷òîáû òðóáêà ïðîõîäèëà âäîëü êðàÿ ñòåêëÿííîé ïëàñòèíêè è íèãäå íå âûäàâëè- âàëàñü ïðè ðàçìåùåíèè çàæèìîâ. Êàññåòà ãîòî- âà äëÿ çàëèâàíèÿ ãåëåì. Ïðèãîòîâëåíèå ãåëÿ.  ñëó÷àå ïðèãîòîâëå- íèÿ ïðåðûâèñòîãî áóôåðíîãî ÄÑÍ-ïîëèàêðèëà- ìèäíîãî ãåëÿ ðåêîìåíäóåòñÿ ñíà÷àëà çàëèòü ðàç- äåëÿþùèé ãåëü, äîæäàòüñÿ åãî ïîëèìåðèçàöèè, à çàòåì çàëèòü êîíöåíòðèðóþùèé ãåëü, ïîñêîëü- êó ãåëè ðàçëè÷àþòñÿ ñîäåðæàíèåì àêðèëàìè- äà-áèñàêðèëàìèäà, áóôåðíûì ðàñòâîðîì è ðÍ. Ïðèãîòîâëåíèå ðàçäåëÿþùåãî ãåëÿ.
 êîíè- ÷åñêîé êîëáå ãîòîâÿò ñîîòâåòñòâóþùèé îáúåì ðàñòâîðà ñ íåîáõîäèìîé êîíöåíòðàöèåé àêðèëà- ìèäà äëÿ ôîðìèðîâàíèÿ ðàçðåøàþùåãî ãåëÿ, èñïîëüçóÿ óêàçàíèÿ, ïðèâåäåííûå â òàáëèöå 2.1.2.30.-1. Êîìïîíåíòû ñìåøèâàþò â óêàçàí- íîé ïîñëåäîâàòåëüíîñòè. Ïðè íåîáõîäèìîñòè ïåðåä äîáàâëåíèåì ðàñòâîðà àììîíèÿ ïåðñóëü- ôàòà è ÒÅÌÝÄà ðàñòâîð ôèëüòðóþò ïîä âàêóó- ìîì ÷åðåç àöåòàòöåëëþëîçíóþ ìåìáðàíó (äèà- ìåòð ïîð 0,45 ìêì); ðàñòâîð âûäåðæèâàþò ïîä âàêóóìîì, âçáàëòûâàÿ ôèëüòðàöèîííîå ïðèñïî- ñîáëåíèå äî îêîí÷àíèÿ îáðàçîâàíèÿ â ðàñòâîðå ïóçûðüêîâ. Çàòåì äîáàâëÿþò ñîîòâåòñòâóþùåå êîëè÷åñòâî ðàñòâîðà àììîíèÿ ïåðñóëüôàòà è ÒÅÌÝÄà, êàê óêàçàíî â òàáëèöå 2.1.2.30.-1, âçáàëòûâàþò è ñðàçó çàëèâàþò â ïðîñòðàíñòâî ìåæäó äâóìÿ ïëàñòèíêàìè êàññåòû. Îñòàâëÿþò íåîáõîäèìîå ìåñòî äëÿ êîíöåíòðèðóþùåãî ãåëÿ (äëèíà çóáöîâ ãðåáåíêè ïëþñ 1 ñì). Èñïîëüçóÿ çàîñòðåííóþ ñòåêëÿííóþ ïèïåòêó, îñòîðîæíî íàñëàèâàþò íàñûùåííûé âîäîé ðàñòâîð èçîáó- òàíîëà. Ãåëü âûäåðæèâàþò â âåðòèêàëüíîì ïî- ëîæåíèè ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå äî ïîëè- ìåðèçàöèè ãåëÿ. Ïðèãîòîâëåíèå êîíöåíòðèðóþùåãî ãåëÿ. Ïîñëå çàâåðøåíèÿ ïîëèìåðèçàöèè (îêîëî 30 ìèí) ñëèâàþò èçîáóòàíîë è ïðîìûâàþò âåðõ- íþþ ïîâåðõíîñòü ãåëÿ íåñêîëüêî ðàç âîäîé äëÿ óäàëåíèÿ íàíåñåííîãî èçîáóòàíîëà è íåïîëèìå- ðèçîâàííûõ èçëèøêîâ àêðèëàìèäà. Ïî âîçìîæ- íîñòè ñ âåðõíåé ïîâåðõíîñòè ãåëÿ ñëèâàþò âîäó, à çàòåì óäàëÿþò îñòàòêè âîäû ïðè ïîìîùè êîí- ÷èêà áóìàæíîé ñàëôåòêè.  êîíè÷åñêîé êîëáå ãîòîâÿò ñîîòâåòñòâóþ- ùèé îáúåì ðàñòâîðà ñ íåîáõîäèìîé êîíöåíòðà- öèåé àêðèëàìèäà äëÿ ôîðìèðîâàíèÿ ãåëÿ, èñ- ïîëüçóÿ çíà÷åíèÿ, ïðèâåäåííûå â òàáëèöå 2.1.2.30.-2. Êîìïîíåíòû ñìåøèâàþò â óêàçàí- íîé ïîñëåäîâàòåëüíîñòè. Ïðè íåîáõîäèìîñòè ïåðåä äîáàâëåíèåì ðàñòâîðà àììîíèÿ ïåðñóëü- ôàòà è ÒÅÌÝÄà ðàñòâîð ôèëüòðóþò ïîä âàêóó- ìîì ÷åðåç àöåòàòöåëëþëîçíóþ ìåìáðàíó (äèà- ìåòð ïîð 0,45 ìêì); ðàñòâîð âûäåðæèâàþò ïîä âàêóóìîì, âñòðÿõèâàÿ ôèëüòðàöèîííîå ïðèñïî- 77 78 Òàáëèöà 2.1.2.30.-1.
— Ïðèãîòîâëåíèå ðàçäåëÿþùåãî ãåëÿ Êîìïîíåíòû ðàñòâîðà Îáúåì êîìïîíåíòà (ìë) íà 1 êàññåòó ãåëÿ âìåñòèìîñòüþ 5 ìë 10 ìë 15 ìë 20 ìë 25 ìë 30 ìë 40 ìë 50 ìë 6 % àêðèëàìèä Âîäà Ð 2,6 5,3 7,9 10,6 13,2 15,9 21,2 26,5 Ðàñòâîð àêðèëàìèäà(1) 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 8,0 10,0 1,5 ÌÒðèñ (ðÍ 8,8)(2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5 Ðàñòâîð 100 ã/ë ÄÑÍ(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 Ðàñòâîð 100 ã/ë ÀÏÑ(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 ÒÅÌÝÄ(5) 0,004 0,008 0,012 0,016 0,02 0,024 0,032 0,04 8 % àêðèëàìèä Âîäà Ð 2,3 4,6 6,9 9,3 11,5 13,9 18,5 23,2 Ðàñòâîð àêðèëàìèäà(1) 1,3 2,7 4,0 5,3 6,7 8,0 10,7 13,3 1,5 ÌÒðèñ (ðÍ 8,8)(2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5 Ðàñòâîð 100 ã/ë ÄÑÍ(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 Ðàñòâîð 100 ã/ë ÀÏÑ(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 ÒÅÌÝÄ(5) 0,003 0,006 0,009 0,012 0,015 0,018 0,024 0,03 10 % àêðèëàìèä Âîäà Ð 1,9 4,0 5,9 7,9 9,9 11,9 15,9 19,8 Ðàñòâîð àêðèëàìèäà(1) 1,7 3,3 5,0 6,7 8,3 10,0 13,3 16,7 1,5 ÌÒðèñ (ðÍ 8,8)(2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5 Ðàñòâîð 100 ã/ë ÄÑÍ(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 Ðàñòâîð 100 ã/ë ÀÏÑ(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 ÒÅÌÝÄ(5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02 12 % àêðèëàìèä Âîäà Ð 1,6 3,3 4,9 6,6 8,2 9,9 13,2 16,5 Ðàñòâîð àêðèëàìèäà(1) 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 12,0 16,0 20,0 1,5 ÌÒðèñ (ðÍ 8,8)(2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5 Ðàñòâîð 100 ã/ë ÄÑÍ(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 Ðàñòâîð 100 ã/ë ÀÏÑ(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 ÒÅÌÝÄ(5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02 14 % àêðèëàìèä Âîäà Ð 1,4 2,7 3,9 5,3 6,6 8,0 10,6 13,8 Ðàñòâîð àêðèëàìèäà(1) 2,3 4,6 7,0 9,3 11,6 13,9 18,6 23,2 1,5 ÌÒðèñ (ðÍ 8,8)(2) 1,2 2,5 3,6 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5 Ðàñòâîð 100 ã/ë ÄÑÍ(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 Ðàñòâîð 100 ã/ë ÀÏÑ(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 ÒÅÌÝÄ(5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02 15 % àêðèëàìèä Âîäà Ð 1,1 2,3 3,4 4,6 5,7 6,9 9,2 11,5 Ðàñòâîð àêðèëàìèäà(1) 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 20,0 25,0 1,5 ÌÒðèñ (ðÍ 8,8)(2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5 Ðàñòâîð 100 ã/ë ÄÑÍ(3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 Ðàñòâîð 100 ã/ë ÀÏÑ(4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 ÒÅÌÝÄ(5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02 (1) Ðàñòâîð àêðèëàìèäà: 30 % ðàñòâîð àêðèëàìèä-áèñàêðèëàìèäà (29:1) Ð. (2) 1,5 ÌÒðèñ (ðÍ 8,8): 1,5 Ì áóôåðíûé ðàñòâîð òðèñ-ãèäðîõëîðèäà ðÍ 8,8 Ð. (3) Ðàñòâîð 100 ã/ë ÄÑÍ: ðàñòâîð 100 ã/ë íàòðèÿ äîäåöèëñóëüôàòà Ð. (4) Ðàñòâîð 100 ã/ë ÀÏÑ: ðàñòâîð 100 ã/ë àììîíèÿ ïåðñóëüôàòà Ð. Áëàãîäàðÿ àììîíèÿ ïåðñóëüôàòó ïîÿâëÿþòñÿ ñâîáîäíûå ðàäèêàëû, óñêîðÿþùèå ïîëèìåðèçàöèþ àêðèëàìèäà è áèñàêðèëàìèäà. Òàê êàê ðàñòâîð àììîíèÿ ïåðñóëüôàòà áûñòðî ðàçëàãàåòñÿ, ñâåæèå ðàñòâîðû ñëåäóåò ãîòîâèòü åæåäíåâíî. (5) ÒÅÌÝÄ: òåòðàìåòèëýòèëåíäèàìèí Ð. ñîáëåíèå äî îêîí÷àíèÿ îáðàçîâàíèÿ â ðàñòâîðå ïóçûðüêîâ. Ïðèáàâëÿþò ñîîòâåòñòâóþùåå êî- ëè÷åñòâî ðàñòâîðà àììîíèÿ ïåðñóëüôàòà è ÒÅÌÝÄà, êàê óêàçàíî â òàáëèöå 2.1.2.30.-2, âçáàëòûâàþò è ñðàçó çàëèâàþò â ïðîñòðàíñòâî ìåæäó äâóìÿ ñòåêëÿííûìè ïëàñòèíêàìè êàññå- òû ïðÿìî íà ïîâåðõíîñòü ðàíåå çàïîëèìåðèçî- âàííîãî ðàçäåëÿþùåãî ãåëÿ. Âî èçáåæàíèå ïî- ÿâëåíèÿ âîçäóøíûõ ïóçûðüêîâ â ðàñòâîð êîí- öåíòðèðóþùåãî ãåëÿ ñðàçó âñòàâëÿþò ÷èñòóþ ïîëèòåòðàôòîðýòèëåíîâóþ ãðåáåíêó. Äîáàâëÿ- þò åùå ðàñòâîð êîíöåíòðèðóþùåãî ãåëÿ äî ïîë- íîãî çàïîëíåíèÿ ïðîñòðàíñòâà ìåæäó ãðåáåíêîé è ðàçäåëÿþùèì ãåëåì. Ãåëü âûäåðæèâàþò â âåð- òèêàëüíîì ïîëîæåíèè ïðè êîìíàòíîé òåìïåðà- òóðå äî ïîëèìåðèçàöèè ãåëÿ. Ïðèãîòîâëåíèå îáðàçöîâ. Åñëè èíîå íå óêàçàíî â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå, îáðàç- öû ìîãóò áûòü ïðèãîòîâëåíû ïðèâåäåííûìè íèæå ñïîñîáàìè.
Ïðèãîòîâëåíèå îáðàçöîâ (íåâîññòàíàâëè- âàþùèå óñëîâèÿ). Ñìåøèâàþò ðàâíûå îáúåìû ñìåñè, ñîñòîÿùåé èç âîäû Ð è èñïûòóåìîãî ïðå- ïàðàòà èëè ïðåïàðàòà ñðàâíåíèÿ, è êîíöåíòðè- ðîâàííîãî áóôåðíîãî ðàñòâîðà äëÿ ïðèãîòîâëå- íèÿ îáðàçöîâ ïðè ýëåêòðîôîðåçå â ïîëèàêðèëà- ìèäíîì ãåëå â ïðèñóòñòâèè äîäåöèëñóëüôàòà íàòðèÿ Ð. Ïðèãîòîâëåíèå îáðàçöîâ (âîññòàíàâëèâàþ- ùèå óñëîâèÿ). Ñìåøèâàþò ðàâíûå îáúåìû ñìåñè, ñîñòîÿùåé èç âîäû Ð è èñïûòóåìîãî ïðå- ïàðàòà èëè ïðåïàðàòà ñðàâíåíèÿ, è êîíöåíòðè- ðîâàííîãî áóôåðíîãî ðàñòâîðà äëÿ ïðèãîòîâëå- íèÿ îáðàçöîâ â âîññòàíàâëèâàþùèõ óñëîâèÿõ ïðè ýëåêòðîôîðåçå â ïîëèàêðèëàìèäíîì ãåëå â ïðèñóòñòâèè äîäåöèëñóëüôàòà íàòðèÿ Ð, ñî- äåðæàùåãî 2-ìåðêàïòîýòàíîë (èëè äèòèîòðåè- òîë) â êà÷åñòâå âîññòàíîâèòåëÿ. Êîíöåíòðàöèÿ, óêàçàííàÿ â ÷àñòíîé ôàðìà- êîïåéíîé ñòàòüå, ìîæåò âàðüèðîâàòü â çàâèñè- ìîñòè îò áåëêà è ñïîñîáà îêðàøèâàíèÿ. Îáðàáîòêà îáðàçöà: îáðàçåö âûäåðæèâàþò â êèïÿùåé âîäÿíîé áàíå â òå÷åíèå 5 ìèí èëè íà- ãðåâàòåëüíîì áëîêå ïðè òåìïåðàòóðå 100 °C, çà- òåì îõëàæäàþò. Òåìïåðàòóðà è âðåìÿ, óêàçàí- íûå â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå ìîãóò âàðüèðîâàòü â ñâÿçè ñ âîçìîæíûì ðàçðóøåíèåì áåëêà, êîòîðîå ìîæåò ïðîèçîéòè ïðè òåðìè÷å- ñêîé îáðàáîòêå. Óñòàíîâêà ãåëÿ â ïðèáîðå äëÿ ýëåêòðîôî- ðåçà è ýëåêòðîôîðåòè÷åñêîå ðàçäåëåíèå. Ïî- ñëå çàâåðøåíèÿ ïîëèìåðèçàöèè (îêîëî 30 ìèí) ïîëèòåòðàôòîðýòèëåíîâóþ ãðåáåíêó îñòîðîæíî óäàëÿþò. Ëóíêè íåçàìåäëèòåëüíî ïðîìûâàþò âîäîé èëè áóôåðíûì ðàáî÷èì ðàñòâîðîì äëÿ ýëåêòðîôîðåçà â ïîëèàêðèëàìèäíîì ãåëå â ïðè- ñóòñòâèè äîäåöèëñóëüôàòà íàòðèÿ Ð äëÿ óäà- ëåíèÿ íåïîëèìåðèçîâàííîãî àêðèëàìèäà. Ïðè íåîáõîäèìîñòè âûðàâíèâàþò ïåðåãîðîäêè êîí- öåíòðèðóþùåãî ãåëÿ ñ ïîìîùüþ òóïîé èãëû äëÿ ïîäêîæíûõ èíúåêöèé, ïðèêðåïëåííîé ê øïðè- 79 Òàáëèöà 2.1.2.30.-2. — Ïðèãîòîâëåíèå êîíöåíòðèðóþùåãî ãåëÿ Êîìïîíåíòû ðàñòâîðà Îáúåì êîìïîíåíòà (ìë) íà 1 êàññåòó ãåëÿ âìåñòèìîñòüþ 1 ìë 2 ìë 3 ìë 4 ìë 5 ìë 6 ìë 8 ìë 10 ìë Âîäà Ð 0,68 1,4 2,1 2,7 3,4 4,1 5,5 6,8 Ðàñòâîð àêðèëàìèäà(1) 0,17 0,33 0,5 0,67 0,83 1,0 1,3 1,7 1,0 ÌÒðèñ (ðÍ 6,8)(2) 0,13 0,25 0,38 0,5 0,63 0,75 1,0 1,25 Ðàñòâîð 100 ã/ë ÄÑÍ(3) 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,08 0,1 Ðàñòâîð 100 ã/ë ÀÏÑ(4) 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,08 0,1 ÒÅÌÝÄ(5) 0,001 0,002 0,003 0,004 0,005 0,006 0,008 0,01 (1) Ðàñòâîð àêðèëàìèäà: 30 % ðàñòâîð àêðèëàìèä/áèñàêðèëàìèäà (29:1) Ð. (2) 1 ÌÒðèñ (ðÍ 6,8): 1 Ì áóôåðíûé ðàñòâîð òðèñ-ãèäðîõëîðèäà ðÍ 6,8 Ð. (3) Ðàñòâîð 100 ã/ë ÄÑÍ: ðàñòâîð 100 ã/ë íàòðèÿ äîäåöèëñóëüôàòà Ð. (4) Ðàñòâîð 100 ã/ë ÀÏÑ: ðàñòâîð 100 ã/ë àììîíèÿ ïåðñóëüôàòà Ð. Áëàãîäàðÿ àììîíèÿ ïåðñóëüôàòó ïîÿâëÿþòñÿ ñâîáîäíûå ðàäèêàëû, óñêîðÿþùèå ïîëèìåðèçàöèþ àêðèëàìèäà è áèñàêðèëàìèäà. Ïîñêîëüêó ðàñòâîð àììîíèÿ ïåðñóëüôàòà áûñòðî ðàçëàãàåòñÿ, ñâåæèå ðàñòâîðû ñëåäóåò ãîòîâèòü åæåäíåâíî. (5) ÒÅÌÝÄ: òåòðàìåòèëýòèëåíäèàìèí Ð. öó. Ñíèìàþò çàæèìû ñ îäíîé êîðîòêîé ñòîðîíû, îñòîðîæíî âûòÿãèâàþò òðóáêó è âîçâðàùàþò çà- æèìû íà ìåñòî. Ïîâòîðÿþò ýòè îïåðàöèè ñ äðó- ãîé êîðîòêîé ñòîðîíû. Óäàëÿþò òðóáêó ñî äíà ãåëÿ. Ïîìåùàþò ãåëü â ïðèáîð äëÿ ýëåêòðîôî- ðåçà. Âåðõíèé è íèæíèé ðåçåðâóàðû íàïîëíÿþò áóôåðíûì ðàñòâîðîì äëÿ ýëåêòðîôîðåçà. Óäàëÿ- þò âñå ïóçûðüêè, îáðàçóþùèåñÿ íà äíå ãåëÿ ìå- æäó äâóìÿ ñòåêëÿííûìè ïëàñòèíêàìè. Äëÿ ýòèõ öåëåé ëó÷øå âñåãî èñïîëüçîâàòü èçîãíóòóþ èãëó, ïðèêðåïëåííóþ ê øïðèöó. Íå ñëåäóåò ïðî- âîäèòü ïåðâîíà÷àëüíûé ýëåêòðîôîðåç äî íàíå- ñåíèÿ îáðàçöîâ, òàê êàê ýòî ïðèâåäåò ê íàðóøå- íèþ ïðåðûâèñòîñòè áóôåðíîé ñèñòåìû. Ïåðåä íàíåñåíèåì îáðàçöîâ îñòîðîæíî îïîëàñêèâàþò êàæäóþ ëóíêó ðàáî÷èì ðàñòâîðîì äëÿ ýëåêòðî- ôîðåçà â ïîëèàêðèëàìèäíîì ãåëå â ïðèñóòñòâèè äîäåöèëñóëüôàòà íàòðèÿ Ð.
Ãîòîâÿò èñïûòóå- ìûé è êîíòðîëüíûé îáðàçöû â ðåêîìåíäîâàí- íîì áóôåðíîì ðàñòâîðå äëÿ îáðàçöîâ è îáðàáà- òûâàþò, êàê óêàçàíî â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. Íàíîñÿò íåîáõîäèìîå êîëè÷åñòâî êàæ- äîãî ðàñòâîðà â ëóíêè êîíöåíòðèðóþùåãî ãåëÿ. Ýëåêòðîôîðåç ïðîâîäÿò â óñëîâèÿõ, ðåêî- ìåíäîâàííûõ ïðîèçâîäèòåëåì îáîðóäîâàíèÿ. Ïðîèçâîäèòåëè îáîðóäîâàíèÿ äëÿ ÄÑÍ-ÏÀÀà ìîãóò ïðåäîñòàâëÿòü ãåëè ðàçëè÷íîé ïëîùàäè è òîëùèíû. Âðåìÿ ïðîâåäåíèÿ ýëåêòðîôîðåçà è ïîêàçàòåëè òîê/íàïðÿæåíèå ìîãóò âàðüèðîâàòü ïðè äîñòèæåíèè îïòèìàëüíîãî ðàçäåëåíèÿ. Íå- îáõîäèìî óäîñòîâåðèòüñÿ, ÷òî ôðîíò êðàñèòåëÿ ïåðåìåùàåòñÿ â ðàçäåëÿþùèé ãåëü. Êîãäà êðà- ñèòåëü äîõîäèò äî íèæíåãî êðàÿ ãåëÿ, ýëåêòðî- ôîðåç îñòàíàâëèâàþò. Êàññåòó ñ ãåëåì âûíèìà- þò èç ïðèáîðà è îñòîðîæíî ðàçäåëÿþò ñòåêëÿí- íûå ïëàñòèíû. Óäàëÿþò ïðîêëàäêè, îòðåçàþò è îòáðàñûâàþò êîíöåíòðèðóþùèé ãåëü è íåìåä- ëåííî íà÷èíàþò îêðàøèâàíèå îñòàâøåãîñÿ ãåëÿ. 5-2. ÄÑÍ-ÏÀÀà ÃÐÀÄÈÅÍÒÍÛÅ ÊÎÍÒÐÀÖÈÎÍÍÛÅ ÃÅËÈ Ãðàäèåíòíûå ãåëè (ðàçäåëÿþùèå ãåëè) ãîòî- âÿò ñ óâåëè÷åíèåì êîíöåíòðàöèè àêðèëàìèäà â íàïðàâëåíèè ñâåðõó âíèç. Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ãðàäèåíòíûõ ãåëåé òðåáóåòñÿ óñòðîéñòâî äëÿ ôîðìèðîâàíèÿ ãðàäèåíòà. Ãîòîâûå ãðàäèåíòíûå ãåëè äîñòóïíû â ïðîäàæå ñ èñïîëüçîâàíèåì ðå- êîìåíäîâàííûõ ïðîòîêîëîâ. Ãðàäèåíòíûå ãåëè îáëàäàþò íåêîòîðûìè ïðåèìóùåñòâàìè, òàê êàê îíè ïîçâîëÿþò ðàçäå- ëÿòü áåëêè, êîòîðûå ñîâìåñòíî ìèãðèðóþò â ãå- ëÿõ ñ ôèêñèðîâàííîé êîíöåíòðàöèåé àêðèëàìè- äà. Ïðè ýëåêòðîôîðåçå áåëêè ìèãðèðóþò äî òåõ ïîð, ïîêà ðàçìåð ïîð íå ïðåïÿòñòâóåò èõ äàëü- íåéøåìó ïðîäâèæåíèþ, è ïîýòîìó âîçíèêàåò ýôôåêò óêëàäêè, êîòîðûé ïðèâîäèò ê ïîÿâëå- íèþ áîëåå ðåçêèõ ïîëîñ. Êàê ïîêàçàíî â òàáëè- öå 2.1.2.30.-3, ãðàäèåíòíûå ãåëè òàêæå ïîçâîëÿ- þò ðàçäåëÿòü áåëêè ñ áîëåå øèðîêèì äèàïàçî- íîì ìîëåêóëÿðíûõ ìàññ ïî ñðàâíåíèþ ñ ãåëÿìè ñ ôèêñèðîâàííîé êîíöåíòðàöèåé.  òàáëèöå ïðèâåäåíû ðåêîìåíäîâàííûå ñî- ñòàâû ëèíåéíîãî ãðàäèåíòà, ñ ñîïîñòàâëåíèåì äèàïàçîíà êîíöåíòðàöèé àêðèëàìèäà ê ñîîòâåò- ñòâóþùèì äèàïàçîíàì ìîëåêóëÿðíûõ ìàññ áåë- êà. Íåîáõîäèìî ó÷èòûâàòü, ÷òî ìîãóò áûòü ïðè- ãîòîâëåíû äðóãèå ôîðìû ãðàäèåíòà (íàïðèìåð, âîãíóòàÿ) äëÿ ñïåöèàëüíîãî ïðèìåíåíèÿ. Ãðàäèåíòíûå ãåëè òàêæå ïðèìåíÿþòñÿ äëÿ îïðåäåëåíèÿ ìîëåêóëÿðíîé ìàññû è ñòåïåíè ÷èñòîòû áåëêà. 5-3. ÎÁÍÀÐÓÆÅÍÈÅ ÁÅËÊΠ ÃÅËßÕ Íèæå äåòàëüíî îïèñàíû íàèáîëåå øèðîêî ïðèìåíÿåìûå ìåòîäû îêðàøèâàíèÿ áåëêîâ êðà- ñèòåëåì Êóìàññè è ñåðåáðîì. Êîììåð÷åñêè äîñ- òóïíû òàêæå è äðóãèå êðàñèòåëè, ìåòîäû îáíà- ðóæåíèÿ è íàáîðû. Íàïðèìåð, ôëóîðåñöåíòíûå êðàñèòåëè èñïîëüçóþòñÿ ñîâìåñòíî ñ ôëóîðåñ- öåíòíûì óñòðîéñòâîì äëÿ ïîëó÷åíèÿ èçîáðàæå- íèé è ÷àñòî îáåñïå÷èâàþò ëèíåéíóþ çàâèñè- ìîñòü àíàëèòè÷åñêîãî ñèãíàëà â øèðîêîì äèà- ïàçîíå êîíöåíòðàöèé áåëêà, ÷àñòî â ïðåäåëàõ íåñêîëüêèõ ïîðÿäêîâ â çàâèñèìîñòè îò ïðèðîäû áåëêà. Îêðàøèâàíèå êðàñèòåëåì Êóìàññè ïîçâîëÿ- åò îïðåäåëÿòü îò 1 ìêã äî 10 ìêã áåëêîâ â îäíîé ïîëîñå. Îêðàøèâàíèå ñåðåáðîì — áîëåå ÷óâñò- âèòåëüíûé ìåòîä îêðàøèâàíèÿ áåëêîâ, ïðè ýòîì ìîãóò áûòü îáíàðóæåíû ïîëîñû, ñîäåðæàùèå îò 10 íã äî 100 íã áåëêà. Ýòè öèôðû ñ÷èòàþòñÿ 80 Òàáëèöà 2.1.2.30.-3. — Ðàçäåëÿþùàÿ ñïîñîáíîñòü ãå- ëåé ñ ãðàäèåíòîì êîíöåíòðàöèè. Àêðèëàìèä (%) Äèàïàçîí ìîëåêóëÿðíûõ ìàññ áåëêà (êÄà) 5 – 15 20 – 250 5 – 20 10 – 200 10 – 20 10 – 150 8 – 20 8 – 150 ðåàëüíî äîñòèæèìûìè äëÿ äàííîé îêðàñêè ãå- ëåé. Èíîãäà â ëèòåðàòóðå óêàçûâàåòñÿ ÷óâñòâè- òåëüíîñòü îêðàøèâàíèÿ ñåðåáðîì íà 1 èëè 2 ïî- ðÿäêà âûøå. Îêðàøèâàíèå êðàñèòåëåì Êóìàññè îáåñïå- ÷èâàåò áîëåå ëèíåéíûé ñèãíàë, ÷åì îêðàøèâà- íèå ñåðåáðîì; òåì íå ìåíåå, ñèãíàë è äèàïàçîí çàâèñÿò îò ïðèðîäû áåëêà è âðåìåíè ïðîâåäåíèÿ ýëåêòðîôîðåòè÷åñêîãî ðàçäåëåíèÿ.
Âîñïðîèçâî- äèìîñòü ïðè îêðàøèâàíèè êðàñèòåëåì Êóìàññè è ñåðåáðîì ìîæåò óìåíüøàòüñÿ, åñëè îêðàøèâà- íèå ïðåêðàùàþò èç ñóáúåêòèâíûõ ñîîáðàæåíèé, òî åñòü â ìîìåíò, êîãäà îíî êàæåòñÿ äîñòàòî÷- íûì. Î÷åíü âàæíî èñïîëüçîâàòü äèíàìè÷åñêèå äèàïàçîíû ñòàíäàðòíûõ áåëêîâ, òàê êàê îíè ïî- ìîãàþò îöåíèòü ÷óâñòâèòåëüíîñòü è ëèíåé- íîñòü ïðè ïðîâåäåíèè èñïûòàíèÿ. Âñå ñòàäèè îêðàøèâàíèÿ ãåëåì âûïîëíÿþòñÿ â îäíîðàçî- âûõ ïåð÷àòêàõ, ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå, ïðè îñòîðîæíîì ïåðåìåøèâàíèè (íàïðèìåð, íà ïëàòôîðìå îðáèòàëüíîãî øåéêåðà) è ñ èñïîëü- çîâàíèåì ëþáîãî óäîáíîãî êîíòåéíåðà. Îêðàøèâàíèå êðàñèòåëåì Êóìàññè. Ãåëü ïîãðóæàþò â áîëüøîé îáúåì îêðàøèâàþùåãî ðàñòâîðà Êóìàññè Ð, âûäåðæèâàþò â òå÷åíèå íå ìåíåå 1 ÷. Çàòåì ñëèâàþò îêðàøèâàþùèé ðàñ- òâîð. Ãåëü îáåñöâå÷èâàþò áîëüøèì îáúåìîì îò- ìûâàþùåãî ðàñòâîðà Ð. Îòìûâàþùèé ðàñòâîð ìåíÿþò íåñêîëüêî ðàç äî ÷åòêîãî ïðîÿâëåíèÿ áåëêîâûõ ïîëîñ íà ïðîçðà÷íîì ôîíå. ×åì òùà- òåëüíåå îòìûâàþò ãåëü, òåì ìåíüøåå êîëè÷åñò- âî áåëêîâ ìîæíî íàéòè ýòèì ìåòîäîì. Îáåñöâå- ÷èâàíèå ìîæíî óñêîðèòü äîáàâëåíèåì â îòìû- âàþùèé ðàñòâîð Ð íåñêîëüêèõ ãðàììîâ àíèîíîîáìåííîé ñìîëû èëè ìàëåíüêîãî êóñî÷- êà ïîðèñòîãî ìàòåðèàëà. ÏÐÈÌÅ×ÀÍÈÅ. Êèñëîòíî-ñïèðòîâûå ðàñ- òâîðû, èñïîëüçóåìûå â óêàçàííîé ìåòîäèêå, íå ïîçâîëÿþò ïîëíîñòüþ ôèêñèðîâàòü áåëêè â ãåëå. Ýòî ìîæåò ïðèâåñòè ê ïîòåðÿì íåêîòî- ðûõ íèçêîìîëåêóëÿðíûõ áåëêîâ â ïðîöåññå îêðà- øèâàíèÿ è îáåñöâå÷èâàíèÿ òîíêèõ ãåëåé. Ïîëíàÿ ôèêñàöèÿ âîçìîæíà ïðè âûäåðæèâàíèè ãåëÿ â ñìåñè òðèõëîðóêñóñíàÿ êèñëîòà Ð – ìåòàíîë Ð – âîäà Ð (1:4:5, îá/îá/îá) â òå÷åíèå 1 ÷ ïåðåä ïîãðóæåíèåì ãåëÿ â îêðàøèâàþùèé ðàñòâîð Êó- ìàññè Ð. Îêðàøèâàíèå ñåðåáðîì. Ãåëü ïîãðóæàþò â áîëüøîé îáúåì ôèêñèðóþùåãî ðàñòâîðà Ð è âûäåðæèâàþò â òå÷åíèå 1 ÷. Ôèêñèðóþùèé ðàñ- òâîð ñëèâàþò, äîáàâëÿþò íîâóþ ïîðöèþ ôèêñè- ðóþùåãî ðàñòâîðà, âûäåðæèâàþò â òå÷åíèå íå ìåíåå 1 ÷ èëè, åñëè âîçìîæíî, â òå÷åíèå íî÷è. Çàòåì ôèêñèðóþùèé ðàñòâîð ñëèâàþò è ãåëü ïðîìûâàþò áîëüøèì îáúåìîì âîäû Ð â òå÷åíèå 1 ÷. Äàëåå ãåëü âûäåðæèâàþò â 1 % ðàñòâîðå ãëóòàðîâîãî àëüäåãèäà Ð (îá/îá) â òå÷åíèå 15 ìèí, äâàæäû ïðîìûâàþò áîëüøèì îáúåìîì âîäû Ð, êàæäûé ðàç â òå÷åíèå 15 ìèí, ïîìåùàþò â ñâåæåïðèãîòîâëåííûé ðåàêòèâ ñåðåáðà íèò- ðàòà Ð è âûäåðæèâàþò â òå÷åíèå 15 ìèí â òåì- íîì ìåñòå. Çàòåì òðèæäû ïðîìûâàþò áîëüøèì îáúåìîì âîäû Ð, êàæäûé ðàç â òå÷åíèå 5 ìèí. Ãåëü âûäåðæèâàþò â ðàñòâîðå ïðîÿâèòåëÿ Ð â òå÷åíèå îêîëî 1 ìèí äî äîñòàòî÷íîãî îêðàøèâà- íèÿ. Ïðîÿâëåíèå îñòàíàâëèâàþò, ïîìåùàÿ ãåëü â áëîêèðóþùèé ðàñòâîð Ð íà 15 ìèí. Îïîëàñêè- âàþò ãåëü âîäîé Ð. 5-4. ÎÔÎÐÌËÅÍÈÅ ÐÅÇÓËÜÒÀÒΠÃåëè ôîòîãðàôèðóþò è ñêàíèðóþò ïîêà îíè åùå âëàæíûå èëè ïîñëå ñîîòâåòñòâóþùåé ïðî- öåäóðû ñóøêè.  íàñòîÿùåå âðåìÿ äîñòóïíû ñèñòåìû äëÿ ñêàíèðîâàíèÿ ãåëåé, îñíàùåííûå ïðîãðàììíûì îáåñïå÷åíèåì äëÿ àíàëèçà äàí- íûõ è ïîçâîëÿþùèå íåçàìåäëèòåëüíî ôîòîãðà- ôèðîâàòü è àíàëèçèðîâàòü ìîêðûå ãåëè. Ãåëè îáðàáàòûâàþò â çàâèñèìîñòè îò èñ- ïîëüçóåìîãî ìåòîäà îêðàøèâàíèÿ. Îêðàøåííûå êðàñèòåëåì Êóìàññè ãåëè ïîñëå ñòàäèè îáåñöâå- ÷èâàíèÿ âûäåðæèâàþò â ðàñòâîðå 100 ã/ë ãëèöå- ðèíà Ð â òå÷åíèå íå ìåíåå 2 ÷ (âîçìîæíî èíêó- áèðîâàíèå â òå÷åíèå íî÷è). Ïðè îêðàøèâàíèè ñåðåáðîì íà êîíå÷íîé ñòàäèè îòìûâàíèÿ ãåëè âûäåðæèâàþò â ðàñòâîðå 20 ã/ë ãëèöåðèíà Ð â òå÷åíèå 5 ìèí. Âûñóøèâàíèå îêðàøåííûõ ÄÑÍ-ïîëèàêðè- ëàìèäíûõ ãåëåé ÿâëÿåòñÿ îäíèì èç ìåòîäîâ, ïðèìåíÿåìûõ äëÿ äîëãîâðåìåííîãî äîêóìåíòè- ðîâàíèÿ. Ýòîò ìåòîä ÷àñòî ïðèâîäèò ê ðàñòðåñ- êèâàíèþ ãåëÿ âî âðåìÿ âûñóøèâàíèÿ ìåæäó öåëëþëîçíûìè ïëåíêàìè. Äâà ëèñòà ïîðèñòîé öåëëþëîçíîé ïëåíêè ïîãðóæàþò â âîäó Ð è âûäåðæèâàþò â òå÷åíèå 5 – 10 ìèí.
Ðàñòÿãèâàþò îäèí èç ëèñòîâ ïëåíêè íà ðàìêå äëÿ âûñóøèâàíèÿ, íà íàòÿíóòóþ öåë- ëþëîçíóþ ïëåíêó àêêóðàòíî ïîìåùàþò ïðîïè- òàííûé â ðàñòâîðå ãåëü, óäàëÿþò âñå ñëó÷àéíî ïîïàâøèå âîçäóøíûå ïóçûðè, çàëèâàþò âîêðóã ãðàíåé ãåëÿ íåñêîëüêî ìèëëèëèòðîâ âîäû Ð, ïî- ìåùàþò âòîðîé ëèñò ïëåíêè ñâåðõó è ñíîâà óäà- ëÿþò âñå âîçäóøíûå ïóçûðè, çàêàí÷èâàþò ñáîð- êó ðàìêè äëÿ ñóøêè ãåëÿ è ïîìåùàþò åå â ñó- 81 øèëüíûé øêàô èëè îñòàâëÿþò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå äî ïîëíîãî âûñûõàíèÿ ãåëÿ. 5-5. ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈÅ ÌÎËÅÊÓËßÐÍÎÉ ÌÀÑÑÛ Ìîëåêóëÿðíûå ìàññû áåëêîâ îïðåäåëÿþò, ñðàâíèâàÿ èõ ïîäâèæíîñòü ñ ïîäâèæíîñòüþ íå- ñêîëüêèõ ìàðêåðíûõ áåëêîâ ñ èçâåñòíîé ìîëå- êóëÿðíîé ìàññîé. Äëÿ êàëèáðîâêè ãåëåé äîñòóï- íû ñìåñè èç ïðåäâàðèòåëüíî îêðàøåííûõ è íå- îêðàøåííûõ áåëêîâ ñ òî÷íî èçâåñòíûìè ìîëåêóëÿðíûìè ìàññàìè, ñìåøàííûìè äëÿ ðàâ- íîìåðíîãî îêðàøèâàíèÿ. Ïîëó÷åíû ñìåñè äëÿ ðàçëè÷íûõ äèàïàçîíîâ ìîëåêóëÿðíûõ ìàññ. Êîíöåíòðèðîâàííûå ðàñòâîðû áåëêîâ ñ èçâåñò- íîé ìîëåêóëÿðíîé ìàññîé ðàçâîäÿò ñîîòâåòñò- âóþùèì áóôåðîì îáðàçöà è íàíîñÿò íà òîò æå ãåëü, ÷òî è èñïûòóåìûé îáðàçåö. Ñðàçó ïîñëå ïðîâåäåíèÿ ýëåêòðîôîðåçà îò- ìå÷àþò ïîëîæåíèå ïîëîñû êðàñèòåëÿ áðîìôå- íîëîâîãî ñèíåãî, êîòîðàÿ ñîîòâåòñòâóåò ïåðåä- íåé êðîìêå ýëåêòðîôîðåòè÷åñêîãî èîííîãî ôðîíòà. Ýòî ìîæíî ñäåëàòü íàíåñåíèåì íàäðåçà êðàÿ ãåëÿ èëè ïóòåì ïðîêîëà ãåëÿ â çîíå îêðà- øåííîãî ãåëÿ èãëîé, ïðåäâàðèòåëüíî ñìî÷åííîé â ÷åðíóþ òóøü èëè äðóãîé ïîäõîäÿùèé êîíòðà- ñòíûé êðàñèòåëü. Ïîñëå îêðàøèâàíèÿ ãåëÿ èç- ìåðÿþò ïðîáåã äëÿ êàæäîé ïîëîñû áåëêà (ìàð- êåðîâ èëè èñïûòóåìîãî îáðàçöà) îò âåðøèíû ðàçðåøàþùåãî ãåëÿ. Âû÷èñëÿþò îòíîøåíèå ðàññòîÿíèå ïðîáåãà êàæäîãî áåëêà ê ðàññòîÿíèþ ïðîáåãà, ïðîéäåííîãî êðàñèòåëåì. Íîðìàëèçî- âàííûå ðàññòîÿíèÿ ïðîáåãà, âû÷èñëåííûå òà- êèì îáðàçîì, íàçûâàþòñÿ îòíîñèòåëüíûìè ïîä- âèæíîñòÿìè áåëêîâ (îòíîñèòåëüíî ôðîíòà êðà- ñèòåëÿ) è îáîçíà÷àþòñÿ, êàê RF. Ñòðîÿò ãðàôèê çàâèñèìîñòè ëîãàðèôìà îòíîñèòåëüíûõ ìîëå- êóëÿðíûõ ìàññ (Ì.ì.) áåëêîâûõ ñòàíäàðòíûõ îáðàçöîâ îò ïîëó÷åííûõ çíà÷åíèé RF. Íåèçâåñò- íûå ìîëåêóëÿðíûå ìàññû îïðåäåëÿþò ñ ïîìî- ùüþ ìåòîäà ëèíåéíîé ðåãðåññèè (äëÿ ïîëó÷å- íèÿ áîëåå òî÷íîãî ðåçóëüòàòà - ìåòîäîì íåëè- íåéíîé ðåãðåññèè) èëè èíòåðïîëÿöèåé êðèâûõ çàâèñèìîñòè log Mr îò RF, åñëè çíà÷åíèÿ, ïîëó- ÷åííûå äëÿ èñïûòóåìûõ îáðàçöîâ, ðàñïîëàãà- þòñÿ íà ëèíåéíîé ÷àñòè ãðàôèêà. 5-6. ÂÀËÈÄÀÖÈß ÈÑÏÛÒÀÍÈß Ðåçóëüòàòû èñïûòàíèÿ ïðèçíàþòñÿ äîñòî- âåðíûìè, åñëè òðåáóåìûé äèàïàçîí ðàçðåøåíèÿ ãåëÿ ïîäòâåðæäåí ðàñïðåäåëåíèåì ìàðêåðíûõ áåëêîâ ñ èçâåñòíûìè ìîëåêóëÿðíûì ìàññàìè, íàïðèìåð, íà ïðîòÿæåíèè 80 % äëèíû ãåëÿ. Ðàç- äåëåíèå, ïîëó÷åííîå äëÿ ìàðêåðíûõ áåëêîâ, äîëæíî ïðîÿâëÿòü ëèíåéíóþ çàâèñèìîñòü ëîãà- ðèôìà ìîëåêóëÿðíîé ìàññû îò RF. Åñëè ãðàôèê èìååò ñèãìîâèäíóþ ôîðìó, òî â ðàñ÷åòàõ ìîãóò áûòü èñïîëüçîâàíû òîëüêî äàííûå ó÷àñòêà ëè- íåéíîé îáëàñòè êðèâîé.  ÷àñòíîé ôàðìàêîïåé- íîé ñòàòüå ìîãóò áûòü óêàçàíû äîïîëíèòåëüíûå òðåáîâàíèÿ ê âàëèäàöèè ïî îòíîøåíèþ ê èñïû- òóåìîìó îáðàçöó. ×óâñòâèòåëüíîñòü òàêæå äîëæíà áûòü âàëè- äèðîâàíà. Äëÿ ïðîâåðêè ïðèãîäíîñòè ñèñòåìû ìîæåò ïðèìåíÿòüñÿ ñòàíäàðòíûé îáðàçåö áåëêà ñ êîíöåíòðàöèåé, ñîîòâåòñòâóþùåé íåîáõîäè- ìîìó ïðåäåëó, àíàëèçèðóåìûé ïàðàëëåëüíî ñ èñïûòóåìûìè îáðàçöàìè. 5-7. ÊÎËÈ×ÅÑÒÂÅÍÍÎÅ ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈÅ ÏÐÈÌÅÑÅÉ ÄÑÍ-ÏÀÀà ÷àñòî èñïîëüçóåòñÿ ïðè ïðîâå- äåíèè èñïûòàíèÿ íà ïðåäåëüíîå ñîäåðæàíèå ïðèìåñåé.  ñëó÷àå, åñëè ñîäåðæàíèå ïðèìåñåé îïðåäåëÿåòñÿ ìåòîäîì íîðìàëèçàöèè è ïî îòíî- øåíèþ ê îñíîâíîé ïîëîñå ñ èñïîëüçîâàíèåì äåíñèòîìåòðè÷åñêîãî èíòåãðèðîâàíèÿ èëè ïó- òåì àíàëèçà èçîáðàæåíèé, ëèíåéíîñòü ñèãíàëà äîëæíà áûòü âàëèäèðîâàíà.
Íåîáõîäèìî ó÷èòû- âàòü, ÷òî â çàâèñèìîñòè îò ìåòîäà îáíàðóæåíèÿ, äèàïàçîí ëèíåéíîñòè ìîæåò âàðüèðîâàòü, íî îí äîëæåí áûòü îïðåäåëåí ïðè êàæäîì èñïûòàíèè ñ èñïîëüçîâàíèåì îäíîãî èëè áîëåå êîíòðîëü- íûõ îáðàçöîâ, ñîäåðæàùèõ áåëêè â ïîäõîäÿùåì äèàïàçîíå êîíöåíòðàöèé.  òåõ ñëó÷àÿõ, êîãäà ïðåäåëüíîå ñîäåðæàíèå ïðèìåñåé óêàçàíî â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå, â èñïûòàíèè íåîáõîäèìî èñïîëüçîâàòü ðàñòâîð ñðàâíåíèÿ, ñîîòâåòñòâóþùèé ýòîìó óðîâíþ ñîäåðæàíèÿ ïðèìåñè, ïðèãîòîâëåííûé ðàçâåäåíèåì èñïûòóåìîãî ðàñòâîðà. Íàïðèìåð, åñëè ïðåäåëüíîå ñîäåðæàíèå ïðèìåñåé ñîñòàâ- ëÿåò 5 %, íåîáõîäèìî ïðèãîòîâèòü ðàñòâîð ñðàâíåíèÿ ïóòåì ðàçâåäåíèÿ èñïûòóåìîãî ðàñ- òâîðà â ñîîòíîøåíèè 1:20. Íà ýëåêòðîôîðåãðàì- ìå ñ èñïûòóåìûì ðàñòâîðîì íè îäíà ïîëîñà, êðîìå îñíîâíîé, íå äîëæíà áûòü èíòåíñèâíåå ïîëîñû, ïîëó÷åííîé ñ ðàñòâîðîì ñðàâíåíèÿ. Äëÿ âàëèäèðîâàííîé ìåòîäèêè ñîäåðæàíèå ïðèìåñåé ìîæåò áûòü êîëè÷åñòâåííî îïðåäåëå- íî ìåòîäîì âíóòðåííåé íîðìàëèçàöèè ïî îòíî- øåíèþ ê îñíîâíîé ïîëîñå ñ èñïîëüçîâàíèåì èíòåãðèðóþùåãî äåíñèòîìåòðà èëè ïóòåì àíà- ëèçà èçîáðàæåíèé. Ïðè âàëèäàöèè ìåòîäèêè äîëæíà áûòü ïîäòâåðæäåíà ëèíåéíîñòü. 82 201020031-2019 2.1.2.31. Ïîòåðÿ â ìàññå ïðè âûñóøèâàíèè Îïðåäåëåíèå ïîòåðè â ìàññå ïðè âûñóøèâà- íèè ïðîâîäÿò îäíèì èç ïðèâåäåííûõ ñïîñîáîâ è âûðàæàþò â ïðîöåíòàõ (ì/ì). Ìåòîäèêà. Óêàçàííîå â ÷àñòíîé ôàðìàêî- ïåéíîé ñòàòüå êîëè÷åñòâî èñïûòóåìîãî îáðàçöà ïîìåùàþò âî âçâåøåííûé áþêñ, ïðåäâàðèòåëü- íî âûñóøåííûé â óñëîâèÿõ, îïèñàííûõ äëÿ èñ- ïûòóåìîãî îáðàçöà. Îáðàçåö ñóøàò â áþêñå ñ îòêðûòîé êðûøêîé äî ïîñòîÿííîé ìàññû îäíèì èç ñëåäóþùèõ íèæå ñïîñîáîâ, ïðè íåîáõîäèìî- ñòè îõëàæäàþò â ýêñèêàòîðå è âçâåøèâàþò ñ çà- êðûòîé êðûøêîé áþêñà. Åñëè òåìïåðàòóðíûé èíòåðâàë íå óêàçàí, òî âûñóøèâàíèå ïðîâîäÿò ïðè óêàçàííîé òåìïåðàòóðå ±2 °Ñ. Ñïîñîá 1. Ïðîáó âûñóøèâàþò â ñóøèëüíîì øêàôó, ïðîâåðêó ïðèãîäíîñòè êîòîðîãî ïðîâî- äÿò â ñîîòâåòñòâèè ñ óñòàíîâëåííûìè ïðîöåäó- ðàìè ñèñòåìû êà÷åñòâà, íàïðèìåð, ñ èñïîëüçî- âàíèåì ïîäõîäÿùèõ ñåðòèôèöèðîâàííûõ ñòàí- äàðòíûõ îáðàçöîâ. Åñëè â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåé- íîé ñòàòüå íå óêàçàíî èíà÷å, âûñóøèâàíèå ïðî- âîäÿò â òå÷åíèå 2 ÷ ïðè 105 °Ñ, çàòåì îòêðûòûé áþêñ âìåñòå ñ êðûøêîé ïîìåùàþò â ýêñèêàòîð äëÿ îõëàæäåíèÿ íà 50 ìèí, ïîñëå ÷åãî çàêðûâà- þò êðûøêîé è âçâåøèâàþò. Ïîñëåäóþùèå âçâå- øèâàíèÿ ïðîâîäÿò ïîñëå êàæäîãî ÷àñà äàëüíåé- øåãî âûñóøèâàíèÿ äî äîñòèæåíèÿ ïîñòîÿííîé ìàññû. Ñïîñîá 2. Âûñóøèâàíèå ïðîâîäÿò íàä ôîñ- ôîðà (V) îêñèäîì Ð îäíèì èç ñëåäóþùèõ ìåòî- äîâ: – â ýêñèêàòîðå ïðè àòìîñôåðíîì äàâëåíèè è êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå; – â âàêóóìå ïðè äàâëåíèè îò 1,5 êÏà äî 2,5 êÏà è êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå èëè òåìïåðàòóðå, óêàçàííîé â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå èëè â íîðìàòèâíîì äîêóìåíòå ïî êà÷åñòâó; – â «âûñîêîì âàêóóìå»: ïðè äàâëåíèè íå áî- ëåå 0,1 êÏà è òåìïåðàòóðå, óêàçàííîé â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå èëè íîðìàòèâíîé äîêó- ìåíòàöèè.  ñëó÷àå èñïîëüçîâàíèÿ èíûõ óñëîâèé, èñ- ïîëüçóåìàÿ ìåòîäèêà ïîëíîñòüþ îïèñûâàåòñÿ â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. 201020032-2019 2.1.2.32. Îñìîëÿëüíîñòü Îñìîëÿëüíîñòü — ïîêàçàòåëü, ïîçâîëÿþ- ùèé îöåíèòü ñóììàðíûé âêëàä ðàçëè÷íûõ ðàñ- òâîðåííûõ âåùåñòâ â îñìîòè÷åñêîå äàâëåíèå ðàñòâîðà. Ïðèáëèæåííûé ðàñ÷åò îñìîëÿëüíîñòè x m âîäíîãî ðàñòâîðà ïðîâîäÿò ïî ôîðìóëå: x um m= F, ãäå: u — ñóììàðíîå ÷èñëî èîíîâ, îáðàçóþ- ùèõñÿ èç îäíîé ìîëåêóëû ðàñòâîðåí- íîãî âåùåñòâà â ðåçóëüòàòå äèññîöèà- öèè.  ñëó÷àå åñëè ðàñòâîðåííîå âå- ùåñòâî íå äèññîöèèðóåò íà èîíû, u = 1; m — ìîëÿëüíîñòü ðàñòâîðà, ò.å. ÷èñëî ìîëü ðàñòâîðåííîãî âåùåñòâà íà êèëî- ãðàìì ðàñòâîðèòåëÿ; F — ìîëÿëüíûé îñìîòè÷åñêèé êîýôôèöè- åíò, ó÷èòûâàþùèé âçàèìîäåéñòâèå ìåæäó èîíàìè ïðîòèâîïîëîæíîãî çíàêà â ðàñòâîðå è çàâèñÿùèé îò âåëè- ÷èíû ò.
Ïî ìåðå óñëîæíåíèÿ ñîñòàâà ðàñòâîðà óñëîæíÿåòñÿ è îïðåäåëåíèå âåëè÷èíû F. Åäèíèöåé îñìîëÿëüíîñòè ÿâëÿåòñÿ îñìîëü íà êèëîãðàìì (îñìîëü/êã), íî íà ïðàêòèêå îáû÷- íî èñïîëüçóåòñÿ åäèíèöà ìèëëèîñìîëü íà êèëî- ãðàìì (ìîñìîëü/êã). Ïðè îòñóòñòâèè äðóãèõ óêàçàíèé â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå îñìîëÿëüíîñòü îïðåäå- ëÿþò ïî ïîíèæåíèþ òåìïåðàòóðû çàìåðçàíèÿ ðàñòâîðà. Çàâèñèìîñòü ìåæäó îñìîëÿëüíîñòüþ è ïîíèæåíèåì òåìïåðàòóðû çàìåðçàíèÿ DÒ âû- ðàæàþò ñîîòíîøåíèåì: x m T = × D 186 1000 , ìîñìîëü/êã. Ïðèáîð. Ñîñòàâíûìè ÷àñòÿìè ïðèáîðà (îñ- ìîìåòðà) ÿâëÿþòñÿ: – ïðèñïîñîáëåíèå äëÿ îõëàæäåíèÿ ñîñóäà ñ èçìåðèòåëüíîé ÿ÷åéêîé; – ñèñòåìà äëÿ èçìåðåíèÿ òåìïåðàòóðû, ñî- ñòîÿùàÿ èç ÷óâñòâèòåëüíîãî ê òåìïåðàòóðå ñî- ïðîòèâëåíèÿ (òåðìèñòîðà) ñ ñîîòâåòñòâóþùèì óñòðîéñòâîì äëÿ èçìåðåíèÿ òîêà èëè ðàçíîñòè ïîòåíöèàëîâ. Èçìåðèòåëüíîå óñòðîéñòâî ìîæåò áûòü îòêàëèáðîâàíî â ãðàäóñàõ ïîíèæåíèÿ òåì- 83 ïåðàòóðû èëè íåïîñðåäñòâåííî â åäèíèöàõ îñ- ìîëÿëüíîñòè; – êàê ïðàâèëî, ïðèñïîñîáëåíèå äëÿ ïåðåìå- øèâàíèÿ îáðàçöà. Ìåòîäèêà. Ãîòîâÿò ñòàíäàðòíûå ðàñòâîðû â ñîîòâåòñòâèè ñ òàáëèöåé 2.1.2.32.-1. Óñòàíàâëè- âàþò íóëåâîå çíà÷åíèå íà øêàëå ïðèáîðà, èñ- ïîëüçóÿ âîäó Ð. Ïðîâîäÿò êàëèáðîâêó ïðèáîðà, èñïîëüçóÿ ñòàíäàðòíûå ðàñòâîðû: ïîìåùàþò ñîîòâåòñòâóþùèå îáúåìû ñòàíäàðòíîãî ðàñòâî- ðà â èçìåðèòåëüíóþ ÿ÷åéêó è íà÷èíàþò îõëàæ- äåíèå ñèñòåìû. ×òîáû ïðåäîòâðàòèòü ïåðåîõëà- æäåíèå, èçìåðèòåëüíîå óñòðîéñòâî, êàê ïðàâè- ëî, ïðîãðàììèðóþò íà ðàáîòó ïðè òåìïåðàòóðàõ áîëåå íèçêèõ, ÷åì îæèäàåìîå êðèîñêîïè÷åñêîå ïîíèæåíèå òåìïåðàòóðû. Ïîäõîäÿùåå óñòðîé- ñòâî óêàçûâàåò íà äîñòèæåíèå ðàâíîâåñèÿ. Ïå- ðåä êàæäûì èçìåðåíèåì èçìåðèòåëüíóþ ÿ÷åéêó îïîëàñêèâàþò ñîîòâåòñòâóþùèì ñòàíäàðòíûì ðàñòâîðîì. Òå æå îïåðàöèè ïðîâîäÿò ñ èñïûòóåìûì ðàñ- òâîðîì. Ïðè ýòîì ïåðåä êàæäûì èçìåðåíèåì èç- ìåðèòåëüíóþ ÿ÷åéêó îïîëàñêèâàþò èñïûòóå- ìûì ðàñòâîðîì. Ðåçóëüòàòû ëèáî íåïîñðåäñò- âåííî îïðåäåëÿþò ïî øêàëå ïðèáîðà, ëèáî ðàññ÷èòûâàþò ïî èçìåðåííîìó ïîíèæåíèþ òåì- ïåðàòóðû çàìåðçàíèÿ. Ðåçóëüòàòû ñ÷èòàþò äîñ- òîâåðíûìè, åñëè ïîëó÷åííîå çíà÷åíèå îñìî- ëÿëüíîñòè èñïûòóåìîãî ðàñòâîðà íå âûõîäèò çà ïðåäåëû çíà÷åíèé îñìîëÿëüíîñòè äâóõ ñòàí- äàðòíûõ ðàñòâîðîâ, èñïîëüçîâàííûõ äëÿ êàëèá- ðîâêè. 201020033-2019 2.1.2.33. Ýëåêòðîïðîâîäíîñòü Ñèëà òîêà I (â àìïåðàõ), ïðîòåêàþùåãî ÷åðåç ïðîâîäíèê, ïðÿìî ïðîïîðöèîíàëüíà ïðèëîæåí- íîé ýëåêòðîäâèæóùåé ñèëå E (â âîëüòàõ) è îá- ðàòíî ïðîïîðöèîíàëüíà ñîïðîòèâëåíèþ ïðî- âîäíèêà R (â îìàõ): I E R = . Ýëåêòðè÷åñêàÿ ïðîâîäèìîñòü (ðàíåå íàçû- âàåìàÿ óäåëüíîé ýëåêòðîïðîâîäíîñòüþ) ðàñòâî- ðà (k) ÿâëÿåòñÿ, ïî îïðåäåëåíèþ, âåëè÷èíîé, îá- ðàòíîé ñîïðîòèâëåíèþ (r). Ñîïðîòèâëåíèå îï- ðåäåëÿþò êàê îòíîøåíèå íàïðÿæåííîñòè ýëåêòðè÷åñêîãî ïîëÿ ê ïëîòíîñòè òîêà. Ñîïðî- òèâëåíèå R (Îì) ïðîâîäíèêà, èìåþùåãî ïëî- ùàäü ñå÷åíèÿ S (ñì2) è äëèíó L (ñì), ðàññ÷èòû- âàþò ïî ôîðìóëå: R L S = r . Òàêèì îáðàçîì: R L S = × 1 k èëè k = × 1 R L S , ãäå L/S ñîîòâåòñòâóåò êîíñòàíòå èäåàëüíîé ÿ÷åéêè. Åäèíèöåé ýëåêòðè÷åñêîé ïðîâîäèìîñòè â ñèñòåìå ÑÈ ÿâëÿåòñÿ ñèìåíñ íà ìåòð (Ñì·ì–1). Íà ïðàêòèêå ýëåêòðè÷åñêóþ ïðîâîäèìîñòü ðàñ- òâîðà âûðàæàþò â ñèìåíñàõ íà ñàíòèìåòð (Ñì·ì–1) èëè â ìèêðîñèìåíñàõ íà ñàíòèìåòð (ìêÑì·ñì–1). Åäèíèöåé ñîïðîòèâëåíèÿ â ñèñòå- ìå ÑÈ ÿâëÿåòñÿ îì-ìåòð (Îì·ì). Íà ïðàêòèêå ñî- ïðîòèâëåíèå ðàñòâîðà îáû÷íî âûðàæàþò â îì-ñàíòèìåòðàõ (Îì·ñì). Ïðè îòñóòñòâèè äðó- ãèõ óêàçàíèé â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå çíà÷åíèÿ ýëåêòðè÷åñêîé ïðîâîäèìîñòè èëè ñî- ïðîòèâëåíèÿ ïðèâîäÿò äëÿ ñòàíäàðòíîé òåìïå- ðàòóðû 25 °Ñ. Îïèñàíèå ïðèáîðà è ïîðÿäîê ïðîâåäåíèÿ èñïûòàíèÿ, îïèñàííûå íèæå, ïðèãîäíû äëÿ ëà- 84 Òàáëèöà 2.1.2.32.-1.
— Ñòàíäàðòíûå ðàñòâîðû äëÿ êàëèáðîâêè îñìîìåòðà Ìàññà íàòðèÿ õëîðèäà Ð, â ãðàììàõ íà êèëî- ãðàìì âîäû Ð Ôàêòè÷åñêàÿ îñìîëÿëüíîñòü (ìîñìîëü/êã) Òåîðåòè÷åñêàÿ îñìî- ëÿëüíîñòü èäåàëüíîãî ðàñòâîðà (ìîñìîëü/êã) Ìîëÿëüíûé îñìîòè÷åñêèé êîýôôèöèåíò Êðèîñêîïè÷åñêîå ïîíèæåíèå òåìïåðàòóðû (°C) 3,087 100 105,67 0,9463 0,186 6,260 200 214,20 0,9337 0,372 9,463 300 323,83 0,9264 0,558 12,684 400 434,07 0,9215 0,744 15,916 500 544,66 0,9180 0,930 19,147 600 655,24 0,9157 1,116 22,380 700 765,86 0,9140 1,302 áîðàòîðíîãî èçìåðåíèÿ ýëåêòðè÷åñêîé ïðîâîäè- ìîñòè, çíà÷åíèÿ êîòîðîé áîëüøå, ÷åì 10 ìêÑì·ñì–1. Èçìåðåíèå ýëåêòðè÷åñêîé ïðîâî- äèìîñòè âîäû ïðîâîäÿò, êàê îïèñàíî â ñîîòâåò- ñòâóþùèõ ÷àñòíûõ ôàðìàêîïåéíûõ ñòàòüÿõ. ÏÐÈÁÎÐ Ïðèíöèï ðàáîòû èñïîëüçóåìîãî ïðèáîðà (êîíäóêòîìåòðà èëè îììåòðà) îñíîâàí íà èçìå- ðåíèè ñîïðîòèâëåíèÿ ñòîëáà æèäêîñòè ìåæäó ýëåêòðîäàìè ïîãðóæåííîãî èçìåðÿþùåãî óñò- ðîéñòâà (êîíäóêòîìåòðè÷åñêàÿ ÿ÷åéêà). Âî èç- áåæàíèå ïîëÿðèçàöèè ýëåêòðîäîâ ïðèáîð ïîä- êëþ÷àþò ê ïåðåìåííîìó òîêó. Ïðèáîð òàêæå îñ- íàùåí äàò÷èêîì òåìïåðàòóðû è òåìïåðàòóðíûì êîìïåíñàòîðîì. Êîíäóêòîìåòðè÷åñêàÿ ÿ÷åéêà ñîäåðæèò äâà ïëàòèíîâûõ ýëåêòðîäà, êàæäûé ñ ïëîùàäüþ ïî- âåðõíîñòè S, ðàñïîëàãàþùèõñÿ ïàðàëëåëüíî îäèí ê äðóãîìó íà ðàññòîÿíèè L è ïîêðûòûõ ïëàòèíîâîé ÷åðíüþ. Îáû÷íî îáà ýëåêòðîäà çà- ùèùåíû ñòåêëÿííîé òðóáêîé. Äîïóñêàåòñÿ èñ- ïîëüçîâàíèå äðóãèõ òèïîâ ÿ÷ååê. ÏÎÐßÄÎÊ ÏÐÎÂÅÄÅÍÈß ÈÑÏÛÒÀÍÈß Îïðåäåëåíèå êîíñòàíòû ÿ÷åéêè Âûáèðàþò êîíäóêòîìåòðè÷åñêóþ ÿ÷åéêó, ñîîòâåòñòâóþùóþ ñâîéñòâàì è ýëåêòðè÷åñêîé ïðîâîäèìîñòè èñïûòóåìîãî ðàñòâîðà. ×åì âûøå ïðåäïîëàãàåìàÿ ýëåêòðè÷åñêàÿ ïðîâîäè- ìîñòü, òåì áîëüøåé äîëæíà áûòü âåëè÷èíà êîí- ñòàíòû ÿ÷åéêè (íèçêàÿ r). Îáû÷íî èñïîëüçóþò êîíäóêòîìåòðè÷åñêèå ÿ÷åéêè ñ êîíñòàíòàìè ïî- ðÿäêà 0,1 ñì–1, 1 ñì–1 è 10 ñì–1. Äëÿ ïðîâåäåíèÿ èçìåðåíèÿ èñïîëüçóþò ñåðòèôèöèðîâàííûé ñòàíäàðòíûé îáðàçåö, íàïðèìåð, ðàñòâîð êàëèÿ õëîðèäà, ïðèåìëåìûé äëÿ èçìåðåíèÿ. Çíà÷åíèå ýëåêòðè÷åñêîé ïðîâîäèìîñòè ñåðòèôèöèðîâàí- íîãî ñòàíäàðòíîãî îáðàçöà äîëæíî áûòü áëèç- êèì ê ïðåäïîëàãàåìîìó çíà÷åíèþ ýëåêòðè÷å- ñêîé ïðîâîäèìîñòè èñïûòóåìîãî ðàñòâîðà. Äîïóñêàåòñÿ èñïîëüçîâàíèå äðóãèõ ñåðòèôèöè- ðîâàííûõ ñòàíäàðòíûõ îáðàçöîâ, îñîáåííî äëÿ ÿ÷ååê ñ êîíñòàíòîé ïîðÿäêà 0,1 ñì–1. ß÷åéêó ïðîìûâàþò íåñêîëüêî ðàç âîäîé äèñòèëëèðî- âàííîé Ð è êàê ìèíèìóì äâàæäû ñåðòèôèöèðî- âàííûì ñòàíäàðòíûì îáðàçöîì, èñïîëüçóåìûì äëÿ îïðåäåëåíèÿ êîíñòàíòû êîíäóêòîìåòðè÷å- ñêîé ÿ÷åéêè. Èçìåðÿþò ñîïðîòèâëåíèå êîíäóê- òîìåòðè÷åñêîé ÿ÷åéêè, èñïîëüçóÿ ñåðòèôèöèðî- âàííûé ñòàíäàðòíûé îáðàçåö ïðè òåìïåðàòóðå 25 ± 1 °Ñ. Êîíñòàíòà ÿ÷åéêè Kÿ÷åéêè (ñì–1) çàâè- ñèò îò ãåîìåòðè÷åñêîé ôîðìû êîíäóêòîìåòðè- ÷åñêîé ÿ÷åéêè è ðàññ÷èòûâàåòñÿ ïî ôîðìóëå: K Rÿ÷åéêè CCO CCO= × k ãäå: RÑÑÎ — èçìåðåííîå ñîïðîòèâëåíèå â ìåãàî- ìàõ; kÑÑÎ — ýëåêòðè÷åñêàÿ ïðîâîäèìîñòü ñåð- òèôèöèðîâàííîãî ñòàíäàðòíîãî îá- ðàçöà â ìèêðîñèìåíñàõ íà ñàíòè- ìåòð. Èçìåðåííîå çíà÷åíèå êîíñòàíòû Kÿ÷åéêè êîí- äóêòîìåòðè÷åñêîé ÿ÷åéêè íå äîëæíî îòëè÷àòü- ñÿ îò óêàçàííîãî çíà÷åíèÿ áîëåå ÷åì íà 5 %.
Åñëè îïðåäåëåíèå êîíñòàíòû êîíäóêòîìåò- ðè÷åñêîé ÿ÷åéêè ïðîâîäÿò ïðè òåìïåðàòóðå, îò- ëè÷àþùåéñÿ îò óêàçàííîé äëÿ ñåðòèôèöèðîâàí- íîãî ñòàíäàðòíîãî ìàòåðèàëà, çíà÷åíèå ýëåêòðè- ÷åñêîé ïðîâîäèìîñòè ðàññ÷èòûâàþò ïî ôîðìóëå: k k aT T T= × + -TCCO CCO[ ( )]1 , ãäå:kÒ — çíà÷åíèå ýëåêòðè÷åñêîé ïðîâîäè- ìîñòè ïðè äðóãîé òåìïåðàòóðå; kTÑÑÎ — çíà÷åíèå ýëåêòðè÷åñêîé ïðîâîäè- ìîñòè ñåðòèôèöèðîâàííîãî ñòàí- äàðòíîãî îáðàçöà; Ò — òåìïåðàòóðà, óñòàíîâëåííàÿ äëÿ êàëèáðîâêè; ÒÑÑÎ — òåìïåðàòóðà, óêàçàííàÿ äëÿ ñåðòè- ôèöèðîâàííîãî ñòàíäàðòíîãî îá- ðàçöà; a — òåìïåðàòóðíûé êîýôôèöèåíò äëÿ çíà÷åíèÿ ýëåêòðè÷åñêîé ïðîâîäè- ìîñòè ñåðòèôèöèðîâàííîãî ñòàí- äàðòíîãî îáðàçöà; äëÿ êàëèÿ õëî- ðèäà a = 0,021. Îïðåäåëåíèå óäåëüíîé ýëåêòðè÷åñêîé ïðîâîäèìîñòè èñïûòóåìîãî ðàñòâîðà Ïîñëå êàëèáðîâêè ïðèáîðà ñ èñïîëüçîâàíè- åì ðàñòâîðà ñåðòèôèöèðîâàííîãî ñòàíäàðòíîãî îáðàçöà, êîíäóêòîìåòðè÷åñêóþ ÿ÷åéêó ïðîìû- âàþò íåñêîëüêî ðàç âîäîé äèñòèëëèðîâàííîé Ð è íå ìåíåå äâóõ ðàç èñïûòóåìûì âîäíûì ðàñòâî- ðîì. Ïîñëåäóþùèå èçìåðåíèÿ ïðîâîäÿò â ñîîò- âåòñòâèè ñ óêàçàíèÿìè ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüè. 85 201020034-2019 2.1.2.34. Ñïåêòðîñêîïèÿ â áëèæíåé èíôðàêðàñíîé îáëàñòè Ñïåêòðîñêîïèÿ â áëèæíåé èíôðàêðàñíîé (ÁÈÊ) îáëàñòè — ìåòîä ñ øèðîêèìè è ðàçíîîá- ðàçíûìè ïðèìåíåíèåì â ôàðìàöåâòè÷åñêîì àíàëèçå. Áëèæíÿÿ èíôðàêðàñíàÿ ñïåêòðàëüíàÿ îáëàñòü îõâàòûâàåò äèàïàçîí äëèí âîëí îò 780 íì äî 2500 íì (äèàïàçîí âîëíîâûõ ÷èñåë îò 12 800 ñì–1 äî 4000 ñì–1).  ñïåêòðàõ ÁÈÊ îá- ëàñòè ïðåäñòàâëåíû ãëàâíûì îáðàçîì îáåðòîíû êîëåáàíèé C–H, N–H, O–H è S–H è êîìáèíàöèè îñíîâíûõ òèïîâ êîëåáàíèé ñðåäíåé èíôðàêðàñ- íîé îáëàñòè. Îíè íåñóò ñëîæíóþ õèìè÷åñêóþ è ôèçè÷åñêóþ èíôîðìàöèþ, êîòîðàÿ â áîëüøèí- ñòâå ñëó÷àåâ èçâëå÷åíà ïóòåì ìàòåìàòè÷åñêîé îáðàáîòêè äàííûõ. Ïîëîñû â ÁÈÊ îáëàñòè çíà- ÷èòåëüíî áîëåå ñëàáûå, ÷åì ïîëîñû îñíîâíûõ êîëåáàíèé â ñðåäíåé ÈÊ îáëàñòè, îò êîòîðûõ îíè ïðîèñõîäÿò. Òàê êàê àáñîðáöèîííûå ñïî- ñîáíîñòè â ÁÈÊ îáëàñòè ìàëû, èçëó÷åíèå ñïî- ñîáíî ïðîíèêàòü â ìàòåðèàë (âêëþ÷àÿ òâåðäûå âåùåñòâà) íà íåñêîëüêî ìèëëèìåòðîâ. Êðîìå òîãî, ìíîãèå âåùåñòâà, òàêèå êàê ñòåêëî, ÿâëÿ- þòñÿ îòíîñèòåëüíî ïðîçðà÷íûìè â ýòîé îáëàñòè äëèí âîëí.  äîïîëíåíèå ê ñòàíäàðòíûì ïðîöåäóðàì îòáîðà ïðîá è ïðîâåäåíèþ èñïûòàíèé, èçìåðå- íèÿ ìîãóò áûòü ïðîâåäåíû íà îáðàçöàõ in situ. Èçìåðåíèÿ â ÁÈÊ îáëàñòè ìîãóò ïðîâîäèòüñÿ, êàê â àâòîíîìíîì ðåæèìå (off-line), òàê è â ïî- òî÷íîì ðåæèìå (at-line, in-line, on-line) äëÿ ïðî- èçâîäñòâåííî-àíàëèòè÷åñêîé òåõíîëîãèè (PAT). Äëÿ öåëåé èäåíòèôèêàöèè ìîæåò ïîòðåáîâàòüñÿ èñïîëüçîâàíèå ïîäõîäÿùèõ õåìîìåòðè÷åñêèõ ìåòîäîâ. Îäíàêî ïðè ñîáëþäåíèè êðèòåðèåâ ñïåöèôè÷íîñòè äëÿ êà÷åñòâåííîãî ìåòîäà, õè- ìè÷åñêàÿ èäåíòèôèêàöèÿ èëè õàðàêòåðèñòèêà òâåðäûõ òåë ñòàíîâèòñÿ âîçìîæíà ïóòåì ïðÿìî- ãî ñðàâíåíèÿ íåîáðàáîòàííûõ èëè ïðåäâàðè- òåëüíî îáðàáîòàííûõ ñïåêòðîâ èñïûòóåìîãî õèìè÷åñêîãî îáðàçöà ñî ñïåêòðîì ñòàíäàðòíîãî îáðàçöà.
ÁÈÊ ñïåêòðîñêîïèÿ èìååò øèðîêóþ îáëàñòü ïðèìåíåíèÿ äëÿ õèìè÷åñêîãî, ôèçè÷åñêîãî è ïðîöåññíîãî àíàëèçà, íàïðèìåð: Õèìè÷åñêèé àíàëèç: – èäåíòèôèêàöèÿ àêòèâíûõ ñóáñòàíöèé, âñïîìîãàòåëüíûõ âåùåñòâ, ãîòîâûõ ëåêàðñòâåí- íûõ ôîðì, ïðîìåæóòî÷íûõ ïðîäóêòîâ ïðîèç- âîäñòâà, õèìè÷åñêîãî ñûðüÿ è óïàêîâî÷íûõ ìàòåðèàëîâ; – êâàëèôèêàöèÿ àêòèâíûõ ñóáñòàíöèé, âñïîìîãàòåëüíûõ âåùåñòâ, ãîòîâûõ ëåêàðñòâåí- íûõ ôîðì, ïðîìåæóòî÷íûõ ïðîäóêòîâ ïðîèç- âîäñòâà è óïàêîâî÷íûõ ìàòåðèàëîâ, âêëþ÷àÿ ñïåêòðàëüíîå ñðàâíåíèå ñåðèé è îöåíêó ñìåíû ïîñòàâùèêà; – êîëè÷åñòâåííîå îïðåäåëåíèå ñîäåðæàíèÿ àêòèâíûõ ñóáñòàíöèé â ìàòðèöå îáðàçöà, îïðå- äåëåíèå õèìè÷åñêèõ ÷èñåë, òàêèõ êàê ãèäðî- êñèëüíîå ÷èñëî, îïðåäåëåíèå àáñîëþòíîãî ñîäåðæàíèÿ âîäû, îïðåäåëåíèå ñòåïåíè ãèäðî- êñèëèðîâàíèÿ, êîíòðîëü ñîäåðæàíèÿ ðàñòâîðè- òåëåé. Ôèçè÷åñêèé àíàëèç: – êðèñòàëëè÷åñêàÿ ôîðìà è êðèñòàëëè÷- íîñòü, ïîëèìîðôèçì, ñîëüâàòû, ðàçìåð ÷àñòèö; – ðàñïàäàåìîñòü, òâåðäîñòü; – ñâîéñòâà ïëåíîê. Ïðîèçâîäñòâåííûé àíàëèç: – ìîíèòîðèíã ïðîèçâîäñòâåííûõ îïåðàöèé, íàïðèìåð, ñèíòåçà, ñìåøèâàíèÿ, âûñóøèâàíèÿ, ãðàíóëèðîâàíèÿ è ïîêðûòèÿ îáîëî÷êîé ñ öåëüþ êîíòðîëÿ ïðîèçâîäñòâåííîãî ïðîöåññà; – êîíòðîëü è îïðåäåëåíèå êîíå÷íûõ òî÷åê. Íà èçìåðåíèÿ â ÁÈÊ îáëàñòè âëèÿþò ìíîãèå õèìè÷åñêèå è ôèçè÷åñêèå ôàêòîðû, îïèñàííûå íèæå; âîñïðîèçâîäèìîñòü è ðåëåâàíòíîñòü ðå- çóëüòàòîâ çàâèñÿò îò êîíòðîëÿ ýòèõ ôàêòîðîâ; èçìåðåíèÿ ñïðàâåäëèâû îáû÷íî òîëüêî äëÿ êîí- êðåòíîé ìîäåëè êàëèáðîâêè. ÏÐÈÁÎÐ Âñå èçìåðåíèÿ â ÁÈÊ îáëàñòè îñíîâàíû íà ïðîõîæäåíèè ñâåòîâîãî èçëó÷åíèÿ ÷åðåç èëè âãëóáü îáðàçöà è èçìåðåíèè èíòåíñèâíîñòè (ïðîøåäøåãî èëè îòðàæåííîãî) ëó÷à. Ñïåêòðî- ìåòðû äëÿ èçìåðåíèé â ÁÈÊ îáëàñòè èìåþò ïîäõîäÿùèé èñòî÷íèê ñâåòà (òàêîé êàê âûñîêî- ñòàáèëüíàÿ êâàðöåâî-âîëüôðàìîâàÿ ëàìïà), ìî- íîõðîìàòîð èëè èíòåðôåðîìåòð è äåòåêòîð. Îáû÷íûå ìîíîõðîìàòîðû ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé àêóñòîîïòè÷åñêèå ïåðåñòðàèâàåìûå ôèëüòðû (AOËÔ), äèôðàêöèîííûå ðåøåòêè èëè ïðèçìû. Òðàäèöèîííî ìíîãèå ÁÈÊ ñïåêòðîìåòðû èìåþò îäíîëó÷åâîå ñòðîåíèå, õîòÿ íåêîòîðûå ïðîöåñ- ñû ïðèáîðîâ èñïîëüçóþò âíóòðåííåå ñðàâíåíèå è òàêèì îáðàçîì ìîãóò áûòü äâóëó÷åâûìè (íà- ïðèìåð, ïðèáîðû ñ äèîäíîé ìàòðèöåé). Ïðèìå- ðàìè ìàòåðèàëîâ äåòåêòîðà ÿâëÿþòñÿ êðåìíèé, 86 ñâèíöà ñóëüôèä è èíäèÿ-ãàëëèÿ àðñåíèä. Ïðè- ìåðàìè íåêîòîðûõ äåðæàòåëåé îáðàçöîâ ÿâëÿ- þòñÿ îáû÷íûå äåðæàòåëè êþâåò, îïòîâîëîêîí- íûå çîíäû, ïîãðóæíûå ÿ÷åéêè äëÿ ïðîïóñêàíèÿ, íåéòðàëüíûå áîðîñèëèêàòíûå ôëàêîíû è âðà- ùàþùèåñÿ èëè ïîäâèæíûå äåðæàòåëè îáðàçöà. Âûáîð ïðèáîðà çàâèñèò îò ïðåäïîëàãàåìîãî ïðèìåíåíèÿ, îñîáîå âíèìàíèå îáðàùàþò íà ïðèãîäíîñòü äåðæàòåëÿ îáðàçöîâ äëÿ ñîîòâåòñò- âóþùåãî òèïà àíàëèçèðóåìûõ îáðàçöîâ. Ïîäõî- äÿùèå áëîêè ïî îáðàáîòêå äàííûõ è èõ îöåíêå (íàïðèìåð, ïðîãðàììíîå îáåñïå÷åíèå è êîìïü- þòåð) îáû÷íî ÿâëÿþòñÿ ÷àñòüþ ñèñòåìû.  çàâèñèìîñòè îò ñïîñîáà èçìåðåíèÿ è ïðè- áîðà îáû÷íî âûðàæàþò äëèíó âîëíû (l) â íàíî- ìåòðàõ (íì) ëèáî âîëíîâîå ÷èñëî (n) â îáðàòíûõ ñàíòèìåòðàõ (ñì–1). Ïåðåñ÷åò ìåæäó íàíîìåòðà- ìè è îáðàòíûìè ñàíòèìåòðàìè ïðîâîäÿò ïî ôîðìóëå: n l ñì íì - = ×1 10 17 . ÌÅÒÎÄÛ ÈÇÌÅÐÅÍÈÉ Ðåæèì ïðîïóñêàíèÿ. Ïðîïóñêàíèå (T) ÿâ- ëÿåòñÿ ìåðîé ñíèæåíèÿ èíòåíñèâíîñòè èçëó÷å- íèÿ ïðè äàííûõ äëèíàõ âîëí ïðè ïðîõîæäåíèè èçëó÷åíèÿ ñêâîçü îáðàçåö. Îáðàçåö ïîìåùàþò â îïòè÷åñêèé ëó÷ ìåæäó èñòî÷íèêîì è äåòåêòî- ðîì. Òàêîå ðàñïîëîæåíèå ïðèìåíÿåòñÿ âî ìíî- ãèõ òðàäèöèîííûõ ñïåêòðîôîòîìåòðàõ. Ïîëó- ÷åííûé ñïåêòð ìîæåò áûòü ïðåäñòàâëåí íåïî- ñðåäñòâåííî â âèäå ãðàôèêà çàâèñèìîñòè ïðîïóñêàíèÿ (T) è/èëè ïîãëîùåíèÿ (À) (îñü y) îò äëèíû âîëíû èëè âîëíîâîãî ÷èñëà (îñü x). T I I = 0 , ãäå: I — èíòåíñèâíîñòü ïàäàþùåãî èçëó÷åíèÿ; I0 — èíòåíñèâíîñòü ïðîøåäøåãî èçëó÷å- íèÿ.
A T T I I = - = æ è ç ö ø ÷ = æ è ç ö ø ÷log log log10 10 10 01 . Ðåæèì äèôôóçíîãî îòðàæåíèÿ. Ðåæèì äèôôóçíîãî îòðàæåíèÿ îñíîâàí íà èçìåðåíèè îòðàæåíèÿ (R) — îòíîøåíèÿ èíòåíñèâíîñòè ñâåòà, îòðàæåííîãî îò îáðàçöà (I) ê èíòåíñèâíî- ñòè ñâåòà, îòðàæåííîãî îò ôîíà èëè ñòàíäàðò- íîé îòðàæàþùåé ïîâåðõíîñòè (Ir).  çàâèñèìî- ñòè îò õèìè÷åñêîãî ñîñòàâà è ôèçè÷åñêèõ õà- ðàêòåðèñòèê îáðàçöà, ÁÈÊ èçëó÷åíèå ìîæåò ïðîíèêàòü íà áîëåå èëè ìåíåå ñóùåñòâåííîå ðàññòîÿíèå âãëóáü îáðàçöà, ãäå ìîæåò áûòü ïî- ãëîùåíî êîëåáàòåëüíûìè êîìáèíàöèÿìè è îáåðòîíàìè àíàëèòà, ïðèñóòñòâóþùåãî â îáðàç- öå. Íåïîãëîùåííîå èçëó÷åíèå îòðàæàåòñÿ îò îáðàçöà íà äåòåêòîð. ÁÈÊ ñïåêòð îòðàæåíèÿ îáû÷íî ïîëó÷àþò ïóòåì ðàñ÷åòà è ïîñòðîåíèåì ãðàôèêà çàâèñèìîñòè log10(1/R) (îñü y) îò äëèíû âîëíû èëè âîëíîâîãî ÷èñëà (îñü x). R I I r = , ãäå: I — èíòåíñèâíîñòü èçëó÷åíèÿ, äèôôóçíî îòðàæåííîãî îò îáðàçöà; I0 — èíòåíñèâíîñòü èçëó÷åíèÿ, äèôôóçíî îòðàæåííîãî îò ôîíà èëè îòðàæåííîãî îò ïîâåðõíîñòè ñðàâíåíèÿ. A R I I R r = æ è ç ö ø ÷ = æ è ç ö ø ÷log log10 10 1 . Ðåæèì ïðîïóñêàíèÿ-îòðàæåíèÿ. Ýòîò ðå- æèì ÿâëÿåòñÿ êîìáèíàöèåé ïðîïóñêàíèÿ è îòðà- æåíèÿ. Ïðè èçìåðåíèè ïðîïóñêàíèÿ-îòðàæåíèÿ (T*) èñïîëüçóåòñÿ çåðêàëî èëè äèôôóçíàÿ îòðà- æàþùàÿ ïîâåðõíîñòü äëÿ îòðàæåíèÿ èçëó÷åíèÿ, ïðîøåäøåãî ñêâîçü îáðàçåö, âòîðîé ðàç, óäâàè- âàÿ, òàêèì îáðàçîì, îïòè÷åñêèé ïóòü. Íåïîãëî- ùåííîå èçëó÷åíèå îòðàæàåòñÿ îò îáðàçöà íà äå- òåêòîð. T I IT * = , ãäå: IÒ — èíòåíñèâíîñòü ïðîøåäøåãî è îòðà- æåííîãî èçëó÷åíèÿ áåç îáðàçöà; I — èíòåíñèâíîñòü ïðîøåäøåãî è îòðà- æåííîãî èçëó÷åíèÿ, èçìåðåííàÿ ñ îá- ðàçöîì. A T I I T * log * log= æ è ç ö ø ÷ = æ è ç ö ø ÷10 1 . ÏÐÈÃÎÒÎÂËÅÍÈÅ/ÏÎÄÀ×À ÎÁÐÀÇÖÀ Ïðèãîòîâëåíèå è ïîäà÷à îáðàçöà ìîãóò âàðü- èðîâàòü â çàâèñèìîñòè îò ðåæèìà èçìåðåíèÿ. Ñëåäóþùèå òðåáîâàíèÿ ÿâëÿþòñÿ îáÿçàòåëüíû- ìè äëÿ âñåõ ìåòîäèê ïðîáîïîäãîòîâêè: – îïòèìèçèðóþò âðåìÿ èçìåðåíèÿ è ÷èñëî ñêàíèðîâàíèé äëÿ îïòèìèçàöèè îòíîøåíèÿ ñèã- íàë/øóì; 87 – íàõîäÿò íàèáîëåå ïîäõîäÿùèé ðåæèì èç- ìåðåíèÿ äëÿ ïðåäïîëàãàåìîãî ïðèìåíåíèÿ (ïðî- ïóñêàíèå, äèôôóçíîå îòðàæåíèå, ïðîïóñêà- íèå-îòðàæåíèå); – íàõîäÿò íàèëó÷øóþ îðèåíòàöèþ îáðàçöà (íàïðèìåð, äëÿ ìèíèìèçàöèè âëèÿíèÿ ïðèñóò- ñòâóþùåãî òèñíåíèÿ íà òàáëåòêàõ); – íàõîäÿò íàèáîëåå ïîäõîäÿùåå ïðèñïîñîá- ëåíèå (íàïðèìåð, ÿ÷åéêà ïðîïóñêàíèÿ èëè ïî- ãðóæíîé çîíä); – îïòèìèçèðóþò äëèíó ïóòè â ðåæèìàõ ïðîïóñêàíèÿ è ïðîïóñêàíèÿ-îòðàæåíèÿ; – íàõîäÿò ïîäõîäÿùèé ñïåêòðîñêîïè÷åñêèé ôîíîâûé ñòàíäàðòíûé îáðàçåö; – ïîäòâåðæäàþò, ÷òî ôîíîâûé ñòàíäàðòíûé îáðàçåö íå ìåíÿåòñÿ âî âðåìåíè, à ïîêàçàíèÿ ôîíà ÿâëÿþòñÿ âîñïðîèçâîäèìûìè è ñòàáèëü- íûìè ñ òå÷åíèåì âðåìåíè; – ïðè èçìåðåíèè äâèæóùèõñÿ ìàòåðèàëîâ èëè îáðàçöîâ (äëÿ èçìåðåíèé, êàñàþùèõñÿ ïðî- èçâîäñòâåííûõ ïðîöåññîâ) âàæíûì ÿâëÿåòñÿ ïî- ëó÷åíèå ðåïðåçåíòàòèâíîãî ñïåêòðà (íàïðèìåð, ñ ïîìîùüþ êîððåêòèðîâêè âðåìåíè èçìåðåíèÿ, êîëè÷åñòâà ñêàíèðîâàíèé, ñëîæåíèÿ èíäèâèäó- àëüíûõ ñïåêòðîâ èëè óâåëè÷åíèÿ ðàçìåðà ëó÷à); – ïðîâåðÿþò ñåíñîð íà âîçìîæíîå çàñîðå- íèå, íàïðèìåð, îò íàëèïøåãî ìàòåðèàëà èëè çà- ãðÿçíåíèÿ; – äîëæíû áûòü îáîñíîâàíû óñëîâèÿ ïðîâå- äåíèÿ èçìåðåíèÿ (âðåìÿ èçìåðåíèÿ, ðàçìåð ëó÷à) â îòíîøåíèè ìèíèìàëüíîãî ðàçìåðà îá- ðàçöà. Ïðè êîíòðîëå ïðîöåññà ïðîèçâîäñòâà â íåêî- òîðûõ ñëó÷àÿõ ÿâëÿåòñÿ íåâîçìîæíûì èçâëå÷å- íèå äàò÷èêà äëÿ ñáîðà ñïðàâî÷íûõ äàííûõ, ïî- ëó÷àåìûõ îò ñðàâíèòåëüíîãî ôîíà; ïðè ýòîì íå- îáõîäèìî ïðåäóñìîòðåòü ðàçëè÷íûå âàðèàíòû, âêëþ÷àÿ âíóòðåííåå ñðàâíåíèå, èçìåðåíèå ñðàâíèòåëüíîãî ôîíà ñ èñïîëüçîâàíèåì âòîðîãî äåòåêòîðà è äðóãèå. Ïðÿìîå ñðàâíåíèå ñïåêòðîâ âîçìîæíî òîëüêî ïðè óñëîâèè ïîëó÷åíèÿ ñïåê- òðîâ îòíîñèòåëüíî ôîíà, îáëàäàþùåãî àíàëî- ãè÷íûìè îïòè÷åñêèìè ñâîéñòâàìè. Ðåæèì ïðîïóñêàíèÿ.
Èçìåðåíèå è ðàñ÷åò ïðîïóñêàíèÿ (T) çàâèñèò îò ôîíîâîãî ïðîïóñêà- íèÿ. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ôîíîâîãî ïðîïóñêàíèÿ îáû÷íî èñïîëüçóþò âîçäóõ, ïîëèìåðíûé äèñê, ïóñòóþ êþâåòó, èñïîëüçóåìûé ðàñòâîðèòåëü èëè, â ñïåöèàëüíûõ ñëó÷àÿõ, ñòàíäàðòíûé îáðà- çåö. Ìåòîä â îñíîâíîì ïðèìåíÿåòñÿ äëÿ èññëå- äîâàíèÿ ðàçâåäåííûõ è íåðàçâåäåííûõ æèäêî- ñòåé, äèñïåðñèîííûõ ñèñòåì, ðàñòâîðîâ è òâåð- äûõ îáðàçöîâ (âêëþ÷àÿ òàáëåòêè è êàïñóëû). Äëÿ èçìåðåíèÿ ïðîïóñêàíèÿ òâåðäûõ îáðàçöîâ íåîáõîäèìî èñïîëüçîâàòü ïîäõîäÿùèå ïðèñïî- ñîáëåíèÿ äëÿ îáðàçöîâ. Æèäêèå îáðàçöû èññëå- äóþòñÿ ëèáî â êþâåòàõ ïîäõîäÿùåé äëèíû (îáû÷íî îò 0,5 ìì äî 4 ìì), ïðîçðà÷íûõ â ÁÈÊ îáëàñòè, ëèáî ïóòåì ïîãðóæåíèÿ îïòèêî-âîëî- êîííîãî çîíäà ïîäõîäÿùåé êîíôèãóðàöèè. Ðåæèì äèôôóçíîãî îòðàæåíèÿ. Äàííûé ðåæèì îáû÷íî èñïîëüçóåòñÿ äëÿ òâåðäûõ òåë. Îáðàçöû èññëåäóþò íåïîñðåäñòâåííî, ëèáî ñ ïîìîùüþ ïîäõîäÿùåãî óñòðîéñòâà (íàïðèìåð, äåðæàòåëÿ îáðàçöà), ëèáî ïóòåì ïðÿìîãî êîí- òàêòà ñ îïòîâîëîêîííûì çîíäîì. Ïðè êîíòðîëå ïðîöåññà ïðîèçâîäñòâà ìàòåðèàëû ìîãóò êîí- òðîëèðîâàòüñÿ ÷åðåç ïîëèðîâàííîå îêîøêî (íà- ïðèìåð, ñàïôèðîâîå) èëè ñ èñïîëüçîâàíèåì îï- òîâîëîêîííîãî çîíäà. Äîëæíû áûòü ïðèíÿòû ìåðû äëÿ îáåñïå÷åíèÿ âîñïðîèçâîäèìîñòè óñ- ëîâèé èçìåðåíèÿ ñïåêòðîâ îò îáðàçöà ê îáðàçöó. Äëÿ ïîëó÷åíèÿ áàçîâîé ëèíèè ñêàíèðóåòñÿ îò- ðàæåííîå èçëó÷åíèå ôîíà, à çàòåì èçìåðÿåòñÿ îòðàæåíèå îäíîãî èëè íåñêîëüêèõ èññëåäóåìûõ îáðàçöîâ.  êà÷åñòâå ñòàíäàðòíîé îòðàæàòåëü- íîé ïîâåðõíîñòè îáû÷íî èñïîëüçóþòñÿ êåðàìè- êà, òåðìîïëàñòè÷åñêèå ñìîëû è çîëîòî. Ìîãóò èñïîëüçîâàòüñÿ è äðóãèå ïîäõîäÿùèå ìàòåðèà- ëû. Ðåæèì ïðîïóñêàíèÿ-îòðàæåíèÿ. Äàííûé ðåæèì îáû÷íî èñïîëüçóåòñÿ äëÿ æèäêîñòåé, ñóñïåíçèé è ïðîçðà÷íûõ ïîëèìåðíûõ ìàòåðèà- ëîâ. Îòðàæàòåëü ðàçìåùàåòñÿ ïîçàäè îáðàçöà òàêèì îáðàçîì, ÷òîáû óäâàèâàòü îïòè÷åñêèé ïóòü. Òàêàÿ êîíôèãóðàöèÿ ìîæåò áûòü àäàïòè- ðîâàíà äëÿ ñîâìåñòíîãî èñïîëüçîâàíèÿ îäíîé è òîé æå ãåîìåòðèè ïðèáîðà äëÿ ñèñòåìû ñ îòðà- æàòåëåì è ñèñòåìû ñ îïòèêî-âîëîêîííûì çîí- äîì, êîãäà èñòî÷íèê èçëó÷åíèÿ è äåòåêòîð ðàñ- ïîëàãàþòñÿ ïî îäíó ñòîðîíó îáðàçöà. Îáðàçåö èññëåäóåòñÿ â êþâåòå ñ çåðêàëîì èëè ïîäõîäÿ- ùèì äèôôóçíûì îòðàæàòåëåì, ñäåëàííûì ëèáî èç ìåòàëëà, ëèáî èç èíåðòíîãî âåùåñòâà (íàïðè- ìåð, âûñóøåííîãî òèòàíà äèîêñèäà), êîòîðîå íå ïîãëîùàåò â ÁÈÊ îáëàñòè. Æèäêîñòè òàêæå ìî- ãóò áûòü èçìåðåíû ñ èñïîëüçîâàíèåì in-line çîíäîâ ïðîïóñêàíèÿ-îòðàæåíèÿ. ÔÀÊÒÎÐÛ, ÂËÈßÞÙÈÅ ÍÀ ÑÏÅÊÒÐÀËÜÍÛÉ ÎÒÊËÈÊ Îêðóæàþùàÿ ñðåäà. Ïðè ïðîâåäåíèè èñ- ïûòàíèé äîëæíû ó÷èòûâàòüñÿ òåìïåðàòóðà è âëàæíîñòü îêðóæàþùåé ñðåäû. 88 Îáëàñòü êîíòàêòà îáðàçöà. Îáëàñòü êîí- òàêòà îáðàçöà èëè êîíåö çîíäà äîëæíû áûòü î÷èùåíû ïåðåä ïðîâåäåíèåì èçìåðåíèÿ. Àíà- ëîãè÷íî, â in-line èëè on-line îáëàñòè êîíòàêòà ñ îáðàçöîì íå äîëæíî áûòü çíà÷èòåëüíîãî íàëè- ïàíèÿ ïðîäóêòà ëèáî çàãðÿçíåíèé, êîòîðûå ìîã- ëè áû âëèÿòü íà èçìåðåíèå. Òåìïåðàòóðà îáðàçöà. Äàííûé ïàðàìåòð âàæåí ïðè èññëåäîâàíèè âîäíûõ ðàñòâîðîâ è ìíîãèõ æèäêîñòåé, êîãäà ðàçëè÷èå â íåñêîëüêî ãðàäóñîâ ìîæåò ïðèâîäèòü ê ñóùåñòâåííûì èç- ìåíåíèÿì ñïåêòðà, êîòîðûå ìîãóò èìåòü çíà÷è- òåëüíîå âëèÿíèå íà àíàëèç. Êðîìå òîãî, òåìïå- ðàòóðà èãðàåò âàæíóþ ðîëü ïðè èññëåäîâàíèè òâåðäûõ îáðàçöîâ è ïîðîøêîâ, ñîäåðæàùèõ âîäó. Âëàãà è îñòàòî÷íûå ðàñòâîðèòåëè. Âëàãà è îñòàòî÷íûå ðàñòâîðèòåëè, ïðèñóòñòâóþùèå â îáðàçöå, ïðèâîäÿò ê çíà÷èòåëüíûì ïîëîñàì ïî- ãëîùåíèÿ â ÁÈÊ îáëàñòè. Òîëùèíà îáðàçöà. Òîëùèíà îáðàçöà ÿâëÿ- åòñÿ èçâåñòíûì èñòî÷íèêîì ñïåêòðàëüíîé èç- ìåí÷èâîñòè è äîëæíà ó÷èòûâàòüñÿ è/èëè êîí- òðîëèðîâàòüñÿ, îñîáåííî ïðè àíàëèçå òàáëåòîê è êàïñóë â ðåæèìå ïðîïóñêàíèÿ. Äëÿ èçìåðåíèÿ ïðåññîâàííûõ ïîðîøêîâ áåñêîíå÷íàÿ òîëùèíà îáû÷íî äîñòèãàåòñÿ ïðè ãëóáèíå îáðàçöà áîëåå 5 ìì (íàïðèìåð, âî ôëàêîíå).
Îïòè÷åñêèå ñâîéñòâà îáðàçöà. Äëÿ òâåð- äûõ ìàòåðèàëîâ äîëæíû ó÷èòûâàòüñÿ ðàññåè- âàþùèå ñâîéñòâà, êàê ïîâåðõíîñòè, òàê è íà- ñûïíîé ìàññû îáðàçöà. Äëÿ çàïèñè ñïåêòðîâ ôèçè÷åñêè, õèìè÷åñêè èëè îïòè÷åñêè íåîäíî- ðîäíûõ îáðàçöîâ äëÿ ïîëó÷åíèÿ ðåïðåçåíòàòèâ- íîãî ñïåêòðà îáðàçöà ìîæåò ïîíàäîáèòüñÿ óâå- ëè÷åíèå ïó÷êà èçëó÷åíèÿ, èññëåäîâàíèå áîëü- øîãî êîëè÷åñòâà îáðàçöîâ èëè âðàùåíèå îáðàçöà. Îïðåäåëåííûå ôàêòîðû, òàêèå êàê ñòå- ïåíü óïëîòíåíèÿ èëè ðàçìåð ÷àñòèö ïîðîøêîâ, à òàêæå õàðàêòåð ïîâåðõíîñòè ìîãóò âûçûâàòü çíà÷èòåëüíûå ñïåêòðàëüíûå èçìåíåíèÿ. Ôîðìû òâåðäîãî ñîñòîÿíèÿ. Íà âèáðàöè- îííûå ñïåêòðû îêàçûâàþò âëèÿíèå ðàçëè÷èÿ â ôîðìàõ òâåðäîãî ñîñòîÿíèÿ (ïîëèìîðôíûå ôîð- ìû, ãèäðàòû, ñîëüâàòû è àìîðôíûå ôîðìû). Ñëåäîâàòåëüíî, ðàçëè÷íûå êðèñòàëëè÷åñêèå ôîðìû, à òàêæå àìîðôíûå ôîðìû òâåðäûõ òåë ìîæíî îòëè÷èòü äðóã îò äðóãà íà îñíîâàíèè èõ ÁÈÊ ñïåêòðîâ.  ñëó÷àå íàëè÷èÿ ðàçëè÷íûõ êðèñòàëëè÷åñêèõ ôîðì, íåîáõîäèìî îáåñïå- ÷èòü, ÷òîáû è êàëèáðîâî÷íûå ñòàíäàðòíûå îá- ðàçöû èìåëè ðàñïðåäåëåíèå ôîðì, ïîäõîäÿùåå äëÿ ïðåäïîëàãàåìîãî èñïîëüçîâàíèÿ. Âîçðàñò îáðàçöà. Ñî âðåìåíåì ôèçè÷åñêèå, õèìè÷åñêèå èëè îïòè÷åñêèå ñâîéñòâà îáðàçöîâ ìîãóò èçìåíèòüñÿ.  çàâèñèìîñòè îò óñëîâèé õðàíåíèÿ òâåðäûå îáðàçöû ìîãóò àáñîðáèðî- âàòü èëè òåðÿòü âîäó, à ÷àñòè àìîðôíîãî âåùåñò- âà ìîãóò êðèñòàëëèçîâàòüñÿ. Ìàòåðèàëû, èñ- ïîëüçóåìûå äëÿ ÁÈÊ êàëèáðîâêè, äîëæíû áûòü ðåïðåçåíòàòèâíû â îòíîøåíèè áóäóùèõ îáðàç- öîâ è âàðèàáåëüíîñòè èõ ìàòðèöû. ÏÐÅÄÂÀÐÈÒÅËÜÍÀß ÎÁÐÀÁÎÒÊÀ ÄÀÍÍÛÕ ÁÈÊ ÑÏÅÊÒÐΠÏåðåä ðàçðàáîòêîé êëàññèôèêàöèè èëè êà- ëèáðîâî÷íîé ìîäåëè âî ìíîãèõ ñëó÷àÿõ è, â ÷à- ñòíîñòè, äëÿ ñïåêòðîâ, ïîëó÷àåìûõ â ðåæèìå îòðàæåíèÿ, ìîæåò ïîíàäîáèòüñÿ íåêîòîðàÿ ôîð- ìà ïðåäâàðèòåëüíîé ìàòåìàòè÷åñêîé îáðàáîòêè ñïåêòðà. Ýòî ìîæåò áûòü ñäåëàíî ñ öåëüþ, íà- ïðèìåð, óìåíüøåíèÿ âàðèàáèëüíîñòè áàçîâîé ëèíèè, óìåíüøåíèÿ âîçäåéñòâèÿ èçâåñòíûõ ïî- ìåõ, êîòîðûå îêàçûâàþò âëèÿíèå íà ïîñëåäóþ- ùèå ìàòåìàòè÷åñêèå ìîäåëè, èëè äëÿ óïðîùå- íèÿ äàííûõ ïåðåä èõ èñïîëüçîâàíèåì.  íåêîòî- ðûõ ñëó÷àÿõ ñïåêòðû òàêæå ìîãóò áûòü íîðìàëèçîâàíû èëè ñêîððåêòèðîâàíî ðàññåÿ- íèå, íàïðèìåð, ñ èñïîëüçîâàíèåì ïðåîáðàçîâà- íèÿ ñòàíäàðòíîãî îòêëîíåíèÿ ñëó÷àéíîé âåëè- ÷èíû ñ íîðìàëüíûì ðàñïðåäåëåíèåì. Ïðåäâà- ðèòåëüíàÿ ñïåêòðàëüíàÿ îáðàáîòêà ìîæåò âêëþ÷àòü, íàïðèìåð, êàäðèðîâàíèå, ñíèæåíèå øóìà è ÷èñëåííûé ðàñ÷åò ïðîèçâîäíûõ ñïåêòðà ïåðâîãî èëè âòîðîãî ïîðÿäêà. Ïðîèçâîäíûå áî- ëåå âûñîêèõ ïîðÿäêîâ èñïîëüçîâàòü íå ðåêîìåí- äóåòñÿ ââèäó óâåëè÷èâàþùåãîñÿ ñïåêòðàëüíîãî øóìà. ÊÎÍÒÐÎËÜ ÏÀÐÀÌÅÒÐΠÏÐÈÁÎÐÀ Ïðèáîð ýêñïëóàòèðóþò ñîãëàñíî èíñòðóêöè- ÿì èçãîòîâèòåëÿ è ðåãóëÿðíî ïðîâîäÿò ïðåäïè- ñàííûå ïðîâåðêè â ñîîòâåòñòâèè ñ èñïîëüçîâà- íèåì ïðèáîðà è åãî ïðèìåíåíèåì. Èñïîëüçîâà- íèå àëüòåðíàòèâíûõ ñïîñîáîâ ïðîâåðêè ïðèãîäíîñòè ïðèáîðà ïðèìåíÿåìîãî â ïîòî÷íûõ ðåæèìàõ (on-line è in-line) äîëæíî áûòü íàó÷íî îáîñíîâàíî. Íàïðèìåð, èñïîëüçîâàíèå ñòàí- äàðòíûõ îáðàçöîâ, âñòðîåííûõ â ïðèáîð èëè â îòäåëüíûé êàíàë/çîíä äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ íàä- 89 90 Òàáëèöà 2.1.2.34.-1. — Ïðîâåðêà ïðèãîäíîñòè ïðèáîðà Ðåæèì èçìåðåíèÿ Îòðàæåíèå Ïðîïóñêàíèå-îòðàæåíèå Ïðîïóñêàíèå Ïðîâåðêà øêàëû äëèí âîëí (êðîìå ïðèáîðà, îñíà- ùåííîãî ôèëüò- ðîì) Òèïîâûå îòêëîíåíèÿ äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ ñîîòâåòñòâèÿ ñòàíäàðòíûì çíà÷åíèÿì: ±1,0 íì ïðè 780 íì (±16 ñì–1 ïðè 12 800 ñì–1); ±1,0 íì ïðè 1200 íì (±8 ñì–1 ïðè 8300 ñì–1); ±1,0 íì ïðè 1600 íì (±6 ñì–1 ïðè 6250 ñì–1); ±1,5 íì ïðè 2000 íì (±4 ñì–1 ïðè 5000 ñì–1); ±1,5 íì ïðè 2500 íì (±2 ñì–1 ïðè 4000 ñì–1). Äëÿ èñïîëüçóåìîãî ñòàíäàðòíîãî îáðàçöà ïðèìåíÿþò îòêëîíåíèÿ áëèæàéøåé äëèíû âîëíû èëè âîëíîâîãî ÷èñëà äëÿ êàæäîãî ïèêà.
Äëÿ ïðèáîðîâ ñ äèîäíîé ìàòðèöåé ïèêñåëüíîå ðàç- ðåøåíèå (äëèíà âîëíû ìåæäó ïèêñåëÿìè) ÷àùå âñåãî ìîæåò äîõîäèòü äî 10 íì. Ïèêñåëüíîå ðàçðåøåíèå äîëæíî áûòü àäàïòèðîâàíî, ÷òîáû ñïåêòðàëüíîå ðàçðåøåíèå áûëî ñîîòâåòñò- âóþùèì. Àëãîðèòìû íàõîæäåíèÿ ïèêîâ ÿâëÿåòñÿ êðèòè÷íûìè äëÿ òî÷íîñòè óñòàíîâêè äëèí âîëí. Íà ïðàêòèêå, òî÷íîñòü äëèíû âîëíû ïèêà ±2 íì ÿâëÿåòñÿ ïðèåìëåìîé ïðè èñ- ïîëüçîâàíèè òàêèõ ïðèáîðîâ.  êà÷åñòâå àëüòåðíàòèâû äîïóñêàåòñÿ èñïîëüçîâàòü ñïåöèôè- êàöèè ïðîèçâîäèòåëÿ ïðèáîðà. Ñòåíäîâûå/ ìîáèëüíûå ïðèáîðû Èçìåðÿþò òàëüê Ð ñ èñïîëü- çîâàíèåì ïîäõîäÿùåé ñðåäû èëè îïòèêî-âîëîêîííîãî çîíäà. Òàëüê Ð èìååò ïîäõî- äÿùèå äëÿ êàëèáðîâêè õà- ðàêòåðèñòè÷åñêèå ïèêè ïðè 948 íì, 1391 íì è 2312 íì. Àëüòåðíàòèâíî ìîæåò èñ- ïîëüçîâàòüñÿ äðóãîé ïîäõî- äÿùèé ñòàíäàðòíûé îáðà- çåö, îáåñïå÷èâàþùèé òî÷- íîñòü äëèíû âîëíû â ðàáî- ÷åì äèàïàçîíå ìåòîäèêè. Íàïðèìåð, èçìåðÿþò âíóò- ðåííèé ñòàíäàðò ïîëèñòèðî- ëà, åñëè îí âñòðîåí, èëè èç- ìåðÿþò ñòàíäàðòíûé îáðà- çåö NIST èëè äðóãîé ïðîñëå- æèâàåìûé ìàòåðèàë, è îöå- íèâàþò äëÿ êàëèáðîâêè òðè ïèêà â ïðåäåëàõ äèàïàçîíà äëèí âîëí. Ñóñïåíçèÿ 1,2 ã ñóõîãî òèòà- íà äèîêñèäà Ð â ïðèáëèçè- òåëüíî 4 ìë ìåòèëåíõëîðèäà Ð èñïîëüçóåòñÿ íåïîñðåäñò- âåííî äëÿ êþâåòû èëè çîíäà. Òèòàíà äèîêñèä íå ïîãëîùàåò â ÁÈÊ îáëàñòè. Ñïåêòðû çàïè- ñûâàþò ñ ìàêñèìàëüíîé íî- ìèíàëüíîé øèðèíîé ïîëîñû ïðîïóñêàíèÿ 10 íì ïðè 2500 íì (16 ñì–1 ïðè 4000 ñì–1). Ìåòèëåíõëîðèä èìååò õàðàê- òåðèñòè÷åñêèå îñòðûå ïîëîñû ïðè 1155 íì, 1366 íì, 1417 íì, 1690 íì, 1838 íì, 1894 íì, 2068 íì è 2245 íì. Äëÿ êàëèá- ðîâêè âûáèðàþò òðè ïèêà â ïðåäåëàõ äèàïàçîíà äëèí âîëí. Òàêæå ìîæåò èñïîëüçî- âàòüñÿ è äðóãîé ïîäõîäÿùèé ñòàíäàðòíûé îáðàçåö, òàêîé êàê æèäêèé ñòàíäàðòíûé îá- ðàçåö ïðîïóñêàíèÿ-îòðàæå- íèÿ â ñìåñè ñ òèòàíà äèîêñè- äîì èëè ëþáîé äðóãîé îòðà- æàþùåé ñðåäîé. Ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàí ìå- òèëåíõëîðèä Ð, êîòîðûé èìå- åò õàðàêòåðèñòè÷åñêèå îñò- ðûå ïîëîñû ïðè 1155 íì, 1366 íì, 1417 íì, 1690 íì, 1838 íì, 1894 íì, 2068 íì è 2245 íì. Äëÿ êàëèáðîâêè âû- áèðàþò òðè ïèêà â ïðåäåëàõ äèàïàçîíà äëèí âîëí. Òàêæå ìîæåò èñïîëüçîâàòüñÿ è äðó- ãîé ïîäõîäÿùèé ñòàíäàðòíûé îáðàçåö. Ïðèáîðû äëÿ ïðîèçâîäñòâåí- íîãî ïðîöåññà  ñëó÷àå åñëè íà ïðàêòèêå íåâîçìîæíî èçìåðèòü ïðîñëåæèâàåìûé ñòàíäàðòíûé îáðàçåö â òî÷êå èçìåðåíèÿ îáðàçöà, èñïîëüçóþò âíóòðåííèå ñòàíäàðòíûå ìàòåðèàëû, òàêèå êàê ïîëè- ñòèðîë, ñòåêëîâîëîêíî èëè ðàñòâîðèòåëü è/èëè âîäÿíîé ïàð. Àëüòåðíàòèâíî óñòàíàâëèâàþò âòîðîé âíåøíèé êàíàë/çîíä. Äëÿ ïðèáîðîâ ñ Ôóðüå-ïðåîáðàçîâàòåëåì êàëèáðîâêà øêàëû âîëíîâûõ ÷èñåë ìîæåò áûòü ïðîâåäåíà ñ èñïîëüçîâàíèåì óçêîé èçîëèðîâàííîé ëèíèè âîäÿíîãî ïàðà, íàïðèìåð, ëèíèè ïðè 7306,74 ñì–1, èëè 7299,45 ñì–1, èëè 7299,81 ñì–1 èëè óçêîé ëèíèè ñåðòèôèöèðîâàííîãî ñòàíäàðòíîãî îáðàçöà. Ïðîâåðêà ñõîäè- ìîñòè äëèí âîëí (êðîìå ïðèáîðà, îñíàùåííîãî ôèëüòðîì) Ñòàíäàðòíîå îòêëîíåíèå äëèíû âîëíû äîëæíî áûòü ñîïîñòàâèìî ñî ñïåöèôèêàöèÿìè ïðî- èçâîäèòåëÿ ïðèáîðà ëèáî áûòü íàó÷íî îáîñíîâàííûì. 91 Ðåæèì èçìåðåíèÿ Îòðàæåíèå Ïðîïóñêàíèå-îòðàæåíèå Ïðîïóñêàíèå Ñòåíäîâûå/ ìîáèëüíûå ïðèáîðû Ïðîâåðÿþò ñõîäèìîñòü äëèí âîëí ñ èñïîëüçîâàíèåì ïîäõîäÿùåãî âíåøíåãî èëè âíóòðåííå- ãî ñòàíäàðòíîãî îáðàçöà. Ïðèáîðû äëÿ ïðîèçâîäñòâåí- íîãî ïðîöåññà Ïðîâåðÿþò ñõîäèìîñòü äëèí âîëí ñ èñïîëüçîâàíèåì ïîäõîäÿùåãî âíåøíåãî èëè âíóòðåííå- ãî ñòàíäàðòíîãî îáðàçöà. Ïðîâåðêà ôîòî- ìåòðè÷åñêîé ëè- íåéíîñòè è ñòà- áèëüíîñòè îò- êëèêà(1) Èçìåðÿþò 4 ôîòîìåòðè÷åñêèõ ñòàíäàðòíûõ îáðàçöà â ïðåäåëàõ ðàáî÷åãî äèàïàçîíà ïîãëî- ùåíèÿ ìåòîäèêè. Ñòåíäîâûå/ ìîáèëüíûå ïðèáîðû Àíàëèçèðóþò 4 ñòàíäàðòíûõ îáðàçöà îòðàæåíèÿ, íàïðèìåð, â äèàïàçîíå (10–99) %, âêëþ- ÷àÿ 10 %, 20 %, 40 % è 80 %.