Текст очень длинный, поэтому разбит на части. Часть 6 из 13.
Êàæäûé âèä ìèêðîîðãàíèçìà â êîëè÷åñòâå 10 – 100 ÊÎÅ âíîñÿò â îòäåëüíóþ ïîðöèþ èñ- ïûòóåìîé ñðåäû (â 2 ïðîáèðêè). Èíêóáèðóþò â ñîîòâåòñòâèè ñ óñëîâèÿìè, óêàçàííûìè â Òàáëè- öå 3. Åñëè â òå÷åíèå íåîáõîäèìîãî âðåìåíè èí- êóáàöèè â èíîêóëèðîâàííûõ ñðåäàõ âèçóàëüíî îòìå÷àåòñÿ ðîñò ìèêðîîðãàíèçìîâ, ñðåäó ñ÷èòà- þò ïðèãîäíîé äëÿ èñïîëüçîâàíèÿ. 3.3.1. Ïîäãîòîâêà òåñò-øòàììîâ ìèêðîîðãàíèçìîâ Èñïîëüçóþò òåñò-øòàììû áàêòåðèé è ãðè- áîâ èç ñïåöèàëèçèðîâàííûõ êîëëåêöèé, êîòî- ðûå äîëæíû áûòü òèïè÷íûìè ïî êóëüòóðàëü- íî-ìîðôîëîãè÷åñêèì è áèîõèìè÷åñêèì ñâîéñò- âàì. ×èñëî ïàññàæåé ðàáî÷èõ êóëüòóð íå äîëæíî ïðåâûøàòü ïÿòè. Ïåðåä èñïûòàíèåì êóëüòóðû àýðîáíûõ áàê- òåðèé âûñåâàþò íà ñêîøåííûé ñîåâî-êàçåèíî- âûé àãàð, ñðåäó ¹ 1 èëè äðóãóþ àäåêâàòíóþ ïëîòíóþ ïèòàòåëüíóþ ñðåäó; êóëüòóðû ãðèáîâ Ñ. albicans è À. brasiliensis — íà ñêîøåííûé àãàð Ñàáóðî (èëè ñðåäó ¹ 2); êóëüòóðû àíàýðî- áîâ Clostridium novyi è Ñ. sporogenes* — íà ñðå- äû äëÿ àíàýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ (íàïðè- ìåð, æèäêóþ òèîãëèêîëåâóþ) è èíêóáèðóþò ïðè ñîîòâåòñòâóþùåé òåìïåðàòóðå. * Âîçìîæåí âûñåâ êóëüòóðû íà ñðåäû äëÿ àýðîáîâ ïðè óñëîâèè èíêóáàöèè â àíàýðîñòàòå. 3.3.2. Ïðèãîòîâëåíèå èíîêóëÿòà Âûðîñøèå êóëüòóðû òåñò-øòàììîâ áàêòå- ðèé (â òîì ÷èñëå, Ñ. sporogenes, âûðàùåííóþ â àíàýðîáíûõ óñëîâèÿõ) è Ñ. albicans ñìûâàþò ñ ïîâåðõíîñòè ñêîøåííîãî àãàðà ñòåðèëüíûì 0,9 % ðàñòâîðîì íàòðèÿ õëîðèäà. Ãîòîâÿò âçâåñü êàæäîãî òåñò-øòàììà, ñîîòâåòñòâóþùóþ 10 ÅÄ ïî îïòè÷åñêîìó ñòàíäàðòíîìó îáðàçöó ìóòíî- ñòè. Êîíöåíòðàöèþ êëåòîê Â. subtilis, B. cereus, C. albicans, A. brasiliensis äîâîäÿò äî 1 ´ 107 ÊÎÅ/ìë; S. aureus, P. aeruginosa, C. sporogenes, A. faecalis — äî 1 ´ 109 ÊÎÅ/ìë. 217 Êóëüòóðó C. novyi, âûðàùåííóþ íà æèäêîé ñðåäå êóëüòèâèðîâàíèÿ äëÿ àíàýðîáíûõ ìèêðî- îðãàíèçìîâ (2 ïåðåñåâà), ïîñëå öåíòðèôóãèðî- âàíèÿ 3000 îá/ìèí â òå÷åíèå 20 ìèí ðàçâîäÿò ñòåðèëüíîé æèäêîñòüþ ñëåäóþùåãî ñîñòàâà: l íàòðèÿ õëîðèä 8,5 ã l êèñëîòà òèîãëèêîëåâàÿ 0,3 ìë l âîäà î÷èùåííàÿ 1000 ìë ðÍ 7,2 ± 0,2 ïîñëå ñòåðèëèçàöèè. Äëÿ ñìûâà êîíèäèé A. brasiliensis èñïîëüçó- þò ñòåðèëüíûé 0,9 % ðàñòâîð íàòðèÿ õëîðèäà, ñîäåðæàùèé 0,05 % òâèíà-80. Êîëè÷åñòâî êîíè- äèé â 1 ìë ñìûâà îïðåäåëÿþò ñ ïîìîùüþ êàìå- ðû Ãîðÿåâà èëè ïîñåâîì ïîäõîäÿùåãî ðàçâåäå- íèÿ íà àãàð Ñàáóðî èëè ñðåäó ¹ 2. Ñòàíäàðòèçîâàííûå âçâåñè áàêòåðèé è ãðè- áîâ äîâîäÿò ñòåðèëüíûì 0,9 % ðàñòâîðîì íà- òðèÿ õëîðèäà ìåòîäîì ïîñëåäîâàòåëüíûõ äåñÿ- òèêðàòíûõ ðàçâåäåíèé äî êîíöåíòðàöèè 10 – 100 ÊÎÅ/ìë äëÿ ïîñåâà â æèäêèå è ïîëó- æèäêèå ïèòàòåëüíûå ñðåäû äëÿ îïðåäåëåíèÿ èõ ðîñòîâûõ ñâîéñòâ. Äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ ïîëó÷åííîé êîíöåíòðà- öèè èíîêóëÿòû áàêòåðèé, â òîì ÷èñëå, Ñ. spo- rogenes (ïðè óñëîâèè èíêóáàöèè ïîñëåäíåãî â àíàýðîñòàòå), âûñåâàþò íà ñîåâî-êàçåèíîâûé àãàð (ñðåäó ¹ 1 èëè ñïåöèàëèçèðîâàííóþ ñðåäó äëÿ êëîñòðèäèé ñîîòâåòñòâåííî) ïî 0,1 ìë èç âçâåñè ñ êîíöåíòðàöèåé 103 ÊÎÅ/ìë, C. novyi — íà ñïåöèàëüíóþ ñðåäó äëÿ êëîñòðèäèé. Èíîêó- ëÿòû ãðèáîâ âûñåâàþò íà àãàð Ñàáóðî (èëè ñðå- äó ¹ 2). 3.4. Îïðåäåëåíèå íåéòðàëèçóþùèõ ñâîéñòâ òèîãëèêîëåâîé ñðåäû Ïðè ïðîâåäåíèè èñïûòàíèé ÁËÏ, ñîäåðæà- ùèõ ìåðòèîëÿò (òèîìåðñàë), äëÿ îïðåäåëåíèÿ íåéòðàëèçóþùèõ ñâîéñòâ òèîãëèêîëåâîé ñðåäû èñïîëüçóþò òåñò-øòàìì Alcaligenes faecalis 415 (ïîäãîòîâêà èíîêóëÿòà ñì. ï. 3.3.2.) Ïðåäâàðè- òåëüíî ïåðåä ïîñåâîì êóëüòóðû â êàæäóþ ïðî- áèðêó â ñåðåäèíó ñòîëáèêà ñ òèîãëèêîëåâîé ñðå- äîé âíîñÿò ïî 0,5 ìë ñâåæåïðèãîòîâëåííîãî 0,01 % ðàñòâîðà òèîìåðñàëà, ðàçâåäåííîãî ñòå- ðèëüíûì 0,9 % ðàñòâîðîì íàòðèÿ õëîðèäà. Òèîãëèêîëåâóþ ñðåäó ïðèçíàþò ïðèãîäíîé ïî íåéòðàëèçóþùèì ñâîéñòâàì, åñëè íå ïîçäíåå 5 ñóòîê èíêóáàöèè ïîñåâîâ ïðè òåìïåðàòóðå 32,5 ± 2,5° Ñ âèçóàëüíî îáíàðóæèâàåòñÿ ðîñò òåñò-øòàììà A. faecalis 415. 3.5.
Õðàíåíèå ïèòàòåëüíûõ ñðåä Ïðèãîòîâëåííûå â ëàáîðàòîðèè ñðåäû õðà- íÿò ïðè òåìïåðàòóðå îò 2 äî 25 °Ñ â çàùèùåí- íîì îò ñâåòà ìåñòå â òå÷åíèå íå áîëåå 1 ìåñ èëè â òå÷åíèå èíîãî ñðîêà, ïîäòâåðæäåííîãî â õîäå âàëèäàöèîííûõ èñïûòàíèé.  ñëó÷àå, åñëè ïðè õðàíåíèè òèîãëèêîëåâîé ñðåäû, ñîäåðæàùåé ðåçàçóðèí, âåðõíèé ñëîé ñðåäû (áîëåå 1/3 îáúåìà) îêðàñèòñÿ â ðîçîâûé öâåò, ñðåäó ìîæíî ðåãåíåðèðîâàòü íàãðåâàíèåì íà êèïÿùåé âîäÿíîé áàíå â òå÷åíèå 10 – 15 ìèí äî èñ÷åçíîâåíèÿ ðîçîâîé îêðàñêè ñ ïîñëåäóþ- ùèì áûñòðûì îõëàæäåíèåì. Åñëè îêðàñêà íå èñ÷åçàåò ïîñëå íàãðåâàíèÿ, ñðåäó ñ÷èòàþò íå- ïðèãîäíîé ê ïðèìåíåíèþ. Ðåãåíåðàöèþ ñðåäû ìîæíî ïðîâîäèòü òîëüêî îäèí ðàç. Ïèòàòåëüíûå ñðåäû ïðîìûøëåííîãî ïðîèç- âîäñòâà, ãîòîâûå ê èñïîëüçîâàíèþ, õðàíÿò â ïëîòíî óêóïîðåííûõ åìêîñòÿõ ïðè óñëîâèè ñî- õðàíåíèÿ èõ ñòåðèëüíîñòè è ðîñòîâûõ ñâîéñòâ â òå÷åíèå ñðîêà ãîäíîñòè. Ñóõèå ïèòàòåëüíûå ñðåäû ïðîìûøëåííîãî ïðîèçâîäñòâà õðàíÿò â ñîîòâåòñòâèè ñ èíñòðóê- öèåé ïî ïðèìåíåíèþ è óíè÷òîæàþò ïî èñòå÷å- íèè ñðîêà ãîäíîñòè, óêàçàííîãî ïðîèçâîäèòå- ëåì. 201060002-2019 2.1.6.2. Ïèðîãåííîñòü Íàñòîÿùàÿ îáùàÿ ôàðìàêîïåéíàÿ ñòàòüÿ ðàñïðîñòðàíÿåòñÿ íà èñïûòàíèå ïèðîãåííîñòè èíúåêöèîííûõ ðàñòâîðîâ è ôàðìàöåâòè÷åñêèõ ñóáñòàíöèé, èç êîòîðûõ îíè èçãîòàâëèâàþòñÿ. Èñïûòàíèå îñíîâàíî íà èçìåðåíèè òåìïåðàòó- ðû òåëà ó êðîëèêîâ äî è ïîñëå èíúåêöèè. ÑÎÄÅÐÆÀÍÈÅ ÆÈÂÎÒÍÛÕ È ÏÎÄÃÎÒÎÂÊÀ ÈÕ Ê ÏÐÎÂÅÄÅÍÈÞ ÈÑÏÛÒÀÍÈß Êàæäîãî êðîëèêà ñîäåðæàò â îòäåëüíîé êëåòêå íà ïîëíîöåííîì ïèùåâîì ðàöèîíå, îãðà- æäàÿ îò ðàçäðàæàþùèõ âîçäåéñòâèé (àêóñòè÷å- ñêèõ, îïòè÷åñêèõ è äðóãèõ).  ïîìåùåíèÿõ, ãäå íàõîäÿòñÿ æèâîòíûå è ïðîâîäÿòñÿ èñïûòàíèÿ, ïîääåðæèâàþò ïîñòîÿííóþ òåìïåðàòóðó îêîëî 20 °Ñ. Òåìïåðàòóðà â ïîìåùåíèÿõ íå äîëæíà ðàçëè÷àòüñÿ áîëåå, ÷åì íà 3 °Ñ. Ïåðåä èñïûòà- íèåì ïðîâîäÿò îñìîòð æèâîòíûõ è îòáèðàþò çäîðîâûõ êðîëèêîâ îäíîãî ïîëà, íå àëüáèíîñîâ, 218 ñ ìàññîé òåëà îò íå ìåíåå 1,5 êã, êîòîðûå íå òå- ðÿëè â ìàññå â òå÷åíèå ïðåäûäóùåé íåäåëè. Çà 18 ÷àñîâ äî èñïûòàíèÿ êðîëèêîâ ëèøàþò êîðìà áåç îãðàíè÷åíèÿ âîäû. Âî âðåìÿ îïûòà æèâîòíûå íå ïîëó÷àþò íè êîðìà, íè âîäû. Êðî- ëèêîâ, âïåðâûå ïðåäíàçíà÷åííûõ äëÿ îïûòà èëè íå ó÷àñòâîâàâøèõ â îïûòå áîëåå ÷åòûðåõ íå- äåëü, ïðåäâàðèòåëüíî ãîòîâÿò ê ïðîöåäóðå èñ- ïûòàíèÿ, îñóùåñòâëÿÿ âñå ðàáî÷èå îïåðàöèè (îñìîòð, âçâåøèâàíèå, èçìåðåíèå òåìïåðàòóðû òåëà) çà èñêëþ÷åíèåì èíúåêöèè. Êðîëèêè, ðàíåå áûâøèå â îïûòå, ìîãóò áûòü èñïîëüçîâàíû ïîâòîðíî ÷åðåç òðîå ñóòîê, åñëè ââåäåííîå èì ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî áûëî àïè- ðîãåííûì. Ïðè ïîâûøåíèè òåìïåðàòóðû òåëà ó æèâîòíîãî íà 0,6 °Ñ è áîëåå, êðîëèê ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàí äëÿ äàëüíåéøèõ îïûòîâ íå ðàíåå, ÷åì ÷åðåç äâå íåäåëè. Åñëè èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî îáëàäàåò àíòèãåííûìè ñâîéñòâàìè, òî ïîðÿäîê ïîâòîðíîãî èñïîëüçîâàíèÿ æèâîòíûõ äëÿ èñïû- òàíèé óêàçûâàþò â ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. ÌÀÒÅÐÈÀËÛ È ÎÁÎÐÓÄÎÂÀÍÈÅ Ïîñóäà äëÿ ðàçâåäåíèÿ, øïðèöû è èãëû äëÿ èíúåêöèé äîëæíû áûòü ñòåðèëüíûìè è àïèðî- ãåííûìè, ÷òî îáåñïå÷èâàåòñÿ íàãðåâàíèåì ïðè òåìïåðàòóðå 250 °Ñ â òå÷åíèå 30 ìèíóò èëè 200 °Ñ â òå÷åíèå 60 ìèíóò. Äëÿ ðàçâåäåíèÿ èñïûòóåìîãî îáðàçöà ëåêàð- ñòâåííîãî ñðåäñòâà èñïîëüçóþò ðàñòâîð íàòðèÿ õëîðèäà 0,9 %, åñëè â ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå íå óêàçàí äðóãîé ðàñòâîðèòåëü. Âñå ðàñòâîðèòåëè äîëæíû áûòü ñòåðèëüíûìè è àïèðîãåííûìè. Ðåêòàëüíóþ òåìïåðàòóðó ó êðîëèêîâ èçìå- ðÿþò ñ òî÷íîñòüþ äî 0,1 °Ñ ìåäèöèíñêèì ìàê- ñèìàëüíûì ðòóòíûì èëè ýëåêòðîííûì òåðìî- ìåòðîì ñ òåðìî÷óâñòâèòåëüíûì äàò÷èêîì. Òåð- ìîìåòð èëè äàò÷èê ââîäÿò â ïðÿìóþ êèøêó êðîëèêà íà ãëóáèíó îò 5 äî 7,5 ñì â çàâèñèìîñòè îò ìàññû òåëà æèâîòíîãî.
ÂÂÅÄÅÍÈÅ ÈÑÏÛÒÓÅÌÎÃÎ ËÅÊÀÐÑÒÂÅÍÍÎÃÎ ÑÐÅÄÑÒÂÀ Èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî ââîäÿò â óøíóþ âåíó êðîëèêà, åñëè â ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå íå óêàçàí äðóãîé ïóòü ââåäåíèÿ. Îáúåì èíúåöèðóåìîãî ðàñòâîðà èñïûòóåìîãî îáðàçöà äîëæåí ñîñòàâëÿòü íå ìåíåå 0,2 ìë è íå áîëåå 10 ìë íà 1,0 êã ìàññû òåëà æèâîòíîãî. Ïåðåä ââåäåíèåì ðàñòâîð ïîäîãðåâàþò äî òåìïåðàòó- ðû 37,0 ± 2 °Ñ. Âåñü îáúåì ëåêàðñòâåííîãî ñðåäñòâà ââîäÿò çà ïåðèîä âðåìåíè íå áîëåå 2 ìèíóò. Òåñò-äîçó èñïûòóåìîãî ëåêàðñòâåííîãî ñðåäñòâà, îáú¸ì ââîäèìîãî ðàñòâîðà è, åñëè íå- îáõîäèìî, ñêîðîñòü ââåäåíèÿ óêàçûâàþò â ôàð- ìàêîïåéíîé ñòàòüå. ÏÐÎÂÅÄÅÍÈÅ ÈÑÏÛÒÀÍÈß Èñïûòàíèå èñïûòóåìîãî ëåêàðñòâåííîãî ñðåäñòâà ïðîâîäÿò íà ãðóïïå èç òðåõ êðîëèêîâ ñ èñõîäíîé òåìïåðàòóðîé 38,5 – 39,5 °Ñ. Ïåðåä îïûòîì, ñ èíòåðâàëîì íå ìåíåå 30 ìèíóò, ó êàæäîãî êðîëèêà äâàæäû èçìåðÿþò òåìïåðàòóðó òåëà. Ðàçëè÷èÿ â ïîêàçàíèÿõ òåì- ïåðàòóðû ó îäíîãî è òîãî æå æèâîòíîãî íå äîëæíû ïðåâûøàòü 0,2 °Ñ.  ïðîòèâíîì ñëó÷àå êðîëèêà èñêëþ÷àþò èç èñïûòàíèÿ. Çà èñõîäíóþ òåìïåðàòóðó ïðèíèìàþò âåëè÷èíó ïîñëåäíåãî ðåçóëüòàòà èçìåðåíèÿ. Ðàñòâîð èñïûòóåìîãî îáðàçöà ââîäÿò æèâîò- íûì ñðàçó ïîñëå âòîðîãî èçìåðåíèÿ òåìïåðàòó- ðû. Èçìåðåíèÿ òåìïåðàòóðû ïîñëå âíóòðèâåí- íîãî ââåäåíèÿ èñïûòóåìîãî îáðàçöà ïðîâîäÿò ñ èíòåðâàëîì íå áîëåå 30 ìèíóò íà ïðîòÿæåíèè òðåõ ÷àñîâ. Ïðè äðóãèõ ïóòÿõ ïàðåíòåðàëüíîãî ââåäåíèÿ — íà ïðîòÿæåíèè ïÿòè ÷àñîâ. Ó×ÅÒ ÐÅÇÓËÜÒÀÒΠÈñïûòàíèå èñïûòóåìîãî ëåêàðñòâåííîãî ñðåäñòâà ìîæíî ïðîâîäèòü ïîýòàïíî. Íà êàæ- äîì ýòàïå èñïîëüçóþò òðåõ êðîëèêîâ. Ìàêñè- ìàëüíîå ÷èñëî ýòàïîâ íå äîëæíî ïðåâûøàòü ÷å- òûðåõ. Ïî îêîí÷àíèè êàæäîãî èç ýòàïîâ èñïûòàíèÿ îïðåäåëÿþò ìàêñèìàëüíîå èçìåíåíèå òåìïåðà- òóðû (Dt ) òåëà êàæäîãî êðîëèêà ïî ñðàâíåíèþ ñ èñõîäíûì çíà÷åíèåì. Èçìåíåíèå òåìïåðàòóðû òåëà æèâîòíîãî íèæå èñõîäíîé âåëè÷èíû ïðè- íèìàþò çà íóëåâîå è íå ó÷èòûâàþò. Äëÿ òðåõ êðîëèêîâ îïðåäåëÿþò ñóììó èíäè- âèäóàëüíûõ ìàêñèìàëüíûõ ïîâûøåíèé òåìïå- ðàòóð (SDt ). Çíà÷åíèÿ SDt, ïîëó÷åííûå íà ðàç- íûõ ýòàïàõ èñïûòàíèÿ, ïîñëåäîâàòåëüíî ñóììè- ðóþò, à ðåçóëüòàòû ñðàâíèâàþò ñ óðîâíÿìè, óêàçàííûìè â Òàáëèöå 2.1.6.2.-1. Ïîñëå ïåðâîãî ýòàïà èñïûòàíèÿ èñïûòóå- ìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî ïðèçíàþò àïèðî- ãåííûì, åñëè ïîëó÷åííûé ðåçóëüòàò ìåíüøå èëè ðàâåí 1,2 °Ñ (Òàáëèöà 1, êîëîíêà 3), à èíäè- 219 âèäóàëüíîå ïîâûøåíèå òåìïåðàòóðû íè ó îäíî- ãî èç òðåõ êðîëèêîâ íå ïðåâûøàåò 0,5 °Ñ (êîëîí- êà 4). Åñëè ðåçóëüòàò, ïîëó÷åííûé íà ïåðâîì ýòà- ïå, ïðåâûøàåò 1,2 °Ñ (êîëîíêà 5) èëè çàðåãèñò- ðèðîâàíî èíäèâèäóàëüíîå ïîâûøåíèå òåìïåðà- òóðû áîëåå ÷åì íà 0,5 °Ñ õîòÿ áû ó îäíîãî èç òðåõ êðîëèêîâ (êîëîíêà 6), òî íåîáõîäèìî ïå- ðåéòè ê ïðîâåäåíèþ ñëåäóþùåãî ýòàïà èñïûòà- íèÿ. Ïîñëå âòîðîãî ýòàïà èñïûòàíèÿ èñïûòóå- ìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî ïðèçíàþò àïèðî- ãåííûì, åñëè ïîëó÷åííûé ðåçóëüòàò ìåíüøå èëè ðàâåí 2,8 °Ñ (êîëîíêà 3), à èíäèâèäóàëüíîå ïîâûøåíèå òåìïåðàòóðû ñâûøå 0,5 °Ñ îòìå÷å- íî íå áîëåå, ÷åì ó îäíîãî èç øåñòè êðîëèêîâ (êîëîíêà 4). Åñëè ðåçóëüòàò, ïîëó÷åííûé íà âòîðîì ýòàïå èñïûòàíèÿ, áîëüøå 2,8 °Ñ, íî ìåíüøå 4,3 °Ñ (êîëîíêà 5), èëè áîëåå, ÷åì ó îäíîãî æèâîòíîãî çàðåãèñòðèðîâàíî èíäèâèäóàëüíîå ïîâûøåíèå òåìïåðàòóðû ñâûøå 0,5 °Ñ (êîëîíêà 6), òî íåîá- õîäèìî ïåðåéòè ê ïðîâåäåíèþ ñëåäóþùåãî ýòà- ïà èñïûòàíèÿ. Ïîñëå òðåòüåãî ýòàïà èñïûòàíèÿ èñïû- òóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî ïðèçíàþò àïèðîãåííûì, åñëè ïîëó÷åííûé ðåçóëüòàò ìåíüøå èëè ðàâåí 4,5 °Ñ (êîëîíêà 3), à èíäèâè- äóàëüíîå ïîâûøåíèå òåìïåðàòóðû ñâûøå 0,5 °Ñ îòìå÷åíî íå áîëåå, ÷åì ó äâóõ èç äåâÿòè êðîëèêîâ (êîëîíêà 4).
Åñëè ðåçóëüòàò, ïîëó÷åííûé íà òðåòüåì ýòà- ïå èñïûòàíèÿ, áîëüøå 4,5 °Ñ, íî ìåíüøå 6,0 °Ñ (êîëîíêà 5), èëè çàðåãèñòðèðîâàíî èíäèâèäó- àëüíîå ïîâûøåíèå òåìïåðàòóðû ñâûøå 0,5 °Ñ áîëåå, ÷åì ó äâóõ æèâîòíûõ (êîëîíêà 6), òî íå- îáõîäèìî ïåðåéòè ê ïðîâåäåíèþ ñëåäóþùåãî ýòàïà èñïûòàíèÿ. Ïîñëå ÷åòâåðòîãî ýòàïà èñïûòàíèÿ èñïû- òóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî ïðèçíàþò àïèðîãåííûì, åñëè ïîëó÷åííûé ðåçóëüòàò ìåíüøå èëè ðàâåí 6,6 °Ñ (êîëîíêà 3), à èíäèâè- äóàëüíîå ïîâûøåíèå òåìïåðàòóðû ñâûøå 0,5 °Ñ îòìå÷åíî íå áîëåå, ÷åì ó òðåõ èç äâåíà- äöàòè êðîëèêîâ (êîëîíêà 4). Èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî ïðè- çíàþò ïèðîãåííûì, åñëè ðåçóëüòàò íà âòîðîì èëè ïîñëåäóþùèõ ýòàïàõ èñïûòàíèÿ âûøå, ÷åì âåëè÷èíû, óêàçàííûå â êîëîíêå 7. Èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî ïðè- çíàþò ïèðîãåííûì è â òîì ñëó÷àå, åñëè â ðå- çóëüòàòå ÷åòûðåõ ýòàïîâ èñïûòàíèÿ çàðåãèñòðè- ðîâàíî èíäèâèäóàëüíîå ïîâûøåíèå òåìïåðàòó- ðû ñâûøå 0,5 °Ñ áîëåå, ÷åì ó òðåõ êðîëèêîâ èç äâåíàäöàòè. 201060003-2019 2.1.6.3. Àíîìàëüíàÿ òîêñè÷íîñòü Íàñòîÿùàÿ îáùàÿ ôàðìàêîïåéíàÿ ñòàòüÿ ðàñïðîñòðàíÿåòñÿ íà ìåòîä îïðåäåëåíèÿ àíî- ìàëüíîé òîêñè÷íîñòè ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ. ÎÑÍÎÂÍÀß ÌÅÒÎÄÈÊÀ ÈÑÏÛÒÀÍÈß Èñïûòàíèå ïðîâîäÿò íà 5 çäîðîâûõ áåëûõ íåëèíåéíûõ ìûøàõ îáîåãî ïîëà ìàññîé 19 – 21 ã, êîòîðûå ðàíåå íå èñïîëüçîâàëèñü â ýêñïåðèìåíòàõ. Óñëîâèÿ ñîäåðæàíèÿ è êîðìëå- íèÿ äîëæíû îáåñïå÷èâàòü íîðìàëüíóþ æèçíå- äåÿòåëüíîñòü æèâîòíûõ. Èñïûòóåìûé îáðàçåö 220 Òàáëèöà 2.1.6.2.-1. — Îöåíêà ðåçóëüòàòîâ èñïûòàíèÿ Ýòàï Îáùåå êîëè÷åñòâî æèâîòíûõ Îöåíêà ðåçóëüòàòîâ èñïûòàíèÿ (SDt) Ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî ïðèçíàþò àïèðîãåííûì Ïîâòîðíîå èñïûòàíèå (ïåðåñòàíîâêó) ïðîâîäÿò Ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî ïðèçíàþò ïèðîãåííûì, åñëè SDtåñëè SDt ïðè ÷èñëå æèâîòíûõ ñ ïîâûøåíèåì Dt > 0,5 °Ñ íå áîëåå åñëè SDt ïðè ÷èñëå æèâîòíûõ ñ ïîâûøåíèåì Dt > 0,5 °Ñ 1 2 3 4 5 6 7 I 3 £1,2 — >1,2 ³1 — II 6 £2,8 1 >2,8, íî <4,3 >1 >4,3 III 9 £4,5 2 >4,5, íî <6,0 >2 >6,0 IV 12 £6,6 3 — — >6,6* * Ïðè èíäèâèäóàëüíîì ïîâûøåíèè òåìïåðàòóðû ñâûøå 0,5 °Ñ áîëåå, ÷åì ó òðåõ êðîëèêîâ èç äâåíàäöàòè, èñ- ïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî ïðèçíàþò ïèðîãåííûì. ðàñòâîðÿþò èëè ðàçâîäÿò (â ñëó÷àå íåîáõîäèìî- ñòè) ðàñòâîðîì íàòðèÿ õëîðèäà 0,9 % äëÿ èíúåê- öèé èëè âîäîé äëÿ èíúåêöèé. Òåñò-äîçà äîëæíà ñîäåðæàòüñÿ â îáúåìå 0,5 ìë èñïûòóåìîãî ðàñ- òâîðà, êîòîðûé ââîäÿò â õâîñòîâóþ âåíó æèâîò- íîãî ñî ñêîðîñòüþ 0,1 ìë â ñåêóíäó. Òåñò-äîçó óêàçûâàþò â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. Ïå- ðèîä íàáëþäåíèÿ çà æèâîòíûìè ñîñòàâëÿåò 48 ÷. Åñëè â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå äàíû èíûå óêàçàíèÿ, òî ñëåäóþò èì. Èñïûòóåìûé îáðàçåö ñ÷èòàþò ïðîøåäøèì èñïûòàíèå, åñëè â òå÷åíèå ïðåäóñìîòðåííîãî ñðîêà íàáëþäåíèÿ íå ïîãèáíåò íè îäíî èç ïîä- îïûòíûõ æèâîòíûõ.  ñëó÷àå ãèáåëè îäíîãî æèâîòíîãî, ýêñïåðè- ìåíò ïîâòîðÿþò íà 5 ìûøàõ ìàññîé 20,0 ± 0,5 ã. Åñëè ïðè ïîâòîðíîì èñïûòàíèè íå ïîãèáíåò íè îäíà ìûøü, èñïûòóåìûé îáðàçåö ñ÷èòàþò ïðî- øåäøèì èñïûòàíèå. Èñïûòóåìûé îáðàçåö íå âûäåðæèâàåò èñïû- òàíèå, åñëè â òå÷åíèå ïðåäóñìîòðåííîãî ñðîêà íàáëþäåíèÿ ïîãèáíåò áîëåå, ÷åì îäíî æèâîò- íîå. ÈÑÏÛÒÀÍÈß ÈÌÌÓÍÎÁÈÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÕ ËÅÊÀÐÑÒÂÅÍÍÛÕ ÑÐÅÄÑÒ Èñïûòàíèÿ ïðîâîäÿò íà äâóõ âèäàõ æèâîò- íûõ: íà 5 áåëûõ ìûøàõ ìàññîé 18- 20 ã è/èëè íà äâóõ ìîðñêèõ ñâèíêàõ, ìàññîé òåëà 250 – 300 ã. Ìàññó æèâîòíûõ îïðåäåëÿþò â äåíü íà÷àëà èñ- ïûòàíèÿ.  èñïûòàíèÿ áåðóò çäîðîâûõ æèâîò- íûõ, êîòîðûå ðàíåå íå èñïîëüçîâàëèñü â ýêñïå- ðèìåíòàõ. Óñëîâèÿ ñîäåðæàíèÿ è êîðìëåíèÿ äîëæíû îáåñïå÷èâàòü íîðìàëüíóþ æèçíåäåÿ- òåëüíîñòü æèâîòíûõ.
ÈÑÏÛÒÀÍÈÅ ÍÀ ÁÅËÛÕ ÌÛØÀÕ Èñïûòóåìûé îáðàçåö ââîäÿò êàæäîìó èç 5 æèâîòíûõ âíóòðèáðþøèííî â îäíîé ìàêñè- ìàëüíîé ðàçîâîé äîçå äëÿ ÷åëîâåêà èëè æèâîò- íîãî, äëÿ êîòîðîãî ïðåäíàçíà÷åíî ëåêàðñòâåí- íîå ñðåäñòâî (íî íå áîëåå 1,0 ìë), åñëè â íîðìà- òèâíîé äîêóìåíòàöèè íåò èíûõ óêàçàíèé. Ëèîôèëèçèðîâàííûé èñïûòóåìûé îáðàçåö âîñ- ñòàíàâëèâàþò ïðèëàãàåìûì ðàñòâîðèòåëåì â ñîîòâåòñòâèè ñ óêàçàíèÿìè íà ýòèêåòêå. Åñëè èñïûòóåìûé îáðàçåö ïðåäíàçíà÷åí äëÿ âíóòðè- âåííîãî ââåäåíèÿ, òî åãî àíîìàëüíóþ òîêñè÷- íîñòü îïðåäåëÿþò ïðè âíóòðèâåííîì ââåäåíèè, ïðè ýòîì èñïûòóåìàÿ äîçà íå äîëæíà ïðåâû- øàòü 0,5 ìë. Èñïûòóåìûé îáðàçåö, ââîäèìûé âíóòðèâåííî, äîëæåí èìåòü òåìïåðàòóðó 36 ± 1° Ñ. Ïåðèîä íàáëþäåíèÿ çà æèâîòíûìè ñîñòàâ- ëÿåò 7 ñóò. Åñëè â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòà- òüå äàíû èíûå óêàçàíèÿ, òî ñëåäóþò èì. Èñïûòóåìûé îáðàçåö ñ÷èòàþò âûäåðæàâ- øèì èñïûòàíèå, åñëè â òå÷åíèå âñåãî ñðîêà íà- áëþäåíèÿ: l îòñóòñòâóåò ãèáåëü ïîäîïûòíûõ æèâîòíûõ; l íè ó îäíîãî èç æèâîòíûõ íå ïðîÿâÿòñÿ ïðè- çíàêè èíòîêñèêàöèè; l îòñóòñòâóåò ñíèæåíèå ìàññû òåëà æèâîò- íûõ ïî ñðàâíåíèþ ñ èñõîäíîé. Åñëè â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå äàíû èíûå óêàçàíèÿ, òî ñëåäóþò èì. Åñëè áîëåå, ÷åì îäíî æèâîòíîå ïîãèáíåò, èñïûòóåìûé îáðàçåö ñ÷èòàþò íå âûäåðæàâøèì èñïûòàíèå. Åñëè ïîãèáíåò îäíî æèâîòíîå, ïðî- ÿâÿòñÿ ïðèçíàêè èíòîêñèêàöèè èëè áóäåò îòìå- ÷åíî ñíèæåíèå ìàññû òåëà, òî èñïûòàíèå ïîâòî- ðÿþò íà óäâîåííîì êîëè÷åñòâå æèâîòíûõ. Èñ- ïûòóåìûé îáðàçåö ïðèçíàåòñÿ ïðîøåäøèì èñïûòàíèå, åñëè íè îäíî æèâîòíîå èç âòîðîé ãðóïïû íå ïîãèáíåò, íå ïðîÿâÿòñÿ ïðèçíàêè èí- òîêñèêàöèè è íå áóäåò îòìå÷åíî óìåíüøåíèå ìàññû òåëà çà ïåðèîä íàáëþäåíèÿ. ÈÑÏÛÒÀÍÈÅ ÍÀ ÌÎÐÑÊÈÕ ÑÂÈÍÊÀÕ Èñïûòóåìûé îáðàçåö ââîäÿò 2 æèâîòíûì ïîäêîæíî â äîçå, ðàâíîé îäíîé ìàêñèìàëüíîé ðàçîâîé äîçå äëÿ ÷åëîâåêà èëè æèâîòíîãî, äëÿ êîòîðîãî ïðåäíàçíà÷åíî ëåêàðñòâåííîå ñðåäñò- âî, íî íå áîëåå 5 ìë (åñëè â íîðìàòèâíîé äîêó- ìåíòàöèè íåò èíûõ óêàçàíèé). Ëèîôèëèçèðîâàííûé èñïûòóåìûé îáðàçåö âîññòàíàâëèâàþò ïðèëàãàåìûì ðàñòâîðèòåëåì â ñîîòâåòñòâèè ñ óêàçàíèÿìè íà ýòèêåòêå. Åñëè èñïûòóåìûé îáðàçåö ïðåäíàçíà÷åí äëÿ âíóòðè- âåííîãî ââåäåíèÿ, òî åãî àíîìàëüíóþ òîêñè÷- íîñòü îïðåäåëÿþò ïðè âíóòðèáðþøèííîì ââå- äåíèè, ïðè ýòîì ââîäèìàÿ äîçà íå äîëæíà ïðå- âûøàòü 5 ìë. Ïåðèîä íàáëþäåíèÿ çà æèâîòíûìè ñîñòàâ- ëÿåò 7 ñóò, åñëè â íîðìàòèâíîì äîêóìåíòå ïî êà- ÷åñòâó íå óêàçàíû äðóãèå òðåáîâàíèÿ. Èñïûòóåìûé îáðàçåö ñ÷èòàþò âûäåðæàâ- øèì èñïûòàíèå, åñëè â òå÷åíèå âñåãî ñðîêà íà- áëþäåíèÿ: l îòñóòñòâóåò ãèáåëü ïîäîïûòíûõ æèâîòíûõ è íè ó îäíîãî èç íèõ íå áûëè âûÿâëåíû âèäèìûå ïðèçíàêè èíòîêñèêàöèè; l îòñóòñòâóåò ñíèæåíèå ìàññû òåëà êàæäîãî æèâîòíîãî â äåíü îêîí÷àíèÿ íàáëþäåíèÿ ïî ñðàâíåíèþ ñ èñõîäíîé; l íè ó îäíîãî æèâîòíîãî, ïîëó÷àâøåãî èñïû- òóåìûé îáðàçåö ïîäêîæíî, íå ðàçâèëñÿ íåêðîç 221 èëè àáñöåññ â ìåñòå åãî ââåäåíèÿ (âîçìîæíîñòü ðàçâèòèÿ äðóãèõ ïðîÿâëåíèé ðåàêöèè â ìåñòå ââåäåíèÿ èñïûòóåìîãî îáðàçöà óêàçûâàþò â íîð- ìàòèâíîé äîêóìåíòàöèè). Åñëè â ÷àñòíîé ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå äàíû èíûå óêàçàíèÿ, òî ñëåäóþò èì. Èñïûòóåìûé îáðàçåö ïðèçíàåòñÿ ïðîøåä- øèì èñïûòàíèå, åñëè íè ó îäíîãî èç æèâîòíûõ íå ïðîÿâÿòñÿ ïðèçíàêè èíòîêñèêàöèè è íå áóäåò îòìå÷åíî óìåíüøåíèå ìàññû òåëà. Åñëè îáà æèâîòíûõ ïîãèáíóò, èñïûòóåìûé îáðàçåö ïðèçíàåòñÿ íå âûäåðæàâøèì èñïûòà- íèå. Åñëè â òå÷åíèå ïåðèîäà íàáëþäåíèÿ ðåãèñò- ðèðóþò ãèáåëü îäíîãî æèâîòíîãî, çàáîëåâàíèå, óìåíüøåíèå ìàññû, ðàçâèòèå íåêðîçà èëè àáñ- öåññà â ìåñòå ââåäåíèÿ èñïûòóåìîãî îáðàçöà õîòÿ áû ó îäíîãî æèâîòíîãî, èñïûòàíèå äîëæíî áûòü ïîâòîðåíî íà óäâîåííîì êîëè÷åñòâå æè- âîòíûõ òîãî æå âèäà. Ïîâòîðíîå èñïûòàíèå ñ÷è- òàþò óäîâëåòâîðèòåëüíûì, åñëè èñïûòóåìûé îáðàçåö îòâå÷àåò âûøåïåðå÷èñëåííûì òðåáîâà- íèÿì.
Èñïûòóåìûé îáðàçåö ïðèçíàåòñÿ ïðîøåä- øèì èñïûòàíèå, åñëè íè îäíî æèâîòíîå èç âòî- ðîé ãðóïïû íå ïîãèáíåò èëè íå ïðîÿâÿòñÿ ïðè- çíàêè èíòîêñèêàöèè è íå áóäåò îòìå÷åíî óìåíü- øåíèå ìàññû òåëà çà ïåðèîä íàáëþäåíèÿ. Åñëè îáà æèâîòíûõ ïîãèáíóò, ëåêàðñòâåí- íîå ñðåäñòâî ïðèçíàåòñÿ íå âûäåðæàâøèì èñ- ïûòàíèå. Åñëè â òå÷åíèå ïåðèîäà íàáëþäåíèÿ ðåãèñò- ðèðóþò ãèáåëü îäíîãî æèâîòíîãî, çàáîëåâàíèå, óìåíüøåíèå ìàññû, ðàçâèòèå íåêðîçà èëè àáñ- öåññà â ìåñòå ââåäåíèÿ èñïûòóåìîãî ïðåïàðàòà õîòÿ áû ó îäíîãî æèâîòíîãî, èñïûòàíèå äîëæíî áûòü ïîâòîðåíî íà óäâîåííîì êîëè÷åñòâå æè- âîòíûõ òîãî æå âèäà. Ïîâòîðíîå èñïûòàíèå ñ÷è- òàþò óäîâëåòâîðèòåëüíûì, åñëè ïðåïàðàò îòâå- ÷àåò âûøåïåðå÷èñëåííûì òðåáîâàíèÿì. Ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî ïðèçíàåòñÿ ïðî- øåäøèì èñïûòàíèå, åñëè íè îäíî æèâîòíîå èç âòîðîé ãðóïïû íå ïîãèáíåò èëè íå ïðîÿâÿòñÿ ïðèçíàêè èíòîêñèêàöèè è íå áóäåò îòìå÷åíî óìåíüøåíèå ìàññû òåëà çà ïåðèîä íàáëþäåíèÿ. 201060004-2019 2.1.6.4. Èñïûòàíèå íà ãèñòàìèí Íàñòîÿùàÿ ñòàòüÿ ðàñïðîñòðàíÿåòñÿ íà îï- ðåäåëåíèå ñîäåðæàíèÿ ãèñòàìèíà in vitro â ëå- êàðñòâåííûõ ñðåäñòâàõ äëÿ ïàðåíòåðàëüíîãî ïðèìåíåíèÿ. ÏÎÄÃÎÒÎÂÊÀ ÈÇÎËÈÐÎÂÀÍÍÎÃÎ ÎÐÃÀÍÀ  îïûò áåðóò ìîðñêóþ ñâèíêó-ñàìöà ìàññîé òåëà 200 – 350 ã. Çà 24 ÷ äî ýêñïåðèìåíòà æèâîò- íîå ëèøàþò ïèùè, íî îñòàâëÿþò ñâîáîäíûé äîñòóï ê âîäå. Ïîñëå ýâòàíàçèè ó ñâèíêè âñêðû- âàþò áðþøíóþ ïîëîñòü îò ëîííîãî ñî÷ëåíåíèÿ äî ãðóäèíû è íàõîäÿò ñëåïóþ êèøêó. Ìåñòî å¸ ïåðåõîäà â îáîäî÷íóþ êèøêó ÿâëÿåòñÿ îðèåíòè- ðîì ïðè ïîèñêå ïîäâçäîøíîé êèøêè, êîòîðàÿ îòõîäèò îò ñëåïîé çà 1 – 2 ñì äî ýòîãî ó÷àñòêà. Äëÿ òîãî ÷òîáû èçâëå÷ü ïîäâçäîøíóþ êèø- êó, òóïûì çàæèìîì èëè ïèíöåòîì ïëîòíî çàõâà- òûâàþò å¸ îñíîâàíèå è îòðåçàþò íîæíèöàìè. Îòñå÷¸ííûé êîíåö êèøêè ñëåãêà ïðèïîäíèìà- þò, à çàòåì áåç íàòÿæåíèÿ è, íå ïåðåõâàòûâàÿ å¸, îòñåêàþò òêàíü áðûæåéêè ìàëåíüêèìè ðàçðåçà- ìè ïðè ïîìîùè òóïîêîíå÷íûõ íîæíèö. Îñòàòêè áðûæåéêè óäàëÿòü íå ñëåäóåò. Âñå ìàíèïóëÿöèè ñ ïîäâçäîøíîé êèøêîé ñëåäóåò ïðîâîäèòü îñòî- ðîæíî, íå ðàñòÿãèâàÿ å¸. Äëÿ ýêñïåðèìåíòà ïðè- ãîäåí äèñòàëüíûé ó÷àñòîê ïîäâçäîøíîé êèøêè, èñêëþ÷àÿ 10 – 15 ñì, áëèæàéøèå ê ñëåïîé êèø- êå. Ïîäâçäîøíóþ êèøêó íàðåçàþò íà ðàâíûå ÷àñòè (îêîëî 6 ñì êàæäàÿ) è ïîìåùàþò â ÷àøêó Ïåòðè ñ ãèïîêàëüöèåâûì ðàñòâîðîì Òèðîäå (ïðèìå÷àíèå 1). Ýòèì ðàñòâîðîì îñòîðîæíî ïðîìûâàþò ïîëó÷åííûå îòðåçêè ñ ïîìîùüþ øïðèöà èëè ðåçèíîâîé ãðóøè ñ ïàñòåðîâñêîé ïèïåòêîé ñ çàòóïë¸ííûì êîíöîì äî ïîëíîãî óäàëåíèÿ ñîäåðæèìîãî êèøå÷íèêà. Ïðîìûòûå îòðåçêè ïîäâçäîøíîé êèøêè ïîìåùàþò â ÷èñ- òûé ãèïîêàëüöèåâûé ðàñòâîð Òèðîäå. Îíè ìî- ãóò áûòü èñïîëüçîâàíû ñðàçó èëè õðàíèòüñÿ â òå÷åíèå 24 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå îò 2 °Ñ äî 4 °Ñ (ïðèìå÷àíèå 2). Íåïîñðåäñòâåííî ïåðåä ýêñïåðèìåíòîì ïðî- ìûòûé îòðåçîê êèøêè ðàçðåçàþò äî äëèíû, òðå- áóåìîé óñëîâèÿìè ýêñïåðèìåíòà (10 ìì ïðè èñ- ïîëüçîâàíèè ýëåêòðîííîãî äàò÷èêà èëè 20 ìì ïðè èñïîëüçîâàíèè ìåõàíè÷åñêîãî ðû÷àãà è êè- ìîãðàôà). ÏÐÈÃÎÒÎÂËÅÍÈÅ ÐÀÑÒÂÎÐΠÑÐÀÂÍÅÍÈß È ÐÀÇÂÅÄÅÍÈÉ ÈÑÏÛÒÓÅÌÎÃÎ ÎÁÐÀÇÖÀ 1. Ðàñòâîðû ñðàâíåíèÿ  êà÷åñòâå ðàñòâîðîâ ñðàâíåíèÿ èñïîëüçó- þò ðàñòâîðû ãèñòàìèíà äèãèäðîõëîðèäà ÷. èëè ÷.ä.à. â òð¸õ êîíöåíòðàöèÿõ: ðàñòâîð 1 (1,30·10–6 ã/ìë); ðàñòâîð 2 (2,5·10–6 ã/ìë) è ðàñòâîð 3 222 (5,00·10–6 ã/ìë), âûçûâàþùèå 50, 75 è 100 % ñî- êðàùåíèå êèøêè ñîîòâåòñòâåííî.  êà÷åñòâå ðàñòâîðèòåëÿ èñïîëüçóþò 0,9 % ðàñòâîð íàòðèÿ õëîðèäà. Îáú¸ì ââåäåíèÿ ðàñòâîðîâ ñðàâíåíèÿ ñîñòàâëÿåò 1/100 îò îáú¸ìà âàííî÷êè. 2.
Ðàçâåäåíèå èñïûòóåìîãî îáðàçöà Èñïûòàíèþ ïîäâåðãàþò íåðàçâåä¸ííûé èñ- ïûòóåìûé îáðàçåö, êîãäà ìàêñèìàëüíî äîïóñòè- ìàÿ íîðìàòèâíûì äîêóìåíòîì ïî êà÷åñòâó êîí- öåíòðàöèÿ ãèñòàìèíà â íåðàçâåä¸ííîì ïðåïàðà- òå íàõîäèòñÿ â äèàïàçîíå îò 1,30·10–6 ã/ìë äî 2,50·10–6 ã/ìë â ïåðåñ÷¸òå íà ãèñòàìèíà äèãèä- ðîõëîðèä. Îáú¸ì ââåäåíèÿ èñïûòóåìîãî îáðàç- öà äîëæåí ñîñòàâëÿòü 1/100 îò îáú¸ìà âàííî÷êè. Åñëè çíà÷åíèå ìàêñèìàëüíî äîïóñòèìîé êîíöåíòðàöèè ãèñòàìèíà â ïåðåñ÷¸òå íà ãèñòà- ìèíà äèãèäðîõëîðèä â íåðàçâåä¸ííîì èñïûòóå- ìîì îáðàçöå, ìåíüøå óêàçàííîãî äèàïàçîíà èëè áëèçêî ê åãî íèæíåìó ïðåäåëó, äîïóñòèìî óâå- ëè÷åíèå îáú¸ìà ââåäåíèÿ íåðàçâåä¸ííîãî èñïû- òóåìîãî îáðàçöà äî 1/20 îò îáú¸ìà âàííî÷êè. Åñëè ìàêñèìàëüíî äîïóñòèìàÿ êîíöåíòðà- öèÿ ãèñòàìèíà â ïåðåñ÷¸òå íà ãèñòàìèíà äèãèä- ðîõëîðèä â íåðàçâåä¸ííîì èñïûòóåìîì îáðàçöå íàõîäèòñÿ âûøå óêàçàííîãî äèàïàçîíà, èñïû- òóåìûé îáðàçåö ðàçâîäÿò 0,9 % ðàñòâîðîì íà- òðèÿ õëîðèäà äî ïðåäïîëàãàåìîé êîíöåíòðàöèè ãèñòàìèíà äèãèäðîõëîðèäà 2,50·10–6 ã/ìë (îáú- ¸ì ââåäåíèÿ 1/100 îò îáú¸ìà âàííî÷êè). ÐÅÃÈÑÒÐÈÐÓÞÙÀß ÑÈÑÒÅÌÀ Äëÿ ðåãèñòðàöèè ñîêðàùåíèé èçîëèðîâàí- íîãî îòðåçêà ïîäâçäîøíîé êèøêè ìîðñêîé ñâèíêè â èçîòîíè÷åñêèõ óñëîâèÿõ â îòâåò íà ââåäåíèå ðàñòâîðîâ ñðàâíåíèÿ è èñïûòóåìîãî îáðàçöà èñïîëüçóþò ðåãèñòðèðóþùóþ ñèñòåìó, ñîñòîÿùóþ èç òåðìîñòàòèðóåìîé âàííî÷êè ñ ãè- ïîêàëüöèåâûì ðàñòâîðîì Òèðîäå ïðè òåìïåðà- òóðå 34 – 36 °Ñ, à òàêæå ýëåêòðîííîãî äàò÷èêà ñ ðåãèñòðèðóþùèì óñòðîéñòâîì èëè ìåõàíè÷å- ñêîãî ðû÷àãà ñ êèìîãðàôîì. Âàííî÷êó àýðèðóþò êàðáîãåíîì (95 % Î2 è 5 % ÑÎ2) èëè âîçäóõîì. Íàãðóçêà îáû÷íî ñîñòàâëÿåò 500 – 800 ìã.  ñëó÷àå èñïîëüçîâàíèÿ ìåõàíè÷åñêîãî ðû÷àãà äëÿ âû÷èñëåíèÿ íàãðóçêè ñëåäóåò ïðèìåíÿòü ïðàâèëî ðàâíîâåñèÿ: ñèëà ´ ïëå÷î ñèëû = íàãðóçêà ´ ïëå÷î íàãðóçêè. ÏÐÎÂÅÄÅÍÈÅ ÎÏÛÒÀ Èçîëèðîâàííûé îòðåçîê ïîäâçäîøíîé êèø- êè ïîìåùàþò â âàííî÷êó è ïðèêðåïëÿþò ê ðåãè- ñòðèðóþùåé ñèñòåìå ñ ïîìîùüþ ëèãàòóðû ïî äèàãîíàëè çà ïðîòèâîïîëîæíûå êîíöû: îäèí — ê êðþ÷êó íà äíå âàííî÷êè, à äðóãîé — ê äàò÷èêó èëè ðû÷àãó. Ïðèêëàäûâàþò ê îòðåçêó íàãðóçêó è îñòàâëÿþò åãî â ïîêîå íà 30 ìèí. Çà ýòî âðåìÿ íåîáõîäèìî íå ìåíåå 3 ðàç ñìåíèòü â âàííî÷êå ãèïîêàëüöèåâûé ðàñòâîð Òèðîäå. 1. Àäàïòàöèÿ èçîëèðîâàííîãî îòðåçêà ïîäâçäîøíîé êèøêè ìîðñêîé ñâèíêè ê ñóáìàêñèìàëüíîé äîçå ãèñòàìèíà  òåðìîñòàòèðóåìóþ âàííî÷êó ââîäÿò ðàñ- òâîð 3 â îáú¸ìå, ðàâíîì 1/100 îò å¸ ¸ìêîñòè. ×åðåç 30 ñ (âðåìÿ ýêñïîçèöèè) âàííî÷êó ïðîìû- âàþò òðîéíûì îáú¸ìîì ãèïîêàëüöèåâîãî ðàñ- òâîðà Òèðîäå. Ïîñëå ïåðâîãî îòìûâàíèÿ ïðîâî- äÿò âòîðîå òàêèì æå îáú¸ìîì ðàñòâîðà. Íå ìå- íåå ÷åì ÷åðåç 4 ìèí ïîñëå ïåðâîãî ââåäåíèÿ ñíîâà ïîâòîðÿþò öèêë «ââåäåíèå – ýêñïîçè- öèÿ – äâà îòìûâàíèÿ». Ýòè öèêëû ïîâòîðÿþò äî òåõ ïîð, ïîêà íå ïîëó÷àò íå ìåíåå äâóõ îäèíàêî- âûõ ïèêîâ. Èõ âûñîòó ïðèíèìàþò çà 100 % (ïðèìå÷àíèå 3). Âðåìåííûå èíòåðâàëû ìåæäó ââåäåíèÿìè èñïûòóåìîãî âåùåñòâà è ìåæäó äâóìÿ îòìûâàíèÿìè äîëæíû áûòü ïîñòîÿííû- ìè. 2. Èñïûòàíèå èñïûòóåìîãî îáðàçöà íà ãèñòàìèí 2.0. Ïðåäâàðèòåëüíîå èñïûòàíèå Ïîñëå äîñòèæåíèÿ ïîñòîÿííîé âåëè÷èíû îòâåòà îòðåçêà êèøêè íà ââåäåíèå ðàñòâîðà 3 ïðîâîäÿò èñïûòàíèå èñïûòóåìîãî îáðàçöà íà ãèñòàìèí. Äëÿ ýòîãî ñ èíòåðâàëîì íå ìåíåå 4 ìèí îäíîêðàòíî â ñëó÷àéíîì ïîðÿäêå ââîäÿò ðàñòâîðû 1 è 3, è íåðàçâåäåííûé èñïûòóåìûé îáðàçåö. Öèêëû «ââåäåíèå – ýêñïîçèöèÿ – äâà îòìûâàíèÿ» òàêèå æå, êàê è ïðè ïðîâåäåíèè àäàïòàöèè îðãàíà ê ñóáìàêñèìàëüíîé äîçå.  ñëó÷àå, åñëè ïèê, ïîëó÷åííûé â îòâåò íà ââåäåíèå èñïûòóåìîãî îáðàçöà, ïî âûñîòå íå ìåíüøå, ÷åì ïèê ðàñòâîðà 1, ïðîâîäÿò êîëè÷å- ñòâåííîå îïðåäåëåíèå ñîäåðæàíèÿ ãèñòàìèíà â èñïûòóåìîì îáðàçöå (ñì. ï. 2.1).
Åñëè ïèê, ïî- ëó÷åííûé â îòâåò íà ââåäåíèå èñïûòóåìîãî îá- ðàçöà, ìåíüøå ïèêà ðàñòâîðà 1 èëè âîîáùå îò- ñóòñòâóåò, ïðîâîäÿò êîíòðîëüíîå èñïûòàíèå (ñì. ï. 2.2). 2.1. Êîëè÷åñòâåííîå èñïûòàíèå èñïûòóåìîãî îáðàçöà íà ãèñòàìèí  ñëó÷àéíîì ïîðÿäêå ïîî÷åð¸äíî ââîäÿò ðàñòâîðû 1 è 3 (1/100 îò îáú¸ìà âàííî÷êè), è ðàçâåä¸ííûé èëè íåðàçâåä¸ííûé èñïûòóåìûé îáðàçåö (òîò æå îáú¸ì ââåäåíèÿ, ÷òî è ïðè ïðåä- âàðèòåëüíîì èñïûòàíèè) äî ïîëó÷åíèÿ íå ìåíåå 223 òð¸õ ïèêîâ â îòâåò íà ââåäåíèå êàæäîãî ðàñòâî- ðà. Íàõîäÿò ñðåäíåå çíà÷åíèå îòâåòà îòðåçêà êèøêè íà êàæäûé ðàñòâîð. Ñ ïîìîùüþ ðåãðåñ- ñèîííîãî àíàëèçà âû÷èñëÿþò ïàðàìåòðû ëèíåé- íîé çàâèñèìîñòè ñðåäíåãî îòâåòà êèøêè íà ââå- äåíèå ðàñòâîðîâ ñðàâíåíèÿ îò ëîãàðèôìà èõ êîíöåíòðàöèè. Çàòåì, ïîäñòàâëÿÿ ïîëó÷åííûå çíà÷åíèÿ ýòèõ ïàðàìåòðîâ â óðàâíåíèå ðåãðåñ- ñèè, âû÷èñëÿþò êîíöåíòðàöèþ ãèñòàìèíà â òîì ðàçâåäåíèè èñïûòóåìîãî îáðàçöà, êîòîðîìó ñî- îòâåòñòâóåò ñðåäíÿÿ âûñîòà åãî ïèêà, è èñõîäÿ èç ýòîãî, ðàññ÷èòûâàþò ñîäåðæàíèå ãèñòàìèíà â íåðàçâåä¸ííîì èñïûòóåìîì îáðàçöå. Èñïûòóåìûé îáðàçåö ñ÷èòàþò ïðîøåäøèì èñïûòàíèå, åñëè íàéäåííîå ñîäåðæàíèå ãèñòà- ìèíà íå ïðåâûøàåò ìàêñèìàëüíî äîïóñòèìîå, óêàçàííîå â íîðìàòèâíîì äîêóìåíòå ïî êà÷åñò- âó (êîýôôèöèåíò ïåðåñ÷¸òà ãèñòàìèíà äèãèäðî- õëîðèäà íà ãèñòàìèí-îñíîâàíèå ðàâåí 0,6038). 2.2. Êîíòðîëüíîå èñïûòàíèå Ñõåìà ïðîâåäåíèÿ êîíòðîëüíîãî èñïûòàíèÿ òàêàÿ æå, êàê è ïðè êîëè÷åñòâåííîì îïðåäåëå- íèè ñîäåðæàíèÿ ãèñòàìèíà â èñïûòóåìîì îá- ðàçöå, òîëüêî âìåñòî èñïûòóåìîãî îáðàçöà èñ- ïîëüçóþò ðàñòâîð 2 (1/100 îò îáú¸ìà âàííî÷êè). Åñëè ñðåäíÿÿ âûñîòà åãî ïèêà ñîîòâåòñòâóåò ââîäèìîé êîíöåíòðàöèè ãèñòàìèíà äèãèäðîõëî- ðèäà â äàííîì ðàñòâîðå (2,50·10–6 ã/ìë), òî ðå- çóëüòàòû îïûòà ñëåäóåò ïðèçíàòü äîñòîâåðíû- ìè. Ðåçóëüòàòû îïûòà ñëåäóåò ïðèçíàòü íåäîñòî- âåðíûìè â êàæäîì èç ñëåäóþùèõ ñëó÷àåâ: Åñëè ñðåäíÿÿ âûñîòà ïèêà ðàñòâîðà 2 íå ñî- îòâåòñòâóåò ââîäèìîé êîíöåíòðàöèè ãèñòàìèíà äèãèäðîõëîðèäà â äàííîì ðàñòâîðå (2,50·10–6 ã/ìë). Åñëè ïðè êîëè÷åñòâåííîì îïðåäåëåíèè ñî- äåðæàíèÿ ãèñòàìèíà â èñïûòóåìîì îáðàçöå îò- ñóòñòâóåò âîñïðîèçâîäèìîñòü îòâåòîâ îòðåçêà êèøêè íà ââåäåíèå èñïûòóåìîãî îáðàçöà. Åñëè â ïðîöåññå ýêñïåðèìåíòà íàáëþäàåòñÿ çíà÷èòåëüíîå ñíèæåíèå âûñîòû ïèêîâ.  êàæäîì èç ýòèõ 3 ñëó÷àåâ ñëåäóåò ïðîâåñ- òè èñïûòàíèå èñïûòóåìîãî îáðàçöà íà âåùåñòâà äåïðåññîðíîãî äåéñòâèÿ â ñîîòâåòñòâèè ñ ÎÔÑ «Èñïûòàíèå íà äåïðåññîðíûå âåùåñòâà». Ïðèìå÷àíèÿ 1. Ãèïîêàëüöèåâûé ðàñòâîð Òèðîäå. Ñîñòàâ: l Íàòðèÿ õëîðèä 80,00 ã l Íàòðèÿ ãèäðîêàðáîíàò 10,00 ã l D-ãëþêîçà 11,00 ã l Êàëèÿ õëîðèä 2,00 ã l Êàëüöèÿ õëîðèä äèãèäðàò 1,30 ã l Ìàãíèÿ õëîðèä ãåêñàãèäðàò 2,10 ã l Íàòðèÿ äèãèäðîôîñôàò ìîíîãèäðàò 0,58 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ äî 10 ë Ïðèãîòîâëåíèå  ìåðíîì öèëèíäðå âìåñòèìîñòüþ 1 ë ðàñ- òâîðÿþò â âîäå î÷èùåííîé íàâåñêè íàòðèÿ õëî- ðèäà, íàòðèÿ ãèäðîêàðáîíàòà è D-ãëþêîçû â ëþ- áîì ïîðÿäêå. Äîâîäÿò îáú¸ì ðàñòâîðà òåì æå ðàñòâîðèòåëåì äî ìåòêè, ïåðåìåøèâàþò è ïåðå- ëèâàþò ñîäåðæèìîå öèëèíäðà â 10-ëèòðîâóþ ñòåêëÿííóþ åìêîñòü ñ ïðèò¸ðòîé ïðîáêîé èëè ïîëèýòèëåíîâûé ñîñóä òîãî æå îáúåìà ñ çàâèí- ÷èâàþùåéñÿ êðûøêîé. Òàêèì æå îáðàçîì, íî ïî îòäåëüíîñòè, êàæ- äóþ èç îñòàâøèõñÿ íàâåñîê ðàñòâîðÿþò â 1 ë âîäû î÷èùåííîé è ïî î÷åðåäè ïåðåíîñÿò â òîò æå 10-ëèòðîâûé ñîñóä, ñòðîãî ïðèäåðæèâàÿñü ñëåäóþùåãî ïîðÿäêà: 1) êàëèÿ õëîðèä 2) êàëüöèÿ õëîðèä 3) ìàãíèÿ õëîðèä 4) íàòðèÿ äèãèäðîôîñôàò. Çàòåì äîëèâàþò âîäó î÷èùåííóþ äî îòìåò- êè 10 ë è âíîâü òùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò. Ïîëó÷åííûé ðàñòâîð ìîæåò õðàíèòüñÿ ïðè òåìïåðàòóðå îò 3 °Ñ äî 5 °Ñ íå áîëåå 24 ÷. Ïî- ìóòíåíèå íåäîïóñòèìî. Ïîìóòíåâøèé ðàñòâîð ñëåäóåò âûëèòü, òùà- òåëüíî ïðîìûòü ñîñóä â ïðîòî÷íîé âîäå è ïðî- ïîëîñêàòü âîäîé î÷èùåííîé.
Ïîâåðõíîñòíî àê- òèâíûå ìîþùèå ñðåäñòâà ïðèìåíÿòü íåëüçÿ.  êà÷åñòâå äîïîëíèòåëüíîé ìåðû ïî ïðåäó- ïðåæäåíèþ ñïîíòàííîé àêòèâíîñòè èçîëèðî- âàííîãî îðãàíà, â ñîñòàâ ðàñòâîðà ìîæíî äîáà- âèòü àòðîïèíà ñóëüôàò â êîíöåíòðàöèè 0,5 ìã/ë. 2. Ñîñóä, â êîòîðîì íàõîäÿòñÿ îòðåçêè ïîä- âçäîøíîé êèøêè ïðè õðàíåíèè, ïëîòíî íå çà- êðûâàþò, à çàòÿãèâàþò äâîéíûì ñëîåì ìàðëè, ÷òîáû îáåñïå÷èòü äîñòóï âîçäóõà. Ïåðåä èñ- ïîëüçîâàíèåì â îïûòå îòðåçêè ñëåäóåò ïîäãîòî- âèòü. Äëÿ ýòîãî ñîñóä â òå÷åíèå 10 ìèí äåðæàò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå, à çàòåì â òå÷åíèå 20 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 34 – 36 °Ñ â òåðìîñòà- òå. Ïîñëå íàãðåâàíèÿ èç îòðåçêà ñëåäóåò óäà- ëèòü ñëèçü. Ýòî äîñòèãàåòñÿ ë¸ãêèìè ïîãëàæè- âàþùèìè äâèæåíèÿìè â ïðîäîëüíîì íàïðàâëå- íèè. 3. Ñòðóÿ ââîäèìîãî ðàñòâîðà äîëæíà áûòü íàïðàâëåíà íå ïðÿìî íà èçîëèðîâàííûé îòðåçîê êèøêè, à â ñòîðîíó ñòåíêè âàííî÷êè, ïðè÷¸ì íà- 224 ïðàâëåíèå ñòðóè íå äîëæíî ìåíÿòüñÿ. Ñêîðîñòü ââåäåíèÿ äîëæíà áûòü ìàêñèìàëüíî âûñîêîé è ïîñòîÿííîé. Ðåãèñòðàöèþ ñîêðàùåíèé ïðîâîäÿò íåïðå- ðûâíî (ñêîðîñòü ëåíòû 2 ìì/ìèí).  ñëó÷àå èñïîëüçîâàíèÿ ìåõàíè÷å- ñêîãî ðû÷àãà è êèìîãðàôà ïèñ÷èê âî âðåìÿ îò- ìûâàíèÿ ìîæíî îòâîäèòü è ïðåêðàùàòü çàïèñü. 201060005-2019 2.1.6.5. Èñïûòàíèå íà äåïðåññîðíûå âåùåñòâà Íàñòîÿùàÿ îáùàÿ ôàðìàêîïåéíàÿ ñòàòüÿ ðàñïðîñòðàíÿåòñÿ íà îïðåäåëåíèå âåùåñòâ äå- ïðåññîðíîãî äåéñòâèÿ in vivo â èíúåêöèîííûõ ïðåïàðàòàõ äëÿ âíóòðèñîñóäèñòîãî ââåäåíèÿ è ôàðìàöåâòè÷åñêèõ ñóáñòàíöèÿõ, èç êîòîðûõ èõ ïðîèçâîäÿò. Èñïûòàíèå ïðîâîäÿò íà íàðêîòèçèðîâàííûõ çäîðîâûõ êîøêàõ ëþáîãî ïîëà ìàññîé íå ìåíåå 2 êã. Ñàìêè íå äîëæíû áûòü áåðåìåííûìè èëè ëàêòèðóþùèìè. Çà 24 ÷ äî èñïûòàíèÿ æèâîòíîå ëèøàþò êîðìà, íî îñòàâëÿþò ñâîáîäíûé äîñòóï ê âîäå. Àíåñòåçèþ ïðîâîäÿò ñ èñïîëüçîâàíèåì ëþáîãî ñðåäñòâà äëÿ íàðêîçà, ïîçâîëÿþùåãî ïîääåðæèâàòü ñòàáèëüíûé óðîâåíü àðòåðèàëü- íîãî äàâëåíèÿ, íàïðèìåð ñìåñü õëîðàëîçû è óðåòàíà. Ó æèâîòíîãî ïîääåðæèâàþò òåìïåðà- òóðó òåëà â ôèçèîëîãè÷åñêèõ ïðåäåëàõ. Êîøêó ôèêñèðóþò â ñòàíêå â ïîëîæåíèè íà ñïèíå. Ïðåïàðèðóþò ñîííóþ àðòåðèþ.  îòïðå- ïàðèðîâàííóþ ñîííóþ àðòåðèþ, âñòàâëÿþò êà- íþëþ, çàïîëíåííóþ ðàñòâîðîì, ïðåäóïðåæäàþ- ùèì ñâåðòûâàíèå êðîâè. Íàïðèìåð, 50 ÅÄ ãåïà- ðèíà â 1 ìë ðàñòâîðà õëîðèäà íàòðèÿ ñ êîíöåíòðàöèåé 9 ã/ë èëè ðàñòâîðà ìàãíèÿ ñóëü- ôàòà êîíöåíòðàöèåé 250 ã/ë. Êàíþëþ ïðèñîåäè- íÿþò ê ñèñòåìå, îáåñïå÷èâàþùåé ïîñòîÿííóþ ðåãèñòðàöèþ àðòåðèàëüíîãî äàâëåíèÿ.  áåä- ðåííóþ âåíó âñòàâëÿþò âòîðóþ êàíþëþ èëè èãëó, íàïîëíåííóþ îäíèì èç âûøåïåðå÷èñëåí- íûõ àíòèêîàãóëÿíòîâ, ÷åðåç êîòîðóþ ââîäÿò ðàñòâîð ãèñòàìèíà äèãèäðîõëîðèäà (ðàñòâîð ãèñòàìèíà Ð â âàðèàíòå 1, ðàñòâîð ñðàâíåíèÿ — â âàðèàíòå 2) è ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî. Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ðàñòâîðà ãèñòàìèíà Ð èëè ðàñòâîðà ñðàâíåíèÿ èñïîëüçóþò ãèñòàìèíà äèãèäðîõëîðèä â ïåðåñ÷åòå íà ãèñòàìèí - îñíî- âàíèå (êîýôôèöèåíò ïåðåñ÷åòà ãèñòàìèíà äè- ãèäðîõëîðèäà íà ãèñòàìèí îñíîâàíèå ðàâåí 0,6038). Êâàëèôèêàöèÿ ãèñòàìèíà äèãèäðîõëî- ðèäà — ÷. èëè ÷.ä.à. Îïðåäåëåíèå äåïðåññîðíûõ âåùåñòâ âîç- ìîæíî îäíèì èç äâóõ âàðèàíòîâ. ÂÀÐÈÀÍÒ 1 Ïåðåä ïðîâåäåíèåì èñïûòàíèÿ ãîòîâÿò ðàñ- òâîð èñïûòóåìîãî îáðàçöà ëåêàðñòâåííîãî ñðåä- ñòâà, êîòîðûé ðàñòâîðÿþò èëè ðàçâîäÿò â ðàñ- òâîðå íàòðèÿ õëîðèäà ñ êîíöåíòðàöèåé 9 ã/ë èëè â äðóãîì ðàñòâîðèòåëå, óêàçàííîì â ÷àñòíîé ñòàòüå, è âçÿòîì â êîëè÷åñòâå, äîñòàòî÷íîì äëÿ ïîëó÷åíèÿ íåîáõîäèìîé êîíöåíòðàöèè. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ÷óâñòâèòåëüíîñòè êîøêè ê ãèñòàìèíó ãîòîâÿò ðàñòâîð ãèñòàìèíà Ð ñ êîí- öåíòðàöèåé 0,1 ìêã/ìë. Çàòåì æèâîòíîìó ÷åðåç ðàâíûå ïðîìåæóòêè âðåìåíè ââîäÿò ðàñòâîð ãèñòàìèíà Ð â îáúåìå 1,0 ìë è 1,5 ìë íà êã ìàñ- ñû òåëà. Ââåäåíèå ðàñòâîðà ãèñòàìèíà Ð â îáúåìå 1 ìë/êã ïîâòîðÿþò íå ìåíåå òðåõ ðàç.
Âòîðóþ è ïîñëåäóþùèå èíúåêöèè äàííîãî ðàñòâîðà ïðî- âîäÿò íå ðàíåå, ÷åì ÷åðåç îäíó ìèíóòó ïîñëå òîãî, êàê àðòåðèàëüíîå äàâëåíèå âåðíåòñÿ ê óðîâíþ, íàáëþäàâøåìóñÿ íåïîñðåäñòâåííî ïå- ðåä ïðåäûäóùåé èíúåêöèåé. Æèâîòíîå èñïîëü- çóþò â èñïûòàíèè â ñëó÷àå, åñëè ïðè ïîâòîðíûõ ââåäåíèÿõ ðàñòâîðà ãèñòàìèíà Ð â îáúåìå 1 ìë/êã ðåãèñòðèðóþò áëèçêèå çíà÷åíèÿ ñíèæå- íèÿ àðòåðèàëüíîãî äàâëåíèÿ, à ïðè ââåäåíèè ðàñòâîðà ãèñòàìèíà Ð â îáúåìå 1,5 ìë/êã — áî- ëåå âûðàæåííóþ ðåàêöèþ. Âûïîëíÿþò äâà öèêëà ââåäåíèÿ èñïûòóåìî- ãî îáðàçöà è ðàñòâîðà ãèñòàìèíà Ð. Êàæäûé öèêë âêëþ÷àåò ââåäåíèå ðàñòâîðà ãèñòàìèíàì Ð â îáúåìå 1,0 ìë íà êèëîãðàìì, äâóõ ïîñëå- äóþùèõ èíúåêöèé ïðåïàðàòà è çàêàí÷èâàåòñÿ ââåäåíèåì ðàñòâîðà ãèñòàìèíà Ð â îáúåìå 1 ìë/êã. Ðàñòâîð ëåêàðñòâåííîãî ñðåäñòâà ââîäÿò â îáúåìå è êîíöåíòðàöèè, óêàçàííîé â ÷àñòíîé ñòàòüå. Çàâåðøàþò èñïûòàíèå ââåäåíèåì 1,5 ìë ðàñòâîðà ãèñòàìèíà Ð/êã ìàññû òåëà. Ðåçóëüòàòû èñïûòàíèÿ ïðèçíàþò íåäîñòî- âåðíûìè, åñëè ðåàêöèÿ àðòåðèàëüíîãî äàâëåíèÿ íà ââåäåíèå ðàñòâîðà ãèñòàìèíà Ð â äîçå 1,5 ìë/êã íå ïðåâûøàåò ðåàêöèþ íà ãèñòàìèí â äîçå 1,0 ìë/êã. Ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî íå âû- äåðæèâàåò èñïûòàíèå, åñëè: – ñðåäíåå çíà÷åíèå ðåàêöèè àðòåðèàëüíîãî äàâëåíèÿ íà åãî ââåäåíèå ïðåâûøàåò ñðåäíåå çíà÷åíèå ðåàêöèè íà ââåäåíèå ðàñòâîðà ãèñòà- ìèíà Ð â äîçå 1,0 ìë/êã; 225 – ââåäåíèå èñïûòóåìîãî îáðàçöà âûçûâàåò áîëåå ñèëüíóþ äåïðåññîðíóþ ðåàêöèþ, ÷åì îò- âåò íà ðàñòâîð ãèñòàìèíà Ð â äîçå 1,5 ìë/êã. Æèâîòíîå íå ñëåäóåò èñïîëüçîâàòü â äàëü- íåéøåì â ñëó÷àå: – åñëè ëþáàÿ èç èñïûòóåìûõ äîç ðàñòâîðà ãèñòàìèíà Ð (1,0 ìë/êã), âûçûâàåò áîëåå âûðà- æåííóþ äåïðåññîðíóþ ðåàêöèþ, ÷åì çàâåðøàþ- ùàÿ äîçà ðàñòâîðà ãèñòàìèíà Ð (1,5 ìë/êã). – åñëè îòâåò íà ââåäåíèå ðàñòâîðà ãèñòà- ìèíà Ð â äîçå 1,5 ìë/êã, ïîñëå èñïûòóåìîãî îá- ðàçöà, ìåíüøå, ÷åì ñðåäíèé îòâåò íà èíúåêöèþ ðàñòâîðà ãèñòàìèíà Ð â äîçå 1,0 ìë/êã. ÂÀÐÈÀÍÒ 2 Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ðàñòâîðîâ ñðàâíåíèÿ è ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ èñïîëüçóþò â îñíîâíîì, 0,9 % ðàñòâîð íàòðèÿ õëîðèäà äëÿ èíúåêöèé èëè âîäó äëÿ èíúåêöèé. Êîíöåíòðàöèÿ ðàñòâîðîâ ñðàâíåíèÿ â ïåðåñ÷¸òå íà ãèñòàìèí-îñíîâàíèå äîëæíà ñîñòàâëÿòü 0,5 ìêã/ìë (ðàñòâîð 1) è 1,0 ìêã/ìë (ðàñòâîð 2). Ââåäåíèå ðàñòâîðîâ íà ïðîòÿæåíèè âñåãî èñïûòàíèÿ ïðîâîäÿò ñî ñêîðîñòüþ 0,1 ìë â ñå- êóíäó è èíòåðâàëîì ìåæäó ââåäåíèÿìè íå ìå- íåå 5 ìèí.  íà÷àëå îïûòà ïðîâåðÿþò ÷óâñòâèòåëü- íîñòü æèâîòíîãî ê ãèñòàìèíó. Äëÿ ýòîãî â âåíó ïîñëåäîâàòåëüíî ââîäÿò ðàñòâîð 1 è ðàñòâîð 2 â îáú¸ìå 0,2 ìë íà 1 êã ìàññû òåëà êîøêè. Æè- âîòíûõ, ó êîòîðûõ ïðè ââåäåíèè ðàñòâîðà 2 âå- ëè÷èíà àðòåðèàëüíîãî äàâëåíèÿ ñíèçèòñÿ ìåíåå ÷åì íà 20 ìì ðò.ñò., èç îïûòà èñêëþ÷àþò. Ðàñ- òâîð 1 ââîäÿò äâàæäû, ÷òîáû ïîäòâåðäèòü ñòà- áèëüíîñòü ðåàêöèè àðòåðèàëüíîãî äàâëåíèÿ êîøêè íà ãèñòàìèí. Äàëåå êîøêå îäíîêðàòíî ââîäÿò ðàñòâîð ëå- êàðñòâåííîãî ñðåäñòâà, â îáúåìå è êîíöåíòðà- öèè, êîòîðûå óêàçàíû â ÷àñòíîé ñòàòüå. Ïðè àíàëèçå íà îäíîì æèâîòíîì äâóõ è áî- ëåå èñïûòóåìûõ îáðàçöîâ ïåðåä êàæäîé èíúåê- öèåé ëåêàðñòâåííîãî ñðåäñòâà, íåîáõîäèìî ïðî- âåðÿòü âåëè÷èíó ñíèæåíèÿ àðòåðèàëüíîãî äàâ- ëåíèÿ íà ââåäåíèå ðàñòâîðà 1.  ñëó÷àå çíà÷èòåëüíîãî óìåíüøåíèÿ ðåàêöèè àðòåðèàëü- íîãî äàâëåíèÿ íà ââåäåíèå ðàñòâîðà 1 ïî ñðàâ- íåíèþ ñ âåëè÷èíîé àðòåðèàëüíîãî äàâëåíèÿ, ïîëó÷åííîé ïîñëå åãî ââåäåíèÿ â íà÷àëå èñïû- òàíèÿ, íåîáõîäèìî âíîâü ïðîâåðèòü ÷óâñòâè- òåëüíîñòü æèâîòíîãî ê äåéñòâèþ ðàñòâîðà 2. Åñëè ñíèæåíèå àðòåðèàëüíîãî äàâëåíèÿ ñîñòàâ- ëÿåò íå ìåíåå 20 ìì ðò.ñò., ïðîäîëæàþò ïðîâî- äèòü èñïûòàíèå â ñîîòâåòñòâèè ñ óêàçàííûìè âûøå òðåáîâàíèÿìè.
Ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî ñ÷èòàþò âûäåðæàâ- øèì èñïûòàíèå, åñëè â òå÷åíèå 60 ñ ïîñëå åãî ââåäåíèÿ â èññëåäóåìîé òåñò-äîçå ñíèæåíèå àð- òåðèàëüíîãî äàâëåíèÿ íå ïðåâûøàåò ðåàêöèþ íà ââåäåíèå ðàñòâîðà 1. 201060006-2019 2.1.6.6. Ìèêðîáèîëîãè÷åñêèå èñïûòàíèÿ íåñòåðèëüíûõ ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ: îáùåå êîëè÷åñòâî æèçíåñïîñîáíûõ àýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ 1. ÂÂÅÄÅÍÈÅ Èñïûòàíèå ìèêðîáèîëîãè÷åñêîé ÷èñòîòû ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ (ËÑ) ïðîâîäÿò â àñåïòè- ÷åñêèõ óñëîâèÿõ ïðè ïîìîùè ïðèâåäåííûõ íèæå ìåòîäîâ è ïèòàòåëüíûõ ñðåä. Èñïûòàíèÿ, îïèñàííûå íèæå, âêëþ÷àþò îò- áîð èñïûòóåìûõ îáðàçöîâ äëÿ àíàëèçà, ñïîñîáû ïîäãîòîâêè ðàçëè÷íûõ ëåêàðñòâåííûõ ôîðì, ìåòîäû îïðåäåëåíèÿ àíòèìèêðîáíîãî äåéñòâèÿ ËÑ è êîëè÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ æèçíåñïî- ñîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ. Äëÿ èíêóáàöèè ïîñåâîâ íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ äëÿ áàêòåðèé ñòàíäàðòíîé òåìïåðàòóðîé ÿâëÿåòñÿ (32,5 ± 2,5) °Ñ, äëÿ ãðèáîâ — (22,5 ± 2,5) °Ñ. 2. ÐÀÁÎÒÀ Ñ ÒÅÑÒ-ØÒÀÌÌÀÌÈ ÌÈÊÐÎÎÐÃÀÍÈÇÌΠÄëÿ ïðîâåäåíèÿ èñïûòàíèé (îïðåäåëåíèÿ àíòèìèêðîáíîãî äåéñòâèÿ ËÑ, êà÷åñòâà ïèòà- òåëüíûõ ñðåä, áèîõèìè÷åñêîãî òåñòèðîâàíèÿ âûäåëåííûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ) íåîáõîäèìî èñ- ïîëüçîâàòü òåñò-øòàììû ìèêðîîðãàíèçìîâ (òàáë. 2.1.6.6.-1), äåïîíèðîâàííûå â îôèöèàëü- íûõ êîëëåêöèÿõ, íàïðèìåð: – Ãîñóäàðñòâåííîé êîëëåêöèè ïàòîãåííûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ (ÃÊÏÌ), Ðîññèÿ; – Ðîññèéñêîé êîëëåêöèè ïàòîãåííûõ ãðèáîâ (ÐÊÏÃ), Ðîññèÿ; – Âñåðîññèéñêîé êîëëåêöèè ìèêðîîðãàíèç- ìîâ (ÂÊÌ) ÐÀÍ, Ðîññèÿ; – Àìåðèêàíñêîé êîëëåêöèè òèïîâûõ êóëü- òóð (ÀÒÑÑ), ÑØÀ; – Íàöèîíàëüíîé êîëëåêöèè òèïîâûõ êóëü- òóð (NCTC), Âåëèêîáðèòàíèÿ; – Êîëëåêöèè êóëüòóð èíñòèòóòà Ïàñòåðà (CIP), Ôðàíöèÿ; 226 – Êîëëåêöèè êóëüòóð èíñòèòóòà ãèãèåíû è ýïèäåìèîëîãèè (IHE), ×åõèÿ. Êðîìå ïåðå÷èñëåííûõ â òàáë. 2.6.6.6.-1 òåñò-øòàììîâ ìèêðîîðãàíèçìîâ, âîçìîæíî èñ- ïîëüçîâàíèå è äðóãèõ êóëüòóð, òèïè÷íûõ ïî ìîðôîëîãè÷åñêèì, òèíêòîðèàëüíûì è áèîõèìè- ÷åñêèì ñâîéñòâàì. Íàáîð òåñò-ìèêðîîðãàíèçìîâ ìîæåò áûòü óìåíüøåí èëè óâåëè÷åí â ñëó÷àå íåîáõîäèìî- ñòè. Òåñò-ìèêðîîðãàíèçìû â ëèîôèëèçèðîâàí- íîì âèäå â àìïóëàõ, â ïðîáèðêàõ íà ïîëóæèä- êîì àãàðå õðàíÿò ïðè òåìïåðàòóðå îò 2 äî 8 °Ñ. Êóëüòóðû ìèêðîîðãàíèçìîâ íà äèñêàõ õðàíÿò ïðè òåìïåðàòóðå íå âûøå ìèíóñ 20 °Ñ. Äîïóñêàåòñÿ íå áîëåå 5 ïàññàæåé îò èñõîä- íîé êóëüòóðû. 2-1. ÀÊÒÈÂÀÖÈß ËÈÎÔÈËÈÇÈÐÎÂÀÍÍÛÕ ÒÅÑÒ-ØÒÀÌÌΠÌÈÊÐÎÎÐÃÀÍÈÇÌΠÒåñò-øòàììû ìèêðîîðãàíèçìîâ ëèîôèëèçè- ðîâàííûå, â àìïóëàõ, ïîëó÷àþò èç îôèöèàëü- íûõ êîëëåêöèé ñ ñåðòèôèêàòîì ñîîòâåòñòâèÿ (ïàñïîðòîì øòàììà). Àìïóëû âñêðûâàþò â àñåïòè÷åñêèõ óñëîâè- ÿõ â ñîîòâåòñòâèè ñ èíñòðóêöèåé ïðîèçâîäèòå- ëÿ. Äëÿ âîññòàíîâëåíèÿ æèçíåñïîñîáíîñòè êóëüòóðû íåîáõîäèìî íå ìåíåå 2 ïåðåñåâîâ íà ïèòàòåëüíîé ñðåäå, ñîîòâåòñòâóþùåé áèîëîãè- ÷åñêèì ñâîéñòâàì øòàììà, ïðè èíêóáàöèè â îï- òèìàëüíûõ äëÿ äàííîãî øòàììà òåìïåðàòóðíûõ óñëîâèÿõ. Äëÿ ïîëó÷åíèÿ èçîëèðîâàííûõ êîëî- íèé òåñò-øòàììà ïðîâîäÿò ïåðåñåâ íà ñîîòâåò- ñòâóþùóþ ïëîòíóþ ïèòàòåëüíóþ ñðåäó. Ïîñëå îêîí÷àíèÿ èíêóáàöèè êóëüòóðû èçó- ÷àþò ìîðôîëîãèþ âûðîñøèõ êîëîíèé, ìèêðî- ñêîïèðóþò ìàçêè, îêðàøåííûå ïî Ãðàìó, èçó÷à- þò áèîõèìè÷åñêèå ñâîéñòâà ñ èñïîëüçîâàíèåì òåñò-ñèñòåì, ðàçðåøåííûõ ê èñïîëüçîâàíèþ. Òåñò-øòàìì ìèêðîîðãàíèçìà äîëæåí îáëàäàòü òèïè÷íûìè ìîðôîëîãè÷åñêèìè, òèíêòîðèàëü- íûìè, áèîõèìè÷åñêèìè ñâîéñòâàìè â ñîîòâåò- ñòâèè ñ ïðåäñòàâëåííûìè ñåðòèôèêàòàìè êîë- ëåêöèè. Ïîñëå ïîäòâåðæäåíèÿ ñâîéñòâ òåñò-øòàììà êóëüòóðó ïåðåñåâàþò íà ñîîòâåòñòâóþùóþ ïè- òàòåëüíóþ ñðåäó (ïåðâûé ïàññàæ) è èíêóáèðó- þò â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ. Äëÿ ïîëó÷åíèÿ êîíèäèé A. brasiliensis êóëü- òóðó âûðàùèâàþò íà àãàðå Ñàáóðî ñ ãëþêîçîé (èëè ñðåäå ¹ 2) â òå÷åíèå 5 – 7 ñóò â ñòàíäàðò- íûõ óñëîâèÿõ. 2-2.
ÀÊÒÈÂÀÖÈß ÒÅÑÒ-ØÒÀÌÌΠÌÈÊÐÎÎÐÃÀÍÈÇÌÎÂ, ÕÐÀÍßÙÈÕÑß ÍÀ ÄÈÑÊÀÕ Äèñê ïîìåùàþò â æèäêóþ ïèòàòåëüíóþ ñðå- äó, ñîîòâåòñòâóþùóþ ïîòðåáíîñòÿì äàííîãî 227 Òàáëèöà 2.1.6.6.-1. — Òåñò-øòàììû ìèêðîîðãàíèçìîâ, èñïîëüçóåìûõ â èñïûòàíèÿõ Íàçâàíèå ìèêðîîðãàíèçìà Íîìåð øòàììà Bacillus subtilis ÃÊÏÌ 010011, ATCC 6633, NCTC 10400, DSM 347, CIP 52.62, NCIMB 8054, NBRC 3134 Bacillus cereus ÃÊÏÌ 010014, ÀÒÑÑ 10702, NCTC 8035, DSM 487 Escherichia coli ÃÊÏÌ 240533, ATCC 25922, ÀÒÑÑ 8739, NCTC 12923, NCTC 12241, DSM1103, NCIMB 8545, CIP 53.126, NBRC 3972 Salmonella enterica subsp. enterica serovar àbony (ïðåæíåå íàçâàíèå Salmonella àbony ) ÃÊÏÌ 100329, ATCC 14028, IHE* 103/39, NCTC 6017, CIP 80.39, NBRC 100797 Pseudomonas aeruginosa ÃÊÏÌ 190155, ATÑÑ 9027, NCTC 12924, NCIMB 8626, CIP 82.118, NBRC 13275, ÃÈÑÊ 453 Staphylococcus aureus ÃÊÏÌ 201108, ATCC 6538, CIP 4.83, NCTC 10788, NCIMB 9518, NBRC 13276, ÀÒÑÑ 6538 Ð (FDA 209-P) Staphylococcus epidermidis ÃÊÏÌ 202001, ÀÒÑÑ 14990, ÃÊÏÌ 202004, ÀÒÑÑ 12228 Candida albicans ÃÊÏÌ 303903, ÃÊÏÌ 303901, ÐÊÏÃY401/NCTC 885-653, NCPF 3179, ÀÒÑÑ10231, IP 48.72, NBRC 1594 Aspergillus brasiliensis (ïðåæíåå íàçâàíèå Aspergillus niger) ÂÊÌ F-1119, ÀÒÑÑ 9642, ÀÒÑÑ 16404, NCPF2275, IP 1431.83, IMI 149007, NBRC 9455, ÐÊÏÃF106 ìèêðîîðãàíèçìà. Ïîñëå èíêóáàöèè â ñîîòâåòñò- âóþùèõ óñëîâèÿõ ñîâåðøàþò òå æå îïåðàöèè è â òîé æå ïîñëåäîâàòåëüíîñòè, êàê ïðè àêòèâà- öèè ëèîôèëèçèðîâàííîé êóëüòóðû. 2-3. ÕÐÀÍÅÍÈÅ ÒÅÑÒ-ØÒÀÌÌΠ ÃËÓÁÎÊÎÉ ÇÀÌÎÐÎÇÊÅ Õðàíåíèå òåñò-øòàììîâ ìèêðîîðãàíèçìîâ â óñëîâèÿõ ãëóáîêîé çàìîðîçêè îñóùåñòâëÿåòñÿ ïðè òåìïåðàòóðå ìèíóñ (70 ± 5) °Ñ (êðèîñèñòå- ìà). Êðèîñèñòåìà ñîñòîèò èç íàáîðà ïëîòíî çà- êðûòûõ ïðîáèðîê, ñîäåðæàùèõ êåðàìè÷åñêèå áóñû, ïîãðóæåííûõ â ñïåöèôè÷åñêóþ êðèîæèä- êîñòü, è ñâèíöîâîãî êðèîáëîêà ñ ÿ÷åéêàìè. Ðà- áîòó ñ òåñò-øòàììàìè ïðîâîäÿò â ïîëíîì ñîîò- âåòñòâèè ñ ðåêîìåíäàöèÿìè ïðîèçâîäèòåëÿ êðèîñèñòåìû. 3. ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈÅ ÀÍÒÈÌÈÊÐÎÁÍÎÃÎ ÄÅÉÑÒÂÈß Âî èçáåæàíèå íåïðàâèëüíîé îöåíêè ïîëó- ÷åííûõ ðåçóëüòàòîâ ïåðåä èñïûòàíèåì íà ìèê- ðîáèîëîãè÷åñêóþ ÷èñòîòó íåîáõîäèìî îïðåäå- ëèòü âîçìîæíîñòü ïðîÿâëåíèÿ ëåêàðñòâåííûì ñðåäñòâîì àíòèìèêðîáíîãî äåéñòâèÿ â îòíîøå- íèè îïðåäåëåííûõ âèäîâ ìèêðîîðãàíèçìîâ.  îñíîâå ìåòîäà îïðåäåëåíèÿ àíòèìèêðîá- íîãî äåéñòâèÿ ëåæèò ñðàâíåíèå èíòåíñèâíîñòè ðîñòà òåñò-øòàììîâ ìèêðîîðãàíèçìîâ â ïðè- ñóòñòâèè è áåç èñïûòóåìîãî îáðàçöà. 3-1. ÏÐÈÃÎÒÎÂËÅÍÈÅ ÈÍÎÊÓËßÒÀ  çàâèñèìîñòè îò âûáðàííîãî ìåòîäà îïðå- äåëåíèÿ àíòèìèêðîáíîãî äåéñòâèÿ èíîêóëÿò ãî- òîâÿò îäíèì èç ïðèâåäåííûõ íèæå ñïîñîáîâ: 24-÷àñîâûå áóëüîííûå êóëüòóðû áàêòåðèé, âûðàùåííûå íà ñîåâî-êàçåèíîâîì áóëüîíå (ñðå- äå ¹ 8), è 24 – 48-÷àñîâóþ êóëüòóðó C.albicans, âûðàùåííóþ íà æèäêîé ñðåäå Ñàáóðî (ñî- åâî-êàçåèíîâîì áóëüîíå èëè ñðåäå ¹ 8), ðàçâî- äÿò ñòåðèëüíûì 0,9 % ðàñòâîðîì íàòðèÿ õëîðè- äà 1:1000 (B. cereus, C. albicans) è 1:100000 (E. coli, S. abony, P. aeruginosa, S. aureus) äî êîí- öåíòðàöèè îêîëî 104 ÊÎÅ/ìë. 24-÷àñîâûå êóëüòóðû áàêòåðèé, âûðàùåí- íûå íà ñêîøåííîì ñîåâî-êàçåèíîâîì àãàðå (ñðå- äå ¹ 1), è 24 – 48-÷àñîâóþ êóëüòóðó C.albicans, âûðàùåííóþ íà ñêîøåííîì àãàðå Ñàáóðî (ñðåäå ¹ 2), ñìûâàþò ñòåðèëüíûì 0,9 % ðàñòâîðîì íà- òðèÿ õëîðèäà, ñòàíäàðòèçóþò è äåëàþò ðÿä ïî- ñëåäîâàòåëüíûõ ðàçâåäåíèé äî ïîëó÷åíèÿ ñóñ- ïåíçèè ñ îïðåäåëåííîé êîíöåíòðàöèåé. Ïðèãîòîâëåííûå êóëüòóðû èñïîëüçóþò â òå- ÷åíèå 2 ÷àñîâ èëè â òå÷åíèå 24 ÷àñîâ ïðè õðàíå- íèè ïðè òåìïåðàòóðå 2 – 8 °Ñ. Âçâåñü ñïîð B. subtilis òàêæå ðàçâîäÿò äî òðåáóåìîé êîíöåíòðàöèè â çàâèñèìîñòè îò ìå- òîäà. Êóëüòóðó A. brasiliensis ñî ñêîøåííîãî àãàðà Ñàáóðî (ñðåäû ¹ 2) ñìûâàþò 0,9 % ðàñòâîðîì íàòðèÿ õëîðèäà ñ 0,05 % ðàñòâîðîì ïîëèñîðáà- òà-80.
Îïðåäåëÿþò êîëè÷åñòâî êîíèäèé â 1 ìë ñìûâà, èñïîëüçóÿ êàìåðó Ãîðÿåâà èëè ÷àøå÷íûé àãàðîâûé ìåòîä, è ðàçâîäÿò äî òðåáóåìîé êîí- öåíòðàöèè. Äîïóñêàåòñÿ èñïîëüçîâàíèå ãîòîâûõ ê ïðè- ìåíåíèþ êîììåð÷åñêèõ ñèñòåì, ïðåäñòàâëÿþ- ùèõ ñîáîé ñóáñòðàòû, ñîäåðæàùèå îïðåäåëåí- íîå êîëè÷åñòâî ìèêðîáíûõ êëåòîê. 3-2. ÏÎÄÃÎÒÎÂÊÀ ÈÑÏÛÒÓÅÌÎÃÎ ÎÁÐÀÇÖÀ ÄËß ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈß ÀÍÒÈÌÈÊÐÎÁÍÎÃÎ ÄÅÉÑÒÂÈß Ê èñïûòóåìîìó îáðàçöó äîáàâëÿþò ïîäõî- äÿùèé ðàçáàâèòåëü äëÿ ïîëó÷åíèÿ ðàçâåäåíèÿ 1:10.  êà÷åñòâå ðàçáàâèòåëÿ èñïîëüçóþò, êàê ïðàâèëî, ôîñôàòíûé áóôåðíûé ðàñòâîð ñ íà- òðèÿ õëîðèäîì è ïåïòîíîì (ðÍ 7,0), ñîåâî-êà- çåèíîâûé áóëüîí, íåéòðàëèçóþùóþ æèäêîñòü èëè áóôåðíûé ðàñòâîð, ñîäåðæàùèé íå áîëåå 5 % ïîëèñîðáàòà-80. Èç ðàçâåäåíèÿ 1:10 ãîòîâÿò ïîñëåäîâàòåëüíûå ðàçâåäåíèÿ 1:50, 1:100, 1:500, 1:1000 è ò.ä. 3-3. ÌÅÒÎÄÛ ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈß ÀÍÒÈÌÈÊÐÎÁÍÎÃÎ ÄÅÉÑÒÂÈß Îïðåäåëåíèå àíòèìèêðîáíîãî äåéñòâèÿ ËÑ ïðîâîäÿò îäíèì èç îïèñàííûõ íèæå ìåòîäîâ. 3-3-1. Îïðåäåëåíèå àíòèìèêðîáíîãî äåéñòâèÿ â óñëîâèÿõ èñïûòàíèÿ ìèêðîáèîëîãè÷åñêîé ÷èñòîòû Êàæäîå ðàçâåäåíèå èñïûòóåìîãî îáðàçöà â êîëè÷åñòâå 1 ìë âíîñÿò â 6 ÷àøåê Ïåòðè äèà- ìåòðîì 90 ìì, â äâå èç êîòîðûõ ïðèáàâëÿþò ïî 0,2 ìë âçâåñè áóëüîííîé êóëüòóðû B. cereus (èëè ñïîð B. subtilis), â äâå äðóãèå — ïî 0,2 ìë ðàáî- ÷åé âçâåñè áóëüîííîé êóëüòóðû C. albicans, â äâå ïîñëåäíèå — 0,2 ìë âçâåñè êîíèäèé A. bra- siliensis. ×àøêè ñ áàêòåðèÿìè çàëèâàþò 10 – 15 ìë ðàñïëàâëåííîãî è îõëàæäåííîãî äî (42,5 ± 2,5) °Ñ ñîåâî-êàçåèíîâîãî àãàðà (ñðåäû ¹ 1), ÷àøêè ñ êóëüòóðàìè ãðèáîâ — òåì æå êî- ëè÷åñòâîì àãàðà Ñàáóðî (ñðåäû ¹ 2). 228 Ïî 1,0 ìë êàæäîãî ðàçâåäåíèÿ èñïûòóåìîãî îáðàçöà âíîñÿò â ïðîáèðêè ñ 10 ìë æèäêèõ ñðåä — áóëüîíà Ìîññåëÿ è ñîåâî-êàçåèíîâîãî áóëüîíà (èëè àíàëîãè÷íûõ – ñðåäà ¹ 3 è ñðåäà ¹ 8). Çàòåì ïî 1 ìë âçâåñè òåñò-øòàììîâ, âûðà- ùåííûõ íà æèäêîé ïèòàòåëüíîé ñðåäå, E. coli, S. àbony, P. aeruginosa, S. aureus (êàæäûé øòàìì îòäåëüíî) âíîñÿò â ïðîáèðêó ñî ñðåäîé, ñîîò- âåòñòâóþùåé ïîòðåáíîñòÿì ìèêðîîðãàíèçìà.  êîíòðîëüíûå ÷àøêè è ïðîáèðêè âìåñòî ðàçâåäåíèé èñïûòóåìîãî îáðàçöà âíîñÿò òàêîå æå êîëè÷åñòâî ðàñòâîðèòåëÿ. Ïîñåâû èíêóáèðóþò â ñòàíäàðòíûõ óñëîâè- ÿõ â òå÷åíèå 48 ÷ äëÿ áàêòåðèé è 5 ñóòîê – äëÿ ãðèáîâ. 3-3-2. Ìåòîä ðåïëèêàöèé Ìåòîä ðåïëèêàöèé ðåêîìåíäóåòñÿ èñïîëüçî- âàòü äëÿ îïðåäåëåíèÿ àíòèìèêðîáíîãî äåéñòâèÿ âîäîíåðàñòâîðèìûõ (ñóñïåíçèè, ýìóëüñèè è äð.) èëè îêðàøåííûõ ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ.  ñòåðèëüíûå ÷àøêè Ïåòðè âíîñÿò ïî 1 ìë êàæäîãî ðàçâåäåíèÿ èñïûòóåìîãî îáðàçöà.  êîíòðîëüíûå ÷àøêè âíîñÿò ïî 1 ìë ðàçáàâèòå- ëÿ, èñïîëüçóåìîãî äëÿ ïîëó÷åíèÿ ðàçâåäåíèé.  ÷àøêè Ïåòðè, êàê â ýêñïåðèìåíòå, òàê è â êîí- òðîëå, äîáàâëÿþò ïî 10 – 15 ìë ðàñïëàâëåííîãî è îõëàæäåííîãî äî òåìïåðàòóðû (42,5 ± 2,5) °Ñ ñîåâî-êàçåèíîâîãî àãàðà (ñðåäû ¹ 1), â äðóãèå — òàêîå æå êîëè÷åñòâî àãàðà Ñàáóðî (ñðåäû ¹ 2) è òùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò. Ïîñëå çàñòûâàíèÿ àãàðà ÷àøêè ïîäñóøèâàþò â òåðìîñòàòå èëè ëà- ìèíàðíîì øêàôó äëÿ óäàëåíèÿ êîíäåíñàòà ñ ïî- âåðõíîñòè ñðåäû, íà êîòîðóþ çàòåì áàêòåðèîëî- ãè÷åñêîé ïåòëåé, ïèïåòêîé èëè ðåïëèêàòîðîì íàíîñÿò ðàáî÷óþ âçâåñü êàæäîãî òåñò-øòàììà áàêòåðèé è ãðèáîâ, ïðèãîòîâëåííûõ èç áóëüîí- íîé êóëüòóðû, â âèäå áëÿøåê. Ïîñåâû íà ñðåäàõ èíêóáèðóþò â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ â òå÷åíèå 48 ÷ äëÿ áàêòåðèé è 5 ñóò – äëÿ ãðèáîâ. 3-3-3. Êîëè÷åñòâåííûé ìåòîä Ê èñïûòóåìîìó îáðàçöó, ïðèãîòîâëåííîìó êàê îïèñàíî âûøå, à òàêæå ê êîíòðîëüíîìó ðàñ- òâîðó (ðàçáàâèòåëü, èñïîëüçóåìûé äëÿ ïîëó÷å- íèÿ ðàçâåäåíèé) äîáàâëÿþò ðàáî÷èå âçâåñè êàæ- äîãî òåñò-øòàììà ìèêðîîðãàíèçìà òàê, ÷òîáû êîíöåíòðàöèÿ êëåòîê â êîíå÷íîì ðàñòâîðå ñî- ñòàâëÿëà íå áîëåå 100 ÊÎÅ. Îáúåì èíîêóëÿòà íå äîëæåí ïðåâûøàòü 1 % îò îáúåìà ðàçâåäåíèÿ îáðàçöà.
Äëÿ îöåíêè ïðèãîäíîñòè ìåòîäîâ îïðåäåëå- íèÿ îáùåãî êîëè÷åñòâà àýðîáíûõ ìèêðîîðãà- íèçìîâ èñïîëüçóþò S. aureus, P. aeruginosa, B. subtilis, C. albicans, A. brasiliensis, îáùåãî êî- ëè÷åñòâà äðîææåâûõ è ïëåñíåâûõ ãðèáîâ — C. albicans, A. brasiliensis. Äëÿ îöåíêè ìåòîäèê îïðåäåëåíèÿ îòäåëüíûõ âèäîâ ïàòîãåííûõ áàê- òåðèé è ãðèáîâ èñïîëüçóþò òåñò-øòàììû, ñîîò- âåòñòâóþùèå èõ íàçíà÷åíèþ.  ñòåðèëüíûå ÷àøêè Ïåòðè âíîñÿò ïî 1 ìë êàæäîé ïðîáû èñïûòóåìîãî îáðàçöà èëè êîí- òðîëüíîãî ðàñòâîðà. Äîáàâëÿþò ïî 10 – 15 ìë ðàñïëàâëåííîãî è îõëàæäåííîãî äî òåìïåðàòó- ðû (42,5 ± 2,5) °Ñ ñîåâî-êàçåèíîâîãî àãàðà (ñðå- äû ¹ 1), â äðóãèå – òàêîå æå êîëè÷åñòâî àãàðà Ñàáóðî (ñðåäû ¹ 2) è òùàòåëüíî ïåðåìåøèâà- þò. Ïîñåâû èíêóáèðóþò â ñòàíäàðòíûõ óñëîâè- ÿõ íå áîëåå 5 ñóò., ïîñëå ÷åãî ñðàâíèâàþò êîëè- ÷åñòâåííûå ðåçóëüòàòû, ïîëó÷åííûå äëÿ èñïû- òóåìîãî îáðàçöà è êîíòðîëüíîãî ðàñòâîðà. Ïðè îöåíêå ïðèìåíèìîñòè ìåòîäèêè îïðå- äåëåíèÿ îòäåëüíûõ âèäîâ ìèêðîîðãàíèçìîâ, âîñïðîèçâîäÿò ñîîòâåòñòâóþùóþ ìåòîäèêó ñ èñïîëüçîâàíèåì èñïûòóåìîãî îáðàçöà è êîí- òðîëüíîãî ðàñòâîðà. 3-4. Ó×ÅÒ È ÈÍÒÅÐÏÐÅÒÀÖÈß ÐÅÇÓËÜÒÀÒΠÀÍÒÈÌÈÊÐÎÁÍÎÃÎ ÄÅÉÑÒÂÈß Ïðè èñïîëüçîâàíèè ìåòîäîâ 3-3-1 è 3-3-2 ïîñëå îêîí÷àíèÿ âðåìåíè èíêóáàöèè ïðîñìàò- ðèâàþò ïîñåâû è îòìå÷àþò ïîÿâëåíèå òèïè÷íî- ãî ðîñòà òåñò-ìèêðîîðãàíèçìîâ â êîíòðîëüíûõ ÷àøêàõ è ïðîáèðêàõ (áåç èñïûòóåìîãî îáðàçöà) è èñïûòóåìûõ (ñ ðàçëè÷íûìè ðàçâåäåíèÿìè èñ- ïûòóåìîãî îáðàçöà).  ñëó÷àÿõ, çàòðóäíÿþùèõ ó÷åò ðåçóëüòàòîâ (ïîìóòíåíèå èëè èçìåíåíèå îêðàñêè æèäêîé ñðåäû â ðåçóëüòàòå âçàèìîäåé- ñòâèÿ ËÑ ñ ïèòàòåëüíîé ñðåäîé), äåëàþò ïåðåñå- âû íà àãàðèçîâàííûå ñðåäû. Ïðè íàëè÷èè ðîñòà E. coli, S. abony, P. aeruginosa, S. àureus íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ äåëàþò âûâîä îá îòñóòñòâèè àíòèìèêðîáíîãî äåéñòâèÿ èñïûòóåìîãî îáðàçöà. Íàëè÷èå â èñïûòóåìûõ ÷àøêàõ è ïðîáèðêàõ ðîñòà òåñò-ìèêðîîðãàíèçìîâ, àíàëîãè÷íîãî êîíòðîëüíûì, îáîçíà÷àþò çíàêîì «+», îòñóòñò- âèå ðîñòà — çíàêîì «–». Åñëè íà ñðåäàõ ñ èñïû- òóåìûì îáðàçöîì íàáëþäàþò óìåíüøåíèå êî- ëè÷åñòâà êîëîíèé íà ÷àøêàõ èëè îòñóòñòâèå ðîñòà òåñò-ìèêðîîðãàíèçìîâ, äåëàþò çàêëþ÷å- íèå î íàëè÷èè ó íåãî àíòèìèêðîáíîãî äåéñòâèÿ. Ïåðâîå èç ïîñëåäîâàòåëüíûõ ðàçâåäåíèé èñïû- 229 òóåìîãî îáðàçöà, â êîòîðîì îòñóòñòâóåò àíòè- ìèêðîáíîå äåéñòâèå, èñïîëüçóþò äëÿ ïîñåâà íà ñîîòâåòñòâóþùóþ ïèòàòåëüíóþ ñðåäó. Ïðè ó÷åòå ðåçóëüòàòîâ, ïîëó÷åííûõ ìåòî- äîì 3-3-3, ñðàâíèâàþò êîëè÷åñòâî êîëîíèé íà ÷àøêàõ ñ èñïûòóåìûì îáðàçöîì è êîíòðîëüíûì ðàñòâîðîì. Ðàçëè÷èå ñðåäíèõ çíà÷åíèé áîëåå ÷åì â äâà ðàçà ñâèäåòåëüñòâóåò î íàëè÷èè àíòè- ìèêðîáíîãî äåéñòâèÿ èñïûòóåìîãî îáðàçöà â èñïîëüçîâàííîì ðàçâåäåíèè. Ðåçóëüòàòû îïðåäåëåíèÿ îòäåëüíûõ âèäîâ ìèêðîîðãàíèçìîâ â èñïûòóåìîì îáðàçöå äîëæ- íû ñîîòâåòñòâîâàòü ðåçóëüòàòàì, ïîëó÷åííûì äëÿ êîíòðîëüíîãî ðàñòâîðà. 3-5. ÑÏÎÑÎÁÛ ÓÑÒÐÀÍÅÍÈß ÀÍÒÈÌÈÊÐÎÁÍÎÃÎ ÄÅÉÑÒÂÈß ËÅÊÀÐÑÒÂÅÍÍÛÕ ÑÐÅÄÑÒ Äëÿ óñòðàíåíèÿ àíòèìèêðîáíîãî äåéñòâèÿ ËÑ ðåêîìåíäîâàíû ñëåäóþùèå ìåòîäû: l óâåëè÷åíèå ðàçâåäåíèÿ èñïûòóåìîãî îá- ðàçöà çà ñ÷åò áîëüøåãî îáúåìà ðàçáàâèòåëÿ èëè ïèòàòåëüíîé ñðåäû â ïðåäåëàõ íîðì äîïóñòèìîé ìèêðîáíîé çàãðÿçíåííîñòè (â êà÷åñòâå ðàçáàâè- òåëÿ âìåñòî ñòàíäàðòíîãî ôîñôàòíîãî áóôåðíî- ãî ðàñòâîðà èñïîëüçóþò íåéòðàëèçóþùóþ æèä- êîñòü (ï. 9) ëàáîðàòîðíîãî èëè ïðîìûøëåííîãî èçãîòîâëåíèÿ); l ïðèìåíåíèå ñïåöèôè÷åñêèõ èíàêòèâàòî- ðîâ (íàïðèìåð, èñïîëüçîâàíèå â-ëàêòàìàçû äëÿ íåêîòîðûõ â-ëàêòàìíûõ àíòèáèîòèêîâ è ïà- ðà-àìèíîáåíçîéíîé êèñëîòû (ÏÀÁÊ) — äëÿ ñóëüôàíèëàìèäíûõ ïðåïàðàòîâ), íåéòðàëèçóþ- ùèõ àíòèìèêðîáíîå äåéñòâèå îáðàçöà, íî íå óã- íåòàþùèõ ðîñò ìèêðîîðãàíèçìîâ, êîíòàìèíè- ðóþùèõ ËÑ; l èñïîëüçîâàíèå íåñïåöèôè÷åñêèõ èíàêòè- âàòîðîâ äëÿ îáðàçöîâ ñ êîíñåðâàíòàìè.
Ïîñëå ïðîâåäåíèÿ âàëèäàöèè â áóôåðíûé ðàñòâîð è (èëè) â ïèòàòåëüíûå ñðåäû ìîãóò áûòü äîáàâëå- íû ïîëèñîðáàò-80, ñîåâûé èëè ÿè÷íûé ëåöèòèí è äð.; l äëÿ îáðàçöîâ, ðàñòâîðèìûõ â âîäå èëè â èçîïðîïèëìèðèñòàòå (ÈÏÌ), ïðèìåíÿåòñÿ ìå- òîä ìåìáðàííîé ôèëüòðàöèè ñ ïîñëåäóþùèì ïðîìûâàíèåì ôèëüòðîâ. 3-5-1. Èíàêòèâàöèÿ íåêîòîðûõ àíòèáèî- òèêîâ. Äëÿ èíàêòèâàöèè ïåíèöèëëèíîâ è öåôà- ëîñïîðèíîâ, íåçàâèñèìî îò èõ ëåêàðñòâåííîé ôîðìû, â áóôåðíûé ðàñòâîð, èñïîëüçóåìûé äëÿ ðàñòâîðåíèÿ, ñóñïåíäèðîâàíèÿ èëè ýìóëüãèðî- âàíèÿ îáðàçöà, à òàêæå â ïèòàòåëüíûå ñðåäû ïå- ðåä èõ èñïîëüçîâàíèåì àñåïòè÷åñêè âíîñÿò ñòå- ðèëüíûé ðàñòâîð â-ëàêòàìàçû â êîëè÷åñòâå, óêà- çàííîì â íîðìàòèâíûõ äîêóìåíòàõ ïî êà÷åñòâó. 3-5-2.Èíàêòèâàöèÿ ñóëüôàíèëàìèäíûõ ïðåïàðàòîâ. Äëÿ èíàêòèâàöèè ñóëüôàíèëàìèä- íûõ ïðåïàðàòîâ, íåçàâèñèìî îò èõ ëåêàðñòâåí- íîé ôîðìû, â áóôåðíûé ðàñòâîð, èñïîëüçóåìûé äëÿ ðàñòâîðåíèÿ, ñóñïåíäèðîâàíèÿ èëè ýìóëü- ãèðîâàíèÿ îáðàçöà, à òàêæå â ïèòàòåëüíûå ñðå- äû, åñëè íåîáõîäèìî, äî ñòåðèëèçàöèè âíîñÿò ÏÀÁÊ èç ðàñ÷åòà 0,05 ã/ë ñðåäû â ñëó÷àå, åñëè àíòèìèêðîáíîå äåéñòâèå íå óäàåòñÿ óñòðàíèòü ïóòåì ðàçâåäåíèÿ. 3-5-3. Èíàêòèâàöèÿ êîíñåðâàíòîâ, âõîäÿ- ùèõ â ñîñòàâ ËÑ. Äëÿ èíàêòèâàöèè êîíñåðâàí- òîâ, âõîäÿùèõ â ñîñòàâ ðÿäà ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ, â áóôåðíûé ðàñòâîð, â êîòîðîì ýìóëüãèðóþò èñïûòóåìûé îáðàçåö, à òàêæå â ïèòàòåëüíûå ñðåäû äî ñòåðèëèçàöèè âíîñÿò ñëå- äóþùèå íåñïåöèôè÷åñêèå èíàêòèâàòîðû: 3 % ïîëèñîðáàòà-80 èëè 0,3 % ëåöèòèíà (ÿè÷íîãî èëè ñîåâîãî) îò îáúåìà ñðåäû.  ñëó÷àå, åñëè â ïðåïàðàòå èìååòñÿ áîëåå 2 êîíñåðâàíòîâ ðàç- 230 Òàáëèöà 2.1.6.6.-2. — Èíàêòèâàòîðû àíòèìèêðîáíîãî äåéñòâèÿ ËÑ Õèìè÷åñêèå ñîåäèíåíèÿ Èíàêòèâèðóþùèå âåùåñòâà èëè ìåòîä Ãëóòàðîâûé àëüäåãèä, ðòóòüñîäåðæàùèå ñîåäèíåíèÿ ãèäðîñóëüôèò íàòðèÿ (áèñóëüôèò íàòðèÿ) Ôåíîëû, ñïèðòû, àëüäåãèäû, ñîðáàòû ðàçâåäåíèå Àëüäåãèäû ãëèöèí ×åòâåðòè÷íûå àììîíèåâûå ñîåäèíåíèÿ (×ÀÑ), áèñáèãóàíèäû, ïàðà-ãèäðîêñèáåíçîàòû (ïàðàáåíû) ëåöèòèí ×ÀÑ, éîäñîäåðæàùèå ñîåäèíåíèÿ, ïàðàáåíû ïîëèñîðáàò, ïîëèñîðáàò-80 Ðòóòüñîäåðæàùèå ñîåäèíåíèÿ òèîãëèêîëÿò Ðòóòüñîäåðæàùèå ñîåäèíåíèÿ, ãàëîãåíû, àëüäåãèäû òèîñóëüôàò Ñîëè ýòèëåíäèàìèíòåòðààöåòàòà (ÝÄÒÀ) èîíû Mg(II) èëè Ñà(II) ëè÷íîé õèìè÷åñêîé ñòðóêòóðû, â ñðåäó âíîñÿò 3 % ïîëèñîðáàòà-80, 0,3 % ëåöèòèíà, 0,1 % L-ãèñòèäèíà è 0,5 % íàòðèÿ ñåðíîâàòèñòîêèñëî- ãî îäíîâðåìåííî. Èíàêòèâàòîðû àíòèìèêðîáíî- ãî äåéñòâèÿ ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ óêàçàíû â òàáë. 2.1.6.6.-2. Åñëè ïðè àíàëèçå êà÷åñòâà ËÑ íåëüçÿ èñ- ïîëüçîâàòü ìåòîä ìåìáðàííîé ôèëüòðàöèè, à âñå âûøåïåðå÷èñëåííûå ñïîñîáû óñòðàíåíèÿ åãî àíòèìèêðîáíîãî äåéñòâèÿ â îòíîøåíèè êîí- êðåòíîãî òåñò-øòàììà ìèêðîîðãàíèçìà íåýô- ôåêòèâíû, ýòîò âèä èñïûòàíèÿ ïðîâîäÿò â ìàê- ñèìàëüíî äîïóñòèìîì ðàçâåäåíèè îáðàçöà. 4. ÎÒÁÎÐ ÎÁÐÀÇÖΠËÅÊÀÐÑÒÂÅÍÍÛÕ ÑÐÅÄÑÒ Îò êàæäîé èññëåäóåìîé ñåðèè ËÑ äëÿ ïðî- âåäåíèÿ èñïûòàíèÿ îòáèðàþò íåîáõîäèìîå êî- ëè÷åñòâî èñïûòóåìûõ îáðàçöîâ â ñîîòâåòñòâèè ñ êàòåãîðèåé ïðåïàðàòà èç äîñòàòî÷íîãî ÷èñëà ðàçíûõ óïàêîâîê (íå ìåíåå 3 – 10). Äëÿ àýðîçîëåé íà îñíîâå æèäêèõ èëè òâåð- äûõ âåùåñòâ îòáèðàþò 10 êîíòåéíåðîâ, äëÿ òðàíñäåðìàëüíûõ ïëàñòûðåé — 10 ïëàñòûðåé.  íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ (ïðè âûñîêîé ñòîèìî- ñòè ïðåïàðàòà è/èëè ìàëîì îáúåìå ñåðèè) èñïû- òóåìûé îáðàçåö ìîæåò áûòü óìåíüøåí â îòäåëü- íûõ ñëó÷àÿõ äî 2 – 3 ã (ìë). Óìåíüøåíèå êîëè- ÷åñòâà èñïûòóåìîãî îáðàçöà ñ óêàçàíèåì ìåòîäà èñïûòàíèÿ äîëæíî áûòü îáîñíîâàíî è óòâåð- æäåíî â íîðìàòèâíîì äîêóìåíòå ïî êà÷åñòâó â óñòàíîâëåííîì ïîðÿäêå. 4-1. ÒÂÅÐÄÛÅ ËÅÊÀÐÑÒÂÅÍÍÛÅ ÔÎÐÌÛ – 10,0 ã èñïûòóåìîãî îáðàçöà — äëÿ îïðå- äåëåíèÿ îáùåãî ÷èñëà àýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèç- ìîâ, îáùåãî ÷èñëà äðîææåâûõ è ïëåñíåâûõ ãðè- áîâ â 1 ã ïðåïàðàòà, äëÿ èñïûòàíèÿ íà îòñóòñò- âèå P. aeruginosa, S.
aureus è E. ñoli, Candida albicans â 1 ã ïðåïàðàòà. – 25,0 ã èëè 10,0 ã èñïûòóåìîãî îáðàçöà — äëÿ èñïûòàíèÿ íà îòñóòñòâèå áàêòåðèé ðîäà Salmonella; – 10,0 ã èñïûòóåìîãî îáðàçöà — äëÿ êîëè- ÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ ýíòåðîáàêòåðèé, óñ- òîé÷èâûõ ê æåë÷è. 4-1-1. Òàáëåòêè, äðàæå, ãðàíóëû, ïîðîøêè è äð. 10,0 ã èñïûòóåìîãî îáðàçöà èçìåëü÷àþò (â ñëó÷àå íåîáõîäèìîñòè) è ïåðåíîñÿò â 90 ìë áóôåðíîãî ðàñòâîðà. Äàëåå ïðîâîäÿò êîëè÷åñò- âåííîå è êà÷åñòâåííîå îïðåäåëåíèå ìèêðîîðãà- íèçìîâ. 4-1-2. Êàïñóëû 10,0 ã èñïûòóåìîãî îáðàçöà ïåðåíîñÿò â 90 ìë áóôåðíîãî ðàñòâîðà, ñîäåðæàùåãî íå áî- ëåå 5 % ïîëèñîðáàòà-80 (ïðè íåîáõîäèìîñòè) è íàãðåòîãî äî òåìïåðàòóðû íå âûøå 40 °Ñ. Ïîñëå ñóñïåíäèðîâàíèÿ êàïñóë â áóôåðíîì ðàñòâîðå ïðîâîäÿò êîëè÷åñòâåííîå è êà÷åñòâåííîå îïðå- äåëåíèå ìèêðîîðãàíèçìîâ. 4-2. ÌßÃÊÈÅ ËÅÊÀÐÑÒÂÅÍÍÛÅ ÔÎÐÌÛ – 10,0 ã èñïûòóåìîãî îáðàçöà — äëÿ îïðå- äåëåíèÿ îáùåãî ÷èñëà àýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèç- ìîâ, îáùåãî ÷èñëà äðîææåâûõ è ïëåñíåâûõ ãðè- áîâ â 1 ã ïðåïàðàòà, äëÿ òåñòà íà îòñóòñòâèå P. aeruginosa, S. aureus, E. coli â 1 ã ïðåïàðàòà, Candidaalbicans â 1 ã ïðåïàðàòà. – 10,0 ã èñïûòóåìîãî îáðàçöà — äëÿ êîëè- ÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ èëè òåñòà íà îòñóòñò- âèå â 1 ã ïðåïàðàòà ýíòåðîáàêòåðèé, óñòîé÷èâûõ ê æåë÷è. 4-2-1. Ìàçè, ëèíèìåíòû, êðåìû, ñóïïîçè- òîðèè, ëåãêî ñìåøèâàåìûå ñ âîäîé. 10,0 ã èñ- ïûòóåìîãî îáðàçöà ïîìåùàþò â ñòåðèëüíóþ êîëáó, ñîäåðæàùóþ 90 ìë áóôåðíîãî ðàñòâîðà. Ïðè íåîáõîäèìîñòè äîáàâëÿþò ñòåðèëüíûå ñòåêëÿííûå áóñû äèàìåòðîì 5 – 6 ìì è ÏÀÂ, íàïðèìåð, 1 ã/ë ïîëèñîðáàòà-80. Ñìåñü íàãðåâà- þò íà âîäÿíîé áàíå äî òåìïåðàòóðû íå âûøå 40 °Ñ è ýíåðãè÷íî âñòðÿõèâàþò äî ïîëó÷åíèÿ ãîìîãåííîé ýìóëüñèè, êîòîðóþ èñïîëüçóþò äëÿ êîëè÷åñòâåííîãî è êà÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ ìèêðîîðãàíèçìîâ. 4-2-2. Ìàçè, ëèíèìåíòû, êðåìû, ñóïïîçè- òîðèè, òðóäíî ñìåøèâàåìûå ñ âîäîé. 10,0 ã èñïûòóåìîãî îáðàçöà ñìåøèâàþò ñ ìèíèìàëüíî íåîáõîäèìûì êîëè÷åñòâîì ñòåðèëüíîãî ÏÀÂ, íàïðèìåð, ïîëèñîðáàòà-80. Ñìåñü íàãðåâàþò íà âîäÿíîé áàíå èëè â òåðìîñòàòå äî òåìïåðàòóðû íå âûøå 40 °Ñ (â èñêëþ÷èòåëüíûõ ñëó÷àÿõ — äî òåìïåðàòóðû 45 °Ñ) è îñòîðîæíî ïåðåìåøè- âàþò. Äîáàâëÿþò ïðåäâàðèòåëüíî íàãðåòûé äî ñîîòâåòñòâóþùåé òåìïåðàòóðû ñòåðèëüíûé ôîñôàòíûé áóôåðíûé ðàñòâîð ñî ñòåêëÿííûìè áóñàìè â òàêîì êîëè÷åñòâå, ÷òîáû îáùèé îáúåì ñòåðèëüíîãî ÏÀ è ñòåðèëüíîãî ôîñôàòíîãî áó- ôåðíîãî ðàñòâîðà (áåç ó÷åòà áóñ) ñîñòàâëÿë 90 ìë. Ñìåñü îñòîðîæíî ïåðåìåøèâàþò äëÿ ïî- ëó÷åíèÿ ãîìîãåííîé ýìóëüñèè, êîòîðóþ èñïîëü- çóþò äëÿ êîëè÷åñòâåííîãî è êà÷åñòâåííîãî îï- 231 ðåäåëåíèÿ ìèêðîîðãàíèçìîâ. Âîçìîæíî èñïîëü- çîâàíèå äðóãèõ òåõíè÷åñêèõ ñðåäñòâ, ìåòîäèê ãîìîãåíèçàöèè ñ ñîáëþäåíèåì ïðàâèë àñåïòèêè è ðåæèìîâ òåðìîñòàòèðîâàíèÿ. 4-3. ÆÈÄÊÈÅ ËÅÊÀÐÑÒÂÅÍÍÛÅ ÔÎÐÌÛ – 10,0 ìë èñïûòóåìîãî îáðàçöà èññëåäóþò äëÿ îïðåäåëåíèÿ îáùåãî ÷èñëà ìèêðîîðãàíèç- ìîâ, îáùåãî ÷èñëà äðîææåâûõ è ïëåñíåâûõ ãðè- áîâ â 1 ìë ïðåïàðàòà, äëÿ òåñòà íà îòñóòñòâèå E. coli, P. aeruginosa, S. aureus, Candida albicans â 1 ìë ïðåïàðàòà; – 25,0 ìë èëè 10,0 ìë èñïûòóåìîãî îáðàçöà — äëÿ èñïûòàíèÿ íà îòñóòñòâèå áàêòåðèé ðîäà Salmonella; – 10,0 ìë èñïûòóåìîãî îáðàçöà — äëÿ êîëè- ÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ èëè òåñòà íà îòñóòñò- âèå â 1 ìë ïðåïàðàòà ýíòåðîáàêòåðèé, óñòîé÷è- âûõ ê æåë÷è. 4-3-1. Ðàñòâîðû, ñóñïåíçèè, ñèðîïû, ìèê- ñòóðû. Ïåðåíîñÿò 10,0 ìë èñïûòóåìîãî îáðàçöà â 90 ìë áóôåðíîãî ðàñòâîðà, ïåðåìåøèâàþò è ïðîâîäÿò êîëè÷åñòâåííîå è êà÷åñòâåííîå îïðå- äåëåíèå ìèêðîîðãàíèçìîâ. 4-3-2. Ðàñòâîðû â ìàñëàõ, ýìóëüñèè. Ïî- ìåùàþò 10,0 ìë èñïûòóåìîãî îáðàçöà â ñòå- ðèëüíóþ êîëáó, ñîäåðæàùóþ 90 ìë áóôåðíîãî ðàñòâîðà ñ ïîëèñîðáàòîì-80 â êîëè÷åñòâå íå áî- ëåå 5 % è ñòåêëÿííûå áóñû.
Ñìåñü íàãðåâàþò íà âîäÿíîé áàíå äî òåìïåðàòóðû íå âûøå 40 °Ñ è ýíåðãè÷íî âñòðÿõèâàþò äî ïîëó÷åíèÿ ãîìîãåí- íîé ýìóëüñèè, êîòîðóþ èñïîëüçóþò äëÿ êîëè÷å- ñòâåííîãî è êà÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ ìèêðî- îðãàíèçìîâ. 4-4. ÀÝÐÎÇÎËÈ 4-4-1. Àýðîçîëè íà îñíîâå ñïèðòîâ è òâåð- äûõ âåùåñòâ. Ïåðåíîñÿò 3,0 ã èñïûòóåìîãî îá- ðàçöà (ïîñëå èñïàðåíèÿ ïðîïåëëåíòà) â 30 ìë áóôåðíîãî ðàñòâîðà, ïåðåìåøèâàþò è ïðîâîäÿò êîëè÷åñòâåííîå è êà÷åñòâåííîå îïðåäåëåíèå ìèêðîîðãàíèçìîâ. Íå ìåíåå 1,0 ã èñïûòóåìîãî îáðàçöà, ïðèìåíÿåìîãî ðåñïèðàòîðíî, èñïîëü- çóþò äëÿ èñïûòàíèÿ íà îòñóòñòâèå ýíòåðîáàêòå- ðèé, óñòîé÷èâûõ ê æåë÷è. 4-4-2. Àýðîçîëè íà îñíîâå ìàñåë. Ïåðåíî- ñÿò 3,0 ã èñïûòóåìîãî îáðàçöà (ïîñëå èñïàðåíèÿ ïðîïåëëåíòà) â ñòåðèëüíóþ åìêîñòü ñ 30 ìë áó- ôåðíîãî ðàñòâîðà ñ ïîëèñîðáàòîì-80 â êîëè÷å- ñòâå íå áîëåå 5 % è ñòåðèëüíûå ñòåêëÿííûå áóñû. Ñìåñü íàãðåâàþò íà âîäÿíîé áàíå äî òåì- ïåðàòóðû íå âûøå 40 °Ñ è ýíåðãè÷íî âñòðÿõèâà- þò äî ïîëó÷åíèÿ ãîìîãåííîé ýìóëüñèè, êîòîðóþ èñïîëüçóþò äëÿ êîëè÷åñòâåííîãî è êà- ÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ ìèêðîîðãàíèçìîâ. Íå ìåíåå 1,0 ã èñïûòóåìîãî îáðàçöà, ïðèìå- íÿåìîãî ðåñïèðàòîðíî, èñïîëüçóþò äëÿ èñïûòà- íèÿ íà îòñóòñòâèå ýíòåðîáàêòåðèé, óñòîé÷èâûõ ê æåë÷è. 4-5. ÒÐÀÍÑÄÅÐÌÀËÜÍÛÅ ÏËÀÑÒÛÐÈ Ïðè îòáîðå òðàíñäåðìàëüíûõ ïëàñòûðåé èñ- ïîëüçóþò èñïûòóåìûé îáðàçåö, ñîñòîÿùèé èç 10 åäèíèö. Ñ êàæäîãî èç 10 ïëàñòûðåé ñíèìàþò çàùèòíóþ ïëåíêó, ïîëüçóÿñü ñòåðèëüíûìè èí- ñòðóìåíòàìè. Ïðè íåîáõîäèìîñòè ïëàñòûðè ðàçðåçàþò ñòåðèëüíûìè íîæíèöàìè íà áîëåå ìåëêèå ôðàãìåíòû, êîòîðûå ïåðåíîñÿò â êîëáó âìåñòèìîñòüþ 1000 ìë, ñîäåðæàùóþ 500 ìë ñòåðèëüíîãî áóôåðíîãî ðàñòâîðà è ñòåêëÿííûå áóñû (óñëîâíîå ðàçâåäåíèå 1:50). Êîëáó íàãðå- âàþò íà âîäÿíîé áàíå äî òåìïåðàòóðû íå âûøå 40 °Ñ, ýíåðãè÷íî âñòðÿõèâàþò â òå÷åíèå 30 ìèí. Èñïîëüçóþò ïî 50 ìë (èëè äðóãîé îáúåì, ñî- îòâåòñòâóþùèé îäíîìó ïëàñòûðþ) ïîëó÷åííî- ãî ñìûâà äëÿ êîëè÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ ìèêðîîðãàíèçìîâ ìåòîäîì ìåìáðàííîé ôèëüò- ðàöèè è èñïûòàíèÿ íà îòñóòñòâèå P. aeruginosa è S. aureus. Åñëè èçâåñòíî, ÷òî ïëàñòûðü îáëàäàåò àíòè- ìèêðîáíûì äåéñòâèåì, â ðàçáàâèòåëü äîáàâëÿ- þò ïîäõîäÿùèé èíàêòèâàòîð (ïîëèñîðáàò-80 è/èëè ëåöèòèí). Åñëè ñìûâ ñ òðàíñäåðìàëüíûõ ïëàñòûðåé íåëüçÿ èñïîëüçîâàòü äëÿ îïðåäåëåíèÿ ìåòîäîì ìåìáðàííîé ôèëüòðàöèè, ïðèìåíÿþò ìåòîä ïðÿìîãî ïîñåâà íà ïèòàòåëüíûå ñðåäû, èñïîëü- çóÿ ðàçâåäåíèå 1:50. 5. ÌÅÒÎÄÛ ÊÎËÈ×ÅÑÒÂÅÍÍÎÃÎ ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈß ÀÝÐÎÁÍÛÕ ÌÈÊÐÎÎÐÃÀÍÈÇÌΠ çàâèñèìîñòè îò ïðèðîäû ËÑ è åãî ôèçè- êî-õèìè÷åñêèõ ñâîéñòâ èñïîëüçóþò îäèí èç âà- ðèàíòîâ ÷àøå÷íîãî àãàðîâîãî ìåòîäà (ãëóáèí- íûé, äâóõñëîéíûé, ïîâåðõíîñòíûé, ìîäèôèöè- ðîâàííûé ãëóáèííûé), ìåòîä ìåìáðàííîé ôèëüòðàöèè èëè ïðîáèðî÷íûé ìåòîä íàèáîëåå âåðîÿòíûõ ÷èñåë. 5-1.×ÀØÅ×ÍÛÅ ÀÃÀÐÎÂÛÅ ÌÅÒÎÄÛ Äëÿ êóëüòèâèðîâàíèÿ ìèêðîîðãàíèçìîâ èñ- ïîëüçóþò àãàðèçîâàííûå ïèòàòåëüíûå ñðåäû: ñîåâî-êàçåèíîâûé àãàð èëè ñðåäó ¹ 1 ñóõóþ 232 äëÿ êîíòðîëÿ ìèêðîáíîé çàãðÿçíåííîñòè — äëÿ âûðàùèâàíèÿ áàêòåðèé, àãàð Ñàáóðî ñ ãëþêîçîé èëè ñðåäó ¹ 2 ñóõóþ äëÿ êîíòðîëÿ ìèêðîáíîé çàãðÿçíåííîñòè – äëÿ âûðàùèâàíèÿ äðîææåâûõ è ïëåñíåâûõ ãðèáîâ. Äëÿ êàæäîãî ðàçâåäåíèÿ èñïûòóåìîãî îáðàç- öà èñïîëüçóþò íå ìåíåå 2 ÷àøåê Ïåòðè ñ îïðå- äåëåííîé ñðåäîé. 5-1-1. Ãëóáèííûé ìåòîä.  ñòåðèëüíóþ ÷àøêó Ïåòðè äèàìåòðîì 90 ìì âíîñÿò 1 ìë ðàç- âåäåíèÿ èñïûòóåìîãî îáðàçöà, ïðèãîòîâëåííîãî äëÿ àíàëèçà. Äîáàâëÿþò 15 – 20 ìë ðàñïëàâëåí- íîé è îõëàæäåííîé äî òåìïåðàòóðû (42,5 ± 2,5) °Ñ ñòåðèëüíîé àãàðèçîâàííîé ïèòàòåëüíîé ñðåäû è áûñòðî ïåðåìåøèâàþò âðàùàòåëüíûìè äâèæå- íèÿìè. Ïðè áîëüøåì äèàìåòðå ÷àøåê Ïåòðè êî- ëè÷åñòâî ñðåäû ñîîòâåòñòâåííî óâåëè÷èâàþò äî 20 – 25 ìë. Ïîñëå çàñòûâàíèÿ àãàðà ÷àøêè ïåðå- âîðà÷èâàþò è èíêóáèðóþò ïîñåâû. 5-1-2. Äâóõñëîéíûé ìåòîä.
Ðàñïëàâëåííóþ àãàðèçîâàííóþ ñòåðèëüíóþ ïèòàòåëüíóþ ñðåäó âíîñÿò â êîëè÷åñòâå 15 – 20 ìë â ñòåðèëüíóþ ÷àøêó Ïåòðè äèàìåòðîì 90 ìì è îñòàâëÿþò äî çàñòûâàíèÿ. Ïðè áîëüøåì äèàìåòðå ÷àøêè Ïåò- ðè êîëè÷åñòâî ñðåäû ñîîòâåòñòâåííî óâåëè÷è- âàþò. Ïîâåðõíîñòü àãàðà â ÷àøêå ïîäñóøèâàþò.  ïðîáèðêó ñ 4 ìë ñîîòâåòñòâóþùåé ðàñ- ïëàâëåííîé è îõëàæäåííîé äî òåìïåðàòóðû (42,5 ± 2,5) °Ñ ïèòàòåëüíîé ñðåäû âíîñÿò 1 ìë ðàçâåäåíèÿ èñïûòóåìîãî îáðàçöà, ïðèãîòîâëåí- íîãî äëÿ àíàëèçà, áûñòðî ïåðåìåøèâàþò ñîäåð- æèìîå ïðîáèðêè. Çàòåì ñîäåðæèìîå ïðîáèðêè âûëèâàþò íà ïîâåðõíîñòü çàñòûâøåãî è ïîäñó- øåííîãî àãàðà â ÷àøêå Ïåòðè, ðàâíîìåðíî ðàñ- ïðåäåëÿÿ âåðõíèé ñëîé ñðåäû âðàùàòåëüíûìè äâèæåíèÿìè. Ïîñëå çàñòûâàíèÿ ÷àøêó ïåðåâî- ðà÷èâàþò è ïîìåùàþò â òåðìîñòàò äëÿ èíêóáà- öèè. 5-1-3. Ïîâåðõíîñòíûé ìåòîä. Ðàñïëàâëåí- íûå è îõëàæäåííûå äî òåìïåðàòóðû (42,5 ± 2,5) °Ñ ñòåðèëüíûå ïèòàòåëüíûå ñðåäû âíîñÿò â êîëè÷åñòâå 15 – 20 ìë â êàæäóþ ñòå- ðèëüíóþ ÷àøêó Ïåòðè äèàìåòðîì 90 ìì è îñ- òàâëÿþò äî çàñòûâàíèÿ. Ïðè áîëüøåì äèàìåòðå ÷àøåê Ïåòðè êîëè÷åñòâî ñðåäû ñîîòâåòñòâåííî óâåëè÷èâàþò. Ïîâåðõíîñòü àãàðà â ÷àøêàõ ïîä- ñóøèâàþò â òåðìîñòàòå èëè ëàìèíàðíîì øêàôó. Ðàçâåäåíèå èñïûòóåìîãî îáðàçöà, ïðèãîòîâ- ëåííîãî äëÿ àíàëèçà, íàíîñÿò ñòåðèëüíîé ïè- ïåòêîé íà àãàð â êîëè÷åñòâå 0,1 ìë è ðàâíîìåð- íî ðàñïðåäåëÿþò øïàòåëåì ïî ïîâåðõíîñòè ñðå- äû. ×àøêè ïåðåâîðà÷èâàþò è ïîìåùàþò â òåð- ìîñòàò äëÿ èíêóáàöèè. 5-1-4. Ìîäèôèöèðîâàííûé ãëóáèííûé ìåòîä. Ðàçâåäåíèå èñïûòóåìîãî îáðàçöà, ïðèãî- òîâëåííîãî äëÿ àíàëèçà, â êîëè÷åñòâå 1,0 ìë âíîñÿò â ñòåðèëüíóþ ÷àøêó Ïåòðè äèàìåòðîì 90 ìì. Äîáàâëÿþò 7 – 10 ìë ðàñïëàâëåííîé è îõëàæäåííîé äî òåìïåðàòóðû (42,5 ± 2,5) °Ñ ïè- òàòåëüíîé ñðåäû è áûñòðî ïåðåìåøèâàþò âðà- ùàòåëüíûìè äâèæåíèÿìè. Ïîñëå çàñòûâàíèÿ àãàðà ÷àøêè ïåðåâîðà÷èâàþò è èíêóáèðóþò. 5-1-5. Ó÷åò è èíòåðïðåòàöèÿ ðåçóëüòàòîâ, ïîëó÷åííûõ ÷àøå÷íûìè àãàðîâûìè ìåòîäà- ìè. Ðåçóëüòàò ôèêñèðóþò ÷åðåç 5 ñóò. Äëÿ ïîëó÷åíèÿ äîñòîâåðíûõ ðåçóëüòàòîâ îò- áèðàþò ÷àøêè, â êîòîðûõ ÷èñëî êîëîíèé áàêòå- ðèé íå ïðåâûøàåò 250, à êîëîíèé ãðèáîâ — 50. Åñëè ïðè ó÷åòå ðåçóëüòàòîâ 2 ïîñëåäóþùèõ ðàç- âåäåíèé ÷èñëî êîëîíèé íà ÷àøêàõ íàõîäèòñÿ â óêàçàííûõ âûøå ïðåäåëàõ, ðàññ÷èòûâàþò ðå- çóëüòàòû èç ìåíüøåãî ðàçâåäåíèÿ. Åñëè â ñðåäíåì íà ÷àøêàõ âûðîñëî áîëåå 250 êîëîíèé áàêòåðèé èëè áîëåå 50 êîëîíèé ãðèáîâ, äåëàþò ðÿä äàëüíåéøèõ ïîñëåäîâàòåëü- íûõ ðàçâåäåíèé èñïûòóåìîãî îáðàçöà, âûáèðàÿ ïðèåìëåìîå äëÿ ïîñåâà çíà÷åíèå. Åñëè íà ñîåâî-êàçåèíîâîì àãàðå (ñðåäå ¹ 1) äîïîëíèòåëüíî îáíàðóæåíû êîëîíèè ãðèáîâ, òî èõ ñóììèðóþò ñ ÷èñëîì áàêòåðèé è îïðåäåëÿþò îáùåå ÷èñëî àýðîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ, êîòî- ðîå óñòàíîâëåíî äëÿ êàæäîé êàòåãîðèè ËÑ. Åñëè íà ñðåäå Ñàáóðî (ñðåäà ¹ 2) äîïîëíè- òåëüíî îáíàðóæåíû êîëîíèè áàêòåðèé, òî èõ ñóììèðóþò ñ ÷èñëîì ãðèáîâ è îïðåäåëÿþò îá- ùåå ÷èñëî äðîææåâûõ è ïëåñíåâûõ ãðèáîâ, êî- òîðîå óñòàíîâëåíî äëÿ êàæäîé êàòåãîðèè ËÑ. Åñëè íà ïèòàòåëüíîé ñðåäå îòñóòñòâóåò ðîñò ìèêðîîðãàíèçìîâ, ðåçóëüòàòû îòìå÷àþò â ïðî- òîêîëå èñïûòàíèÿ ñëåäóþùèì îáðàçîì: ïðè ïî- ñåâå èñïûòóåìîãî îáðàçöà â ðàçâåäåíèè 1:10 — «Â 1 ã (èëè â 1 ìë) ëåêàðñòâåííîãî ñðåäñòâà ñîäåðæèòñÿ ìåíåå 10 ìèêðîîðãàíèçìîâ (èëè ãðèáîâ)»; ïðè ïîñåâå èñïûòóåìîãî îáðàçöà â ðàçâåäåíèè 1:100 — «Â 1 ã (èëè â 1 ìë) ëåêàðñò- âåííîãî ñðåäñòâà ñîäåðæèòñÿ ìåíåå 100 ìèêðî- îðãàíèçìîâ (èëè ãðèáîâ)» è ò.ä. Êîëè÷åñòâî ìèêðîîðãàíèçìîâ (N) â 1 ã èëè â 1 ìë ðàññ÷èòûâàþò ïî ôîðìóëå: N c v n d= × × å , 233 ãäå: ñ — êîëè÷åñòâî êîëîíèé íà âñåõ ÷àøêàõ Ïåòðè; n — ÷èñëî ÷àøåê Ïåòðè; d — êîýôôèöèåíò ðàçâåäåíèÿ èñïûòóåìî- ãî îáðàçöà; v — îáúåì îáðàçöà, âûñåâàåìûé íà ÷àøêó (ìë). Ïðèìåð.
Ïðè ïîñåâå 1,0 ìë èñïûòóåìîãî îá- ðàçöà èç ðàçâåäåíèÿ 10–2 íà 2 ÷àøêàõ âûðîñëî 168 è 215 êîëîíèé: N = + × × = × = × 168 215 2 1 19150 10 19 102 4 102 , , . Ïîëó÷åííûé ðåçóëüòàò îêðóãëÿþò äî 2 çíà- ÷àùèõ öèôð — 19000 è çàïèñûâàþò êàê 1,9·104 êîëîíèåîáðàçóþùèõ åäèíèö (ÊÎÅ). Âàðèàíòû ÷àøå÷íîãî àãàðîâîãî ìåòîäà (ãëó- áèííûé, äâóõñëîéíûé è ãëóáèííûé ìîäèôèöè- ðîâàííûé) ìîæíî èñïîëüçîâàòü ïðè èñïûòàíèè ðàçëè÷íûõ ëåêàðñòâåííûõ ôîðì, íåçàâèñèìî îò óðîâíÿ ìèêðîáíîé çàãðÿçíåííîñòè. Ïîâåðõíî- ñòíûé àãàðîâûé ìåòîä ïðåäïî÷òèòåëüíåå èñ- ïîëüçîâàòü ïðè èñïûòàíèè ËÑ ñ âûñîêèì óðîâ- íåì ìèêðîáíîé êîíòàìèíàöèè. Äëÿ ñîêðàùåíèÿ ñðîêîâ ïîëó÷åíèÿ ðåçóëüòàòîâ êîëè÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ áàêòåðèé è ãðèáîâ, êîëîíèè êîòî- ðûõ ñêëîííû ê ñëèâíîìó ðîñòó, èñïîëüçóþò ìî- äèôèöèðîâàííûé àãàðîâûé ìåòîä ïîñåâà. 5-2. ÌÅÒÎÄ ÌÅÌÁÐÀÍÍÎÉ ÔÈËÜÒÐÀÖÈÈ Ìåòîä ìåìáðàííîé ôèëüòðàöèè èñïîëüçóþò äëÿ êîëè÷åñòâåííîãî è êà÷åñòâåííîãî îïðåäåëå- íèÿ ìèêðîîðãàíèçìîâ â ËÑ, îáëàäàþùèõ èëè íå îáëàäàþùèõ àíòèìèêðîáíûì äåéñòâèåì, â ÷à- ñòíîñòè äëÿ ðàñòâîðîâ è âîäîðàñòâîðèìûõ ËÑ, à òàêæå äëÿ æèðîñîäåðæàùèõ ïðåïàðàòîâ, ðàñ- òâîðèìûõ â èçîïðîïèëìèðèñòàòå (ÈÏÌ). 5-2-1. Óñëîâèÿ ïðîâåäåíèÿ èñïûòàíèÿ. Óñ- òàíîâêà äëÿ ìåìáðàííîé ôèëüòðàöèè äîëæíà èìåòü êîíñòðóêöèþ, èç êîòîðîé ëåãêî èçâëåêà- åòñÿ ôèëüòð, ñ ïîñëåäóþùèì åãî ïåðåíîñîì íà ïèòàòåëüíûå ñðåäû. Èñïîëüçóþò ìåìáðàííûå ôèëüòðû ñ äèàìåòðîì ïîð íå áîëåå 0,45 ìêì, ñïîñîáíûå ýôôåêòèâíî çàäåðæèâàòü ìèêðîîð- ãàíèçìû, ÷òî íåîáõîäèìî ïîäòâåðäèòü âàëèäà- öèåé. Ìàòåðèàë ìåìáðàíû ñëåäóåò âûáèðàòü òà- êèì îáðàçîì, ÷òîáû êîìïîíåíòû èññëåäóåìîãî ïðåïàðàòà íå âëèÿëè íà ýôôåêòèâíîñòü åãî ðà- áîòû. Ôèëüòðû èç íèòðàòà öåëëþëîçû èñïîëüçó- þò äëÿ âîäíûõ, ìàñëÿíûõ è ðàçáàâëåííûõ ñïèð- òîâûõ ðàñòâîðîâ (ìåíåå 30 %), èç àöåòàòà öåë- ëþëîçû — äëÿ ñïèðòîâûõ ðàñòâîðîâ (áîëåå 30 %), êèñëîò, ùåëî÷åé. Ìåìáðàííóþ ôèëüòðà- öèþ ïðîâîäÿò â àñåïòè÷åñêèõ óñëîâèÿõ ñ ïîìî- ùüþ âàêóóìà. 5-2-2. Âûïîëíåíèå èñïûòàíèÿ. Èñïûòóå- ìûé îáðàçåö, êàê ïðàâèëî, ðàñòâîðÿþò â áóôåð- íîì ðàñòâîðå â ñîîòíîøåíèè 1:10.  âîðîíêó ôèëüòðîâàëüíîé óñòàíîâêè âíîñÿò ñíà÷àëà ïðî- ìûâíóþ æèäêîñòü (ïðèìåðíî 5 ìë) äëÿ ñìà÷è- âàíèÿ ôèëüòðà. Äîáàâëÿþò êîëè÷åñòâî ðàñòâîðà ïðåïàðàòà, ñîîòâåòñòâóþùåå 1 ã èñïûòóåìîãî îáðàçöà, è íåìåäëåííî ôèëüòðóþò.  ñëó÷àå íà- ëè÷èÿ àíòèìèêðîáíîãî äåéñòâèÿ èñïûòóåìîãî îáðàçöà äëÿ îòìûâàíèÿ ìåìáðàíû èñïîëüçóþò 0,9 % ðàñòâîð íàòðèÿ õëîðèäà èëè îïèñàííûå íèæå æèäêîñòè (¹ 1, ¹ 2, ¹ 3), äëÿ ÷åãî ÷åðåç ôèëüòð ïðîïóñêàþò íå ìåíåå 3 ïîðöèé ïî 100 ìë ïîäõîäÿùåé ñòåðèëüíîé ïðîìûâíîé æèäêîñòè. Ïðè íåîáõîäèìîñòè ê ïðîìûâíîé æèäêîñòè ìîãóò áûòü äîáàâëåíû ïîâåðõíîñò- íî-àêòèâíûå âåùåñòâà (íàïðèìåð, ïîëèñîð- áàò-80) èëè èíàêòèâàòîðû àíòèìèêðîáíîãî äåé- ñòâèÿ. ×åðåç 1 ìåìáðàíó ìîæíî ïðîïóñêàòü íå áîëåå 500 ìë ïðîìûâíîé æèäêîñòè. Äîïóñêàåòñÿ èñïîëüçîâàíèå äëÿ îòìûâàíèÿ ìåìáðàí ìåíåå 3 ïîðöèé ïðîìûâíîé æèäêîñòè ïðè óñëîâèè âàëèäàöèè ìåòîäà. Äëÿ òîãî ÷òîáû îïðåäåëèòü, ïîëíîñòüþ ëè îòìûòû ìåìáðàíû îò ôèëüòðóåìîãî èñïûòóåìî- ãî îáðàçöà, îáëàäàþùåãî àíòèìèêðîáíûì äåé- ñòâèåì, ïîñëå ôèëüòðàöèè ðàñòâîðà â ïîñëåä- íþþ ïîðöèþ ïðîìûâíîé æèäêîñòè âíîñÿò ïî 1 ìë âçâåñè òåñò-øòàììîâ ìèêðîîðãàíèçìîâ (äëÿ êàæäîãî â îòäåëüíîñòè), ñîîòâåòñòâóþùèõ òèïó ïðîâîäèìîãî èñïûòàíèÿ. Êîíöåíòðàöèÿ êëåòîê âíîñèìîé âçâåñè òåñò-øòàììà íå äîëæíà ïðåâûøàòü 100 ÊÎÅ â 1 ìë. Ðîñò òåñò-øòàììîâ íà ôèëüòðàõ ïîäòâåð- æäàåò îòñóòñòâèå àíòèìèêðîáíîãî äåéñòâèÿ.  ñëó÷àå, åñëè àíòèìèêðîáíîå äåéñòâèå ñîõðàíÿ- åòñÿ, èñïîëüçóþò ñïåöèôè÷åñêèå èëè íåñïåöè- ôè÷åñêèå èíàêòèâàòîðû èëè óâåëè÷èâàþò îáú- åì ïðîìûâíîé æèäêîñòè.
Ñìûâ ñ òðàíñäåðìàëüíûõ ïëàñòûðåé ïðî- ïóñêàþò ÷åðåç ìåìáðàííûå ôèëüòðû ïî 50 ìë (ñîîòâåòñòâóåò 1 ïëàñòûðþ) ÷åðåç êàæäóþ ìåì- áðàíó. Ïî îêîí÷àíèè ïðîöåññà ôèëüòðàöèè ìåì- áðàíû ïåðåíîñÿò íà ñîîòâåòñòâóþùèå ïèòàòåëü- íûå ñðåäû, ðàçëèòûå â ÷àøêè Ïåòðè èëè ôëàêî- íû ñ æèäêèìè ïèòàòåëüíûìè ñðåäàìè. ×àøêè ñ ôèëüòðàìè ïåðåâîðà÷èâàþò. Ïîñåâû íà ÷àøêàõ 234 è âî ôëàêîíàõ èíêóáèðóþò â ñòàíäàðòíûõ óñëî- âèÿõ. 5-2-3. Ó÷åò è èíòåðïðåòàöèÿ ðåçóëüòàòîâ. Ïðåäâàðèòåëüíûé ïðîñìîòð ïîñåâîâ ïðîèçâî- äÿò ÷åðåç 24 – 72 ÷ è ôèêñèðóþò îêîí÷àòåëüíûé ðåçóëüòàò ÷åðåç 5 – 7 ñóò. Îòáèðàþò ÷àøêè, â êîòîðûõ ÷èñëî êîëîíèé áàêòåðèé íà ôèëüòðàõ íå ïðåâûøàåò 100, à ãðè- áîâ – 50, è ðàññ÷èòûâàþò ÷èñëî ìèêðîîðãàíèç- ìîâ íà 1,0 ã (1,0 ìë) èñïûòóåìîãî îáðàçöà èëè íà 1 ïëàñòûðü. Åñëè íà ôèëüòðå áîëüøåå êîëè- ÷åñòâî ìèêðîîðãàíèçìîâ, òî äåëàþò ðÿä ïîñëå- äîâàòåëüíûõ ðàçâåäåíèé èñïûòóåìîãî îáðàçöà è âûáèðàþò ïîäõîäÿùåå. Ó÷åò ðåçóëüòàòîâ íà æèäêèõ ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ ïðîâîäÿò â ñîîòâåòñòâèè ñ ÎÔÑ 2.1.6.6 5-2-4. Æèäêîñòè äëÿ ïðîìûâàíèÿ ôèëüò- ðîâ. Äëÿ ïðîìûâàíèÿ ôèëüòðîâ ìîæíî èñïîëü- çîâàòü ëþáóþ ñòåðèëüíóþ æèäêîñòü, íå ïîäàâ- ëÿþùóþ ðîñò ìèêðîîðãàíèçìîâ: l 0,9 % ðàñòâîð íàòðèÿ õëîðèäà ðÍ (7,0 ± 0,2) (ïîñëå ñòåðèëèçàöèè); l æèäêîñòü ¹ 1: ðàñòâîðÿþò 1 ã ôåðìåíòà- òèâíîãî ïåïòîíà â 1000 ìë âîäû î÷èùåííîé, ôèëüòðóþò èëè öåíòðèôóãèðóþò äëÿ îñâåòëå- íèÿ, ðàçëèâàþò â ñîñóäû è ñòåðèëèçóþò; ðÍ ïî- ñëå ñòåðèëèçàöèè (7,0 ± 0,2); l æèäêîñòü ¹ 2: äîáàâëÿþò 1 ìë ïîëèñîðáà- òà-80 ê 1000 ìë æèäêîñòè ¹ 1, ðàçëèâàþò âî ôëàêîíû è ñòåðèëèçóþò. Âåëè÷èíà ðÍ ïîñëå ñòå- ðèëèçàöèè (6,9 ± 0,2). Æèäêîñòü ¹ 2 ïðèìåíÿ- þò, åñëè â ñîñòàâå ïðåïàðàòà èìååòñÿ ìàñëî; l æèäêîñòü ¹ 3: ðàñòâîðÿþò 5 ã ìÿñíîãî ïåïòîíà, 3 ã ìÿñíîãî ýêñòðàêòà è 10 ã ïîëèñîðáà- òà-80 â 1000 ìë âîäû î÷èùåííîé. Ðàçëèâàþò âî ôëàêîíû è ñòåðèëèçóþò; ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè (6,9 ± 0,2). 5-3. ÌÅÒÎÄ ÍÀÈÁÎËÅÅ ÂÅÐÎßÒÍÛÕ ×ÈÑÅË (ÍÂ×) Ìåòîä ÍÂ× èñïîëüçóþò ïðè èñïûòàíèè ËÑ ñ íèçêèì óðîâíåì ìèêðîáíîé êîíòàìèíàöèè, à òàêæå â òåõ ñëó÷àÿõ, êîãäà íåëüçÿ ïðèìåíèòü äðóãèå ìåòîäû. Ìåòîä ÍÂ× ìåíåå ÷óâñòâèòåëåí è òî÷åí ïî ñðàâíåíèþ ñ ÷àøå÷íûì àãàðîâûì ìå- òîäîì èëè ìåòîäîì ìåìáðàííîé ôèëüòðàöèè, è åãî èñïîëüçóþò òîëüêî äëÿ îïðåäåëåíèÿ îáùåãî ÷èñëà áàêòåðèé, òàê êàê ðåçóëüòàòû, ïîëó÷åííûå ïðè îïðåäåëåíèè îáùåãî ÷èñëà ãðèáîâ, îñîáåí- íî ïëåñíåâûõ, ñ÷èòàþò íåäîñòîâåðíûìè. 5-3-1. Âûïîëíåíèå èñïûòàíèÿ. Èñïûòóå- ìûé îáðàçåö ãîòîâÿò â âèäå ðàñòâîðà, ñóñïåíçèè èëè ýìóëüñèè â ðàçâåäåíèÿõ 1:10, 1:100, 1:1000, èñïîëüçóÿ ïîäõîäÿùèé ðàñòâîðèòåëü. Æèäêóþ ïèòàòåëüíóþ ñðåäó ðàçëèâàþò â 12 ñòåðèëüíûõ ïðîáèðîê ïî 9 ìë â êàæäîé. Ïðîáèðêè ñòàâÿò â øòàòèâ â 4 ðÿäà ïî 3 ïðîáèðêè â ðÿäó.  ïåðâûé ðÿä ïðîáèðîê âíîñÿò ïî 1 ìë èñ- ïûòóåìîãî îáðàçöà â ðàçâåäåíèè 1:10, âî âòîðîé ðÿä — ïî 1 ìë â ðàçâåäåíèè 1:100, â òðåòèé ðÿä – ïî 1 ìë â ðàçâåäåíèè 1:1000.  ïðîáèðêè ÷åòâåðòîãî ðÿäà âíîñÿò ïî 1 ìë ðàçáàâèòåëÿ, êî- òîðûé èñïîëüçóþò äëÿ ðàñòâîðåíèÿ, ñóñïåíäè- ðîâàíèÿ èëè ýìóëüãèðîâàíèÿ îáðàçöà. Ïîñåâû èíêóáèðóþò â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ â òå÷åíèå íå áîëåå 3 ñóò. 5-3-2. Ó÷åò è èíòåðïðåòàöèÿ ðåçóëüòàòîâ. Îòìå÷àþò ÷èñëî ïðîáèðîê â ïåðâîì, âòîðîì è òðåòüåì ðÿäàõ, â êîòîðûõ âèçóàëüíî íàáëþäàþò ðîñò ìèêðîîðãàíèçìîâ. Ñðåäà â ïðîáèðêàõ ÷åò- âåðòîãî ðÿäà (êîíòðîëü ðàçáàâèòåëÿ) äîëæíà îñ- òàâàòüñÿ ñòåðèëüíîé. Ïîëó÷åííîå òðåõçíà÷íîå ÷èñëî ñîîòâåòñòâóåò íàèáîëåå âåðîÿòíîìó êîëè- ÷åñòâó æèçíåñïîñîáíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ â 1,0 ã èëè â 1,0 ìë èñïûòóåìîãî îáðàçöà (òàáë. 2.1.6.6.-3). Ïðèìåð.  ïåðâîì ðÿäó ðîñò ìèêðîîðãàíèç- ìîâ íàáëþäàåòñÿ â 3 ïðîáèðêàõ, âî âòîðîì ðÿäó — â 2 ïðîáèðêàõ, â òðåòüåì ðÿäó — â 1 ïðî- áèðêå. Ïîëó÷åííîå ÷èñëî «321» ïî òàáë. 5 ñîîò- âåòñòâóåò ÷èñëó «150».
Ñëåäîâàòåëüíî, íàèáîëåå âåðîÿòíîå ÷èñëî áàêòåðèé â 1 ã èëè 1 ìë èñïûòóåìîãî îáðàçöà — 150. Åñëè ó÷åò ðåçóëüòàòîâ íå ìîæåò áûòü îïðå- äåëåí òî÷íî â ñâÿçè ñ ïðèðîäîé èñïûòóåìîãî îáðàçöà (ïîìóòíåíèå ñðåäû, èçìåíåíèå åå öâåòà è ò.ï.), äåëàþò ïåðåñåâ íà ñîîòâåòñòâóþùóþ æèäêóþ èëè àãàðèçîâàííóþ ñðåäó, ÷òîáû óáå- äèòüñÿ â íàëè÷èè ðîñòà ìèêðîîðãàíèçìîâ. 5-4. ÏÎÂÒÎÐÅÍÈÅ ÈÑÏÛÒÀÍÈß È ÎÖÅÍÊÀ ÐÅÇÓËÜÒÀÒΠÏðè íåîáõîäèìîñòè ïîâòîðÿþò òîò ðàçäåë èñïûòàíèÿ, ðåçóëüòàòû êîòîðîãî íå ñîîòâåòñòâó- þò òðåáîâàíèÿì íîðìàòèâíîãî äîêóìåíòà ïî êà- ÷åñòâó. Àíàëèç ïðîâîäÿò íà óäâîåííîì êîëè÷å- ñòâå èñïûòóåìûõ îáðàçöîâ ïðåïàðàòà. Äëÿ ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ (çà èñêëþ÷å- íèåì ËÐÏ) íîðìû äîïóñòèìîé ìèêðîáíîé çà- ãðÿçíåííîñòè èíòåðïðåòèðóþò ñëåäóþùèì îá- ðàçîì: – åñëè êîëè÷åñòâî ìèêðîîðãàíèçìîâ â 1 ã èëè â 1 ìë íå áîëåå 10 ÊÎÅ — ìàêñèìàëüíî äî- ïóñêàåòñÿ 20 ÊÎÅ/ã èëè ìë; 235 – åñëè êîëè÷åñòâî ìèêðîîðãàíèçìîâ â 1 ã èëè â 1 ìë íå áîëåå 102 ÊÎÅ — ìàêñèìàëüíî äî- ïóñêàåòñÿ 200 ÊÎÅ/ã èëè ìë; – åñëè êîëè÷åñòâî ìèêðîîðãàíèçìîâ â 1 ã èëè â 1 ìë íå áîëåå 103 ÊÎÅ — ìàêñèìàëüíî äî- ïóñêàåòñÿ 2000 ÊÎÅ è ò.ä. 6. ÏÐÎÂÅÐÊÀ ÐÎÑÒÎÂÛÕ ÑÂÎÉÑÒÂ È ÑÒÅÐÈËÜÍÎÑÒÈ ÏÈÒÀÒÅËÜÍÛÕ ÑÐÅÄ. Äëÿ êàæäîé ñåðèè êîììåð÷åñêîé ñðåäû (ñó- õîé è ãîòîâîé ê èñïîëüçîâàíèþ), à òàêæå äëÿ êà- æäîé ïàðòèè ñðåäû, èçãîòîâëåííîé â ëàáîðàòî- ðèè, ïðîâîäÿò îïðåäåëåíèå ðîñòîâûõ ñâîéñòâ ñ ïîìîùüþ ìèêðîîðãàíèçìîâ è àòòåñòîâàííûõ ïèòàòåëüíûõ ñðåä.  êà÷åñòâå àòòåñòîâàííûõ èñïîëüçóþò ãîòîâûå ê óïîòðåáëåíèþ ñðåäû ñ ñåðòèôèêàòîì ïðîèçâîäèòåëÿ, à òàêæå ðàíåå àò- òåñòîâàííûå â ëàáîðàòîðèè ñðåäû âûñîêîãî êà- ÷åñòâà. Ðîñòîâûå ñâîéñòâà ïèòàòåëüíîé ñðåäû (ýòî ñïîñîáíîñòü ïèòàòåëüíîé ñðåäû îáåñïå÷èâàòü ýôôåêòèâíûé è òèïè÷íûé ðîñò ñîîòâåòñòâóþ- ùèõ òåñò-øòàììîâ ìèêðîîðãàíèçìîâ. 6-1. ÒÅÑÒ-ØÒÀÌÌÛ ÌÈÊÐÎÎÐÃÀÍÈÇÌΠÒåñò-ìèêðîîðãàíèçìû è óñëîâèÿ èíêóáàöèè äëÿ îïðåäåëåíèÿ ðîñòîâûõ ñâîéñòâ ïèòàòåëü- íûõ ñðåä ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 2.1.6.6.-4. 6-1-1. Ïðèãîòîâëåíèå ðàáî÷åé âçâåñè òåñò-ìèêðîîðãàíèçìîâ. Êóëüòóðû áàêòåðèé è ãðèáîâ C. albicans ñìûâàþò ñ ïîâåðõíîñòè ñêî- øåííîãî àãàðà ñòåðèëüíûì 0,9 % ðàñòâîðîì íà- òðèÿ õëîðèäà. Ãîòîâÿò ñòàíäàðòíûå âçâåñè êàæ- äîãî òåñò-øòàììà, ñîîòâåòñòâóþùèå 10 ÌÅ ïî ñòàíäàðòíîìó îáðàçöó ìóòíîñòè. Äëÿ êóëüòóð B. subtilis, B. cereus è C. albicans — ýòî êîíöåí- òðàöèÿ 107 ÊÎÅ/ìë, äëÿ E. coli, S. abony, P. aeruginosa, S. aureus — 109 ÊÎÅ/ìë. Ñòàíäàð- òèçîâàííûå âçâåñè ìåòîäîì ïîñëåäóþùèõ äåñÿ- òèêðàòíûõ ðàçâåäåíèé äîâîäÿò ñòåðèëüíûì 0,9 % ðàñòâîðîì íàòðèÿ õëîðèäà äî êîíöåíòðà- öèè 103 ÊÎÅ/ìë. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ôàêòè÷åñêîé êîíöåíòðàöèè ðàáî÷èõ âçâåñåé áàêòåðèé è C. albicans êóëüòóðû âûñåâàþò ïîâåðõíîñòíûì ìåòîäîì èç êîíöåíòðàöèè 103 ÊÎÅ/ìë ïî 0,1 ìë íà ÷àøêó Ïåòðè ñ ñîîòâåòñòâóþùåé àòòåñòîâàí- íîé àãàðèçîâàííîé ñðåäîé. Äëÿ ñìûâà êîíèäèé A. brasiliensis ñ àãàðà Ñàáóðî ñ ãëþêîçîé èñïîëüçóþò ñòåðèëüíûé 0,9 % ðàñòâîð íàòðèÿ õëîðèäà, ñîäåðæàùèé 236 Òàáëèöà 2.1.6.6.-3. — Íàèáîëåå âåðîÿòíîå ÷èñëî ìèê- ðîîðãàíèçìîâ Êîëè÷åñòâî ïðîáèðîê â êàæäîì ðÿäó, â êîòîðûõ íàáëþäàþò ðîñò ÍÂ× ìèêðîîð- ãàíèçìîâ â 1 ã (ìë) ïðåïàðàòà Êîëè÷åñòâî ïðåïàðàòà â ïðîáèðêå, ã (ìë) 0,1 0,01 0,001 0 0 0 ìåíåå 3 0 0 1 3 0 1 0 3 0 1 1 6,1 0 2 0 6,2 0 3 0 9,4 1 0 0 3,6 1 0 1 7,2 1 0 2 11 1 1 0 7,4 1 1 1 11 1 2 0 11 1 2 1 15 1 3 0 16 2 0 0 9,2 2 0 1 14 2 0 2 20 2 1 0 15 2 1 1 20 2 1 2 27 2 2 0 21 2 2 1 28 2 2 2 35 2 3 0 29 2 3 1 36 3 0 0 23 3 0 1 38 3 0 2 64 3 1 0 43 3 1 1 75 3 1 2 120 3 1 3 160 3 2 0 93 3 2 1 150 3 2 2 210 3 2 3 290 3 3 0 240 3 3 1 460 3 3 2 1100 3 3 3 áîëåå 1100 0,05 % ïîëèñîðáàòà-80.
Êîëè÷åñòâî êîíèäèé â 1 ìë âçâåñè îïðåäåëÿþò ñ ïîìîùüþ êàìåðû Ãî- ðÿåâà èëè ïîñåâîì ïîäõîäÿùåãî ðàçâåäåíèÿ íà àòòåñòîâàííûé àãàð Ñàáóðî ñ ãëþêîçîé èëè ñðå- äó ¹ 2. Äëÿ ïîñåâà ãîòîâÿò ðàáî÷óþ âçâåñü A. bra- siliensis ñ êîíöåíòðàöèåé êîíèäèé îêîëî 0,5·103 â 1 ìë, êîòîðóþ âûñåâàþò ïîâåðõíîñòíûì ìåòî- äîì ïî 0,1 ìë íà ÷àøêè ñ àãàðîì Ñàáóðî ñ ãëþ- êîçîé (èëè ñðåäîé ¹ 2). Ïðèãîòîâëåííûå ðàáî÷èå âçâåñè òåñò-ìèê- ðîîðãàíèçìîâ èñïîëüçóþò äëÿ îïðåäåëåíèÿ ðîñ- òîâûõ ñâîéñòâ ïèòàòåëüíûõ ñðåä. Êîëè÷åñòâî êëåòîê òåñò-øòàììîâ äëÿ âíåñåíèÿ â æèäêóþ èëè àãàðèçîâàííóþ ïèòàòåëüíûå ñðåäû íå äîëæíî ïðåâûøàòü 102 ÊÎÅ. 6-2. ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈÅ ÐÎÑÒÎÂÛÕ ÑÂÎÉÑÒ ÏÈÒÀÒÅËÜÍÛÕ ÑÐÅÄ Èñïûòóåìàÿ àãàðèçîâàííàÿ ñðåäà ñ÷èòàåòñÿ ãîäíîé ê èñïîëüçîâàíèþ, åñëè êîýôôèöèåíò ïðîðàñòàíèÿ ñîñòàâëÿåò îò 0,5 äî 2 ïðè ñðàâíå- íèè ñ àòòåñòîâàííîé ïèòàòåëüíîé ñðåäîé. Èñïûòóåìàÿ æèäêàÿ ñðåäà ñ÷èòàåòñÿ ãîäíîé ê èñïîëüçîâàíèþ, åñëè íà èñïûòóåìîé è àòòå- ñòîâàííûõ ñðåäàõ íàáëþäàþò âèçóàëüíî îäèíà- êîâûé ðîñò òåñò-øòàììà. 6-2-1. Èñïûòàíèå àãàðèçîâàííûõ ñðåä. Èñïûòóåìóþ è àòòåñòîâàííóþ àãàðèçîâàííûå ñðåäû ðàçëèâàþò â ÷àøêè Ïåòðè äèàìåòðîì 90 ìì ïî 15 – 20 ìë, ïîäñóøèâàÿ àãàð ïîñëå çà- ñòûâàíèÿ. Ïî 0,1 ìë ðàáî÷åé âçâåñè òåñò-ìèêðî- îðãàíèçìà ñ êîíöåíòðàöèåé 103 ÊÎÅ/ìë çàñåâà- þò ïîâåðõíîñòíûì ìåòîäîì íà ÷àøêè Ïåòðè ñ èñïûòóåìîé è àòòåñòîâàííîé ñðåäàìè â äâîéíîé ïîâòîðíîñòè. Íà àãàðèçîâàíííûõ ñðåäàõ ïîñëå èíêóáàöèè ïîäñ÷èòûâàþò êîëîíèè òåñò-øòàììîâ ìèêðîîð- ãàíèçìîâ è îïðåäåëÿþò êîýôôèöèåíò ïðîðàñòà- íèÿ Êïð ïî ôîðìóëå: Ê N N ïð o = , ãäå: N — ñðåäíåå àðèôìåòè÷åñêîå ÷èñëà êîëî- íèé íà ÷àøêå Ïåòðè ñ èñïûòóåìîé ñðåäîé; Nî — ñðåäíåå àðèôìåòè÷åñêîå ÷èñëà êîëî- íèé íà ÷àøêå Ïåòðè ñ àòòåñòîâàííîé ñðåäîé. 6-2-2. Èñïûòàíèå æèäêèõ ñðåä. Æèäêèå èñïûòóåìûå è àòòåñòîâàííûå ïèòàòåëüíûå ñðå- äû ðàçëèâàþò â ñòåðèëüíûå ïðîáèðêè ðàçìåðîì 15 × 150 ìì ïî 10 ìë. Ïî 0,1 ìë ðàáî÷åé âçâåñè òåñò-øòàììà ìèêðîîðãàíèçìà ñ êîíöåíòðàöèåé 103 ÊÎÅ/ìë çàñåâàþò â ïðîáèðêè ñ èñïûòóåìîé è ñòàíäàðòíîé ñðåäîé (ïî 3 ïðîáèðêè äëÿ êàæ- äîãî âèäà ñðåäû). Èíêóáèðóþò ïðè ñîîòâåòñò- âóþùåé òåìïåðàòóðå â òå÷åíèå ìèíèìàëüíîãî äëÿ ýòîãî òåñòà âðåìåíè. Ðîñò ìèêðîîðãàíèçìîâ îïðåäåëÿþò âèçóàëüíî. 6-3. ÑÒÅÐÈËÜÍÎÑÒÜ ÏÈÒÀÒÅËÜÍÛÕ ÑÐÅÄ Íå ìåíåå 5 % åìêîñòåé (ôëàêîíîâ, ïðîáè- ðîê) îò êàæäîé ïàðòèè ïðèãîòîâëåííîé ïèòà- òåëüíîé ñðåäû êîíòðîëèðóþò íà ñòåðèëüíîñòü, âûäåðæèâàÿ èõ ïðè ñîîòâåòñòâóþùåé òåìïåðà- òóðå â òå÷åíèå 2 – 3 ñóò. Ïðè îáíàðóæåíèè ìèê- ðîáíîãî ðîñòà õîòÿ áû â îäíîé èç åìêîñòåé èñ- 237 Òàáëèöà 2.1.6.6.-4. — Òåñò-øòàììû ìèêðîîðãàíèçìîâ è óñëîâèÿ èíêóáàöèè äëÿ îïðåäåëåíèÿ ðîñòîâûõ ñâîéñòâ ïèòàòåëüíûõ ñðåä Ïèòàòåëüíûå ñðåäû Òåñò–øòàììû ìèêðîîðãàíèçìîâ Óñëîâèÿ èíêóáàöèè Ñîåâî-êàçåèíîâûé (òðèïòèêàçî-ñîåâûé) àãàð Ñðåäà ¹ 1 äëÿ âûðàùèâàíèÿ áàêòåðèé Bacillus subtilis èëè Bacillus cereus, Escherichia coli, Staphylococcus àureus, Candida albicans, Aspergillus brasiliensis èëè A. niger 3 ñóò (32,5 ± 2,5) °Ñ Àãàð Ñàáóðî ñ ãëþêîçîé Ñðåäà ¹ 2 äëÿ âûðàùèâàíèÿ ãðèáîâ Candida albicans, Aspergillus brasiliensis èëè A. niger 5 ñóò (22,5 ± 2,5) °Ñ Cîåâî-êàçåèíîâûé (òðèïòèêàçî-ñîåâûé) áóëüîí Ñðåäà ¹ 8 äëÿ âûðàùèâàíèÿ áàêòåðèé Bacillus cereus èëè Bacillus subtilis Escherichia coli, Staphylococcus àureus, Pseudomonas aeruginosa 24 ÷ (32,5 ± 2,5) °Ñ Áóëüîí Ñàáóðî Candida albicans 5 ñóò (22,5 ± 2,5) °Ñ ïûòóåìàÿ ïàðòèÿ ïèòàòåëüíîé ñðåäû ïîäëåæèò óíè÷òîæåíèþ. 7. ÕÐÀÍÅÍÈÅ ÏÈÒÀÒÅËÜÍÛÕ ÑÐÅÄ Ñóõèå ïèòàòåëüíûå ñðåäû íåîáõîäèìî õðà- íèòü ãåðìåòè÷íî óïàêîâàííûìè, â òåìíîì ñó- õîì ìåñòå ïðè òåìïåðàòóðå 2 – 30 °Ñ. Ïðèãîòîâ- ëåííûå èç ñóõèõ ñìåñåé è ðàçëèòûå âî ôëàêîíû ïèòàòåëüíûå ñðåäû õðàíÿò 1 ìåñ ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå èëè 3 ìåñ ïðè òåìïåðàòóðå 2 – 8 °Ñ.
Ñðîê ãîäíîñòè ñðåä, ðàçëèòûõ â ÷àøêè Ïåòðè, ñîñòàâëÿåò 7 ñóò ïðè òåìïåðàòóðå 2 – 8 °Ñ. Ìîãóò áûòü óñòàíîâëåíû èíûå ñðîêè õðàíåíèÿ ïèòàòåëüíûõ ñðåä íà îñíîâàíèè ýêñ- ïåðèìåíòàëüíûõ äàííûõ. 8. ÐÅÊÎÌÅÍÄÓÅÌÛÅ ÏÈÒÀÒÅËÜÍÛÅ ÑÐÅÄÛ È ÐÀÑÒÂÎÐÛ Ôîñôàòíûé áóôåðíûé ðàñòâîð ñ íàòðèÿ õëîðèäîì è ïåïòîíîì (ðÍ 7,0): l Êàëèÿ ôîñôàò îäíîçàìåùåííûé 3,6 ã l Íàòðèÿ ôîñôàò äâóçàìåùåííûé 7,2 ã l Íàòðèÿ õëîðèä 4,3 ã l Ïåïòîí (ìÿñíîé èëè êàçåèíîâûé) 1,0 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë Íåéòðàëèçóþùàÿ æèäêîñòü l Ïîëèñîðáàò-80 30,0 ã l Ëåöèòèí (ÿè÷íûé èëè ñîåâûé) 3,0 ã l Ãèñòèäèíà ãèäðîõëîðèä 1,0 ã l Ïåïòîí (ìÿñíîé èëè êàçåèíîâûé) 1,0 ã l Íàòðèÿ õëîðèä 4,3 ã l Êàëèÿ ôîñôàò îäíîçàìåùåííûé 3,6 ã l Íàòðèÿ ôîñôàò äâóçàìåùåííûé 7,2 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 7,6 ± 0,2. Ñîåâî-êàçåèíîâûé àãàð (Casein Soya Bean Digest agar) l Ïàíêðåàòè÷åñêèé ãèäðîëèçàò êàçåèíà 15,0 ã l Ïàïàèíîâûé ãèäðîëèçàò áîáîâ ñîè 5,0 ã l Íàòðèÿ õëîðèä 5,0 ã l Àãàð ìèêðîáèîëîãè÷åñêèé 15,0 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 7,3 ± 0,2. Àëüòåðíàòèâíàÿ ñðåäà äëÿ âûðàùèâàíèÿ àýðîáíûõ áàêòåðèé — ñðåäà ¹ 1 äëÿ êîíòðîëÿ ìèêðîáíîé çàãðÿçíåííîñòè, ñóõàÿ; ìÿñîïåïòîí- íûé àãàð (ÌÏÀ); àãàðèçîâàííûå ïèòàòåëüíûå ñðåäû íà îñíîâå ãèäðîëèçàòà ðûáíîé ìóêè (ÃÐÌ). Àãàð Ñàáóðî ñ ãëþêîçîé (Sabouraud 4 % GlucoseAgar) l Ïåïòîí (ìÿñíîé èëè êàçåèíîâûé) 10,0 ã l Ãëþêîçû ìîíîãèäðàò 40,0 ã l Àãàð áàêòåðèîëîãè÷åñêèé 15,0 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 5,6 ± 0,2. Àëüòåðíàòèâíàÿ ñðåäà äëÿ âûðàùèâàíèÿ äðîææåâûõ è ïëåñíåâûõ ãðèáîâ — ñðåäà ¹ 2 (àãàð Ñàáóðî ñ ãëþêîçîé) äëÿ êîíòðîëÿ ìèêðîá- íîé çàãðÿçíåííîñòè, ñóõàÿ, ðàçëè÷íûõ ïðîèçâî- äèòåëåé. Äëÿ ïîâûøåíèÿ ñåëåêòèâíîñòè ñðåäû ñ öå- ëüþ ïðåäîòâðàùåíèÿ ðîñòà áàêòåðèé ïåðåä ñòå- ðèëèçàöèåé äîáàâëÿþò 50 ìã õëîðàìôåíèêîëà (ëåâîìèöåòèíà) íà 1 ë ñðåäû èëè ïåðåä ðîçëè- âîì â ÷àøêè Ïåòðè â ðàñïëàâëåííóþ ñðåäó âíî- ñÿò 0,1 ã íàòðèåâîé ñîëè áåíçèëïåíèöèëëèíà è 0,1 ã òåòðàöèêëèíà íà 1 ë ñðåäû â âèäå ñòåðèëü- íûõ ðàñòâîðîâ. Ñîåâî-êàçåèíîâûé áóëüîí (Casein Soya Bean Digest Broth) l Ïàíêðåàòè÷åñêèé ãèäðîëèçàò êàçåèíà 17,0 ã l Ïàïàèíîâûé ãèäðîëèçàò áîáîâ ñîè 3,0 ã l Íàòðèÿ õëîðèä 5,0 ã l Êàëèÿ ôîñôàò äâóçàìåùåííûé 2,5 ã l Ãëþêîçû ìîíîãèäðàò 2,5 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 7,3 ± 0,2. Àëüòåðíàòèâíàÿ ñðåäà äëÿ âûðàùèâàíèÿ áàêòåðèé — ñðåäà ¹ 8 äëÿ êîíòðîëÿ ìèêðîáíîé çàãðÿçíåííîñòè, ñóõàÿ, ðàçëè÷íûõ ïðîèçâîäèòå- ëåé. Áóëüîí Ñàáóðî (Sabouraud Broth) l Ïåïòîí (ìÿñíîé) 5,0 ã l Ïåïòîí (êàçåèíîâûé) 5,0 ã l Ãëþêîçû ìîíîãèäðàò 20,0 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 5,6 ± 0,2. 238 Ïîëóæèäêèé àãàð äëÿ õðàíåíèÿ òåñò-ìèêðîîðãàíèçìîâ l Ïàíêðåàòè÷åñêèé ãèäðîëèçàò êàçåèíà 8,0 ã l Íàòðèÿ õëîðèä 5,0 ã l Àãàð ìèêðîáèîëîãè÷åñêèé 5,0 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 7,0 ± 0,2. 201060007-2019 2.1.6.7. Ìèêðîáèîëîãè÷åñêèå èñïûòàíèÿ íåñòåðèëüíûõ ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ íà íàëè÷èå îòäåëüíûõ âèäîâ ìèêðîîðãàíèçìîâ 1. ÂÂÅÄÅÍÈÅ Èñïûòàíèÿ, îïèñàííûå íèæå, ïîçâîëÿþò îï- ðåäåëÿòü îòñóòñòâèå èëè ïðåäåëüíîå ñîäåðæà- íèå îòäåëüíûõ âèäîâ ìèêðîîðãàíèçìîâ ñ èñ- ïîëüçîâàíèåì ñåëåêòèâíûõ è äèàãíîñòè÷åñêèõ ïèòàòåëüíûõ ñðåä äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ ñîîòâåò- ñòâèÿ ëåêàðñòâåííîãî ñðåäñòâà òðåáîâàíèÿì ïî ìèêðîáèîëîãè÷åñêîé ÷èñòîòå. 2. ÎÁÙÈÅ ÏÐÎÖÅÄÓÐÛ Îáðàçöû ãîòîâÿò â ñîîòâåòñòâèè ñ óêàçàíèÿ- ìè, ïðèâåäåííûìè â ÎÔÑ 2.1.6.6. Åñëè èñïûòóåìûé îáðàçåö îáëàäàåò àíòè- ìèêðîáíûì äåéñòâèåì, íåîáõîäèìî åãî óñòðà- íèòü èëè íåéòðàëèçîâàòü, êàê îïèñàíî â ÎÔÑ 2.1.6.6.
Åñëè äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ îáðàçöà èñïîëüçó- þò ïîâåðõíîñòíî-àêòèâíûå âåùåñòâà, äîëæíà áûòü ïîäòâåðæäåíà èõ íåòîêñè÷íîñòü ïî îòíî- øåíèþ ê ìèêðîîðãàíèçìàì è ñîâìåñòèìîñòü ñ èíàêòèâàòîðàìè â ñîîòâåòñòâèè ñ óêàçàíèÿìè, ïðèâåäåííûìè â ÎÔÑ 2.1.6.6 3. ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈÅ ÎÒÄÅËÜÍÛÕ ÂÈÄΠÌÈÊÐÎÎÐÃÀÍÈÇÌΠ3-1. ÝÍÒÅÐÎÁÀÊÒÅÐÈÈ, ÓÑÒÎÉ×ÈÂÛÅ Ê ÆÅË×È 3-1-1 Èñïûòàíèå íà îòñóòñòâèå ýíòåðî- áàêòåðèé, óñòîé÷èâûõ ê æåë÷è (êà÷åñòâåí- íûé ìåòîä). Äëÿ âîññòàíîâëåíèÿ æèçíåñïîñîá- íîñòè ìèêðîîðãàíèçìîâ èñïîëüçóþò ïðåäâàðè- òåëüíóþ èíêóáàöèþ èñïûòóåìîãî îáðàçöà â æèäêîé ïèòàòåëüíîé ñðåäå. Ñ ýòîé öåëüþ 10,0 ã èëè 10,0 ìë èñïûòóåìîãî îáðàçöà ïåðåíîñÿò â 90 ìë ñîåâî-êàçåèíîâîãî áóëüîíà (èëè ñðåäû ¹ 8), ïåðåìåøèâàþò è èíêóáèðóþò ïðè òåìïå- ðàòóðå (22,5 ± 2,5) °Ñ â òå÷åíèå 2 ÷, íî íå áîëåå 5 ÷. Ïîñëå èíêóáàöèè ñíîâà ïåðåìåøèâàþò ñî- äåðæèìîå ôëàêîíà, â êîòîðîì ïðîâîäèëîñü âîñ- ñòàíîâëåíèå æèçíåñïîñîáíîñòè ìèêðîîðãàíèç- ìîâ (ãîìîãåíàò À), è ïåðåíîñÿò 10 ìë (êîëè÷åñò- âî, ñîîòâåòñòâóþùåå 1 ã èëè 1 ìë èñïûòóåìîãî îáðàçöà) â 100 ìë ñðåäû îáîãàùåíèÿ (áóëüîí Ìîññåëÿ). Ïîñåâû èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 24 – 48 ÷ â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ. Äåëàþò ïåðå- ñåâ áàêòåðèîëîãè÷åñêîé ïåòëåé íà àãàð Ìîññåëÿ èëè ñðåäó ¹ 4, êîòîðóþ èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 18 – 24 ÷. Åñëè íà àãàðå Ìîññåëÿ âûÿâëåíû òèïè÷íûå êîëîíèè ýíòåðîáàêòåðèé, ïî ìîðôîëîãè÷åñêèì è òèíêòîðèàëüíûì ñâîéñòâàì ïðåäñòàâëÿþùèå ñîáîé ãðàìîòðèöàòåëüíûå íåñïîðîîáðàçóþùèå ïàëî÷êè, íå îáëàäàþùèå öèòîõðîìîêñèäàçîé (ï. 4-1), ñ÷èòàþò, ÷òî èññëåäóåìûé îáðàçåö êîí- òàìèíèðîâàí ýíòåðîáàêòåðèÿìè, óñòîé÷èâûìè ê æåë÷è. 3-1-2. Êîëè÷åñòâåííîå îïðåäåëåíèå ýíòå- ðîáàêòåðèé, óñòîé÷èâûõ ê æåë÷è. Äëÿ ïîñåâà èñïîëüçóþò 3 ïðîáèðêè ñ 9 ìë áóëüîíà Ìîññåëÿ â êàæäîé. Ãîìîãåíàò À â êîëè÷åñòâå 1 ìë (ñîîò- âåòñòâóåò 0,1 ã èëè 0,1 ìë èñïûòóåìîãî îáðàçöà) âíîñÿò â ïåðâóþ ïðîáèðêó, òùàòåëüíî ïåðåìå- øèâàþò è ïåðåíîñÿò 1 ìë (ñîîòâåòñòâóåò 0,01 ã èëè 0,01 ìë èñïûòóåìîãî îáðàçöà) âî âòîðóþ ïðîáèðêó, ñíîâà ïåðåìåøèâàþò è ïåðåíîñÿò 1 ìë (ñîîòâåòñòâóåò 0,001 ã èëè 0,001 ìë èñïû- òóåìîãî îáðàçöà) â òðåòüþ ïðîáèðêó, ìåíÿÿ ïè- ïåòêó ïîñëå êàæäîãî øàãà. Ïîñåâû èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 24 – 48 ÷. Äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ îòñóòñòâèÿ ýíòåðîáàê- òåðèé, óñòîé÷èâûõ ê æåë÷è, äåëàþò ïåðåñåâ áàêòåðèîëîãè÷åñêîé ïåòëåé èç êàæäîé ïðîáèð- êè ñ âèäèìûì ðîñòîì íà àãàð Ìîññåëÿ (ñðåäà ¹ 4) è èíêóáèðóþò ÷àøêè Ïåòðè â òå÷åíèå 18 – 24 ÷. Ïðîâîäÿò ìèêðîñêîïè÷åñêîå èññëåäî- âàíèå îáíàðóæåííûõ íà ïëîòíîé ñðåäå êîëîíèé. Âûÿâëåíèå ãðàìîòðèöàòåëüíûõ ïàëî÷êîâèäíûõ íåñïîðîîáðàçóþùèõ áàêòåðèé ñâèäåòåëüñòâóåò î ïðèñóòñòâèè â ËÑ ýíòåðîáàêòåðèé, óñòîé÷è- âûõ ê æåë÷è. Íàèáîëåå âåðîÿòíîå êîëè÷åñòâî óñòîé÷èâûõ ê æåë÷è ýíòåðîáàêòåðèé â 1 ã (ìë )èñïûòóåìîãî îáðàçöà îïðåäåëÿþò ïî òàáë. 2.1.6.7.-1. 239 3-2. ÁÀÊÒÅÐÈÈ ESCHERICHIA COLI 3-2-1. Èñïûòàíèå íà îòñóòñòâèå áàêòåðèé E. coli (êà÷åñòâåííûé ìåòîä). 10 ã (ìë) èñïû- òóåìîãî îáðàçöà, ðàñòâîðåííîãî èëè ðàçáàâëåí- íîãî ñòåðèëüíûì ôîñôàòíî-áóôåðíûì ðàñòâî- ðîì 1:10, ïåðåíîñÿò â êîëè÷åñòâå 10 ìë (ñîîò- âåòñòâóåò 1 ã èëè 1 ìë èñïûòóåìîãî îáðàçöà) â 100 ìë ñîåâî-êàçåèíîâîãî áóëüîíà (èëè ñðåäû ¹ 8). Ïåðåìåøèâàþò è èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 18 – 24 ÷. 1 ìë ñîäåðæèìîãî ôëàêîíà ïåðåíîñÿò â 100 ìë áóëüîíà Ìàê-Êîíêè (èëè ñðåäû ¹ 3) è èíêóáèðóþò 24 – 48 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå (43 ± 1) °Ñ. Äåëàþò ïåðåñåâ èç æèäêîé ïèòàòåëüíîé ñðå- äû áàêòåðèîëîãè÷åñêîé ïåòëåé íà àãàð Ìàê-Êîíêè èëè ñðåäó ¹ 4. Ïîñåâû èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 18 – 72 ÷ (àãàð Ìàê-Êîíêè) èëè 18 – 24 ÷ (ñðåäà ¹ 4). Åñëè ïîñëå èíêóáàöèè íà ïëîòíûõ ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ âûÿâëåíû êîëî- íèè, òèïè÷íûå äëÿ E.coli (òàáë.2.1.6.7.-2), èõ ìèêðîñêîïèðóþò.
Ïðè îáíàðóæåíèè â ìàçêàõ ìåëêèõ ãðàìîòðèöàòåëüíûõ ïàëî÷åê îòäåëüíûå òèïè÷íûå êîëîíèè ïåðåñåâàþò â ïðîáèðêè íà ñêîøåííûé ñîåâî-êàçåèíîâûé àãàð èëè ñðåäó ¹ 1 è èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 18 – 24 ÷ äëÿ íàêî- ïëåíèÿ ÷èñòîé êóëüòóðû ìèêðîîðãàíèçìà. Äëÿ èäåíòèôèêàöèè âûäåëåííûõ áàêòåðèé èñïîëüçóþò áèîõèìè÷åñêèå òåñòû íà öèòîõðî- ìîêñèäàçó (ï. 4-1), èíäîë (ï. 4-2) è ñïîñîáíîñòü óòèëèçèðîâàòü íàòðèÿ öèòðàò. Äëÿ ýòîãî èç ïðî- áèðîê ñ ÷èñòîé êóëüòóðîé äåëàþò ïåðåñåâû íà àãàð Ñèììîíñà (ñðåäó ¹ 14) è ñîåâî-êàçåèíî- âûé áóëüîí (ñðåäó ¹ 15). ×åðåç 18 – 24 ÷ èíêó- áàöèè îòìå÷àþò ðîñò áàêòåðèé èëè åãî îòñóòñò- âèå íà àãàðå Ñèììîíñà (ñðåäå ¹ 14). Óòèëèçà- öèþ öèòðàòà óñòàíàâëèâàþò ïî ñìåùåíèþ ðÍ ñðåäû â ùåëî÷íóþ ñòîðîíó (èçìåíåíèþ öâå- òà ñðåäû ñ çåëåíîãî íà ñèíèé). Íàëè÷èå èíäîëà îïðåäåëÿþò ïî ïîÿâëåíèþ êðàñíîãî êîëüöà íà ïîâåðõíîñòèñîåâî-êàçåèíîâîãî áóëüîíà (ñðåäû ¹ 15) ïðè äîáàâëåíèè ðåàêòèâà Êîâà÷à. Åñëè â õîäå èññëåäîâàíèÿ îáíàðóæèâàþò òè- ïè÷íûå ãðàìîòðèöàòåëüíûå ïàëî÷êè, íå ñîäåð- æàùèå ôåðìåíò öèòîõðîìîêñèäàçó, íå óòèëèçè- ðóþùèå íàòðèÿ öèòðàò è îáðàçóþùèå èíäîë, ñ÷èòàþò, ÷òî îáðàçåö êîíòàìèíèðîâàí áàêòåðèÿ- ìè E. coli. 3-2-2. Êîëè÷åñòâåííîå îïðåäåëåíèå áàêòå- ðèé E. coli. Ìåòîä 1. Êîëè÷åñòâåííîå îïðåäåëåíèå E. coli ïðîâîäÿò òàê æå, êàê è êîëè÷åñòâåííîå îïðåäåëåíèå ýíòåðîáàêòåðèé, óñòîé÷èâûõ ê æåë÷è (ï. 3-1-2), äåëàÿ ïåðåñåâ èç ãîìîãåíàòà À â ïðîáèðêè ñ áóëüîíîì Ìàê-Êîíêè (ñðåäîé ¹ 3), èíêóáèðóþò ïðè (43 ± 1) °Ñ 24 – 48 ÷. Èç êàæäîé ïðîáèðêè äåëàþò ïåðåñåâ áàêòåðèîëî- ãè÷åñêîé ïåòëåé íà àãàð Ìàê-Êîíêè (ñðåäó ¹ 4). Ïîñåâû èíêóáèðóþò ïðè òåìïåðàòóðå â òå÷åíèå 18 – 48 ÷ (àãàð Ìàê-Êîíêè) èëè 18 – 24 ÷ (ñðåäà ¹ 4). Ìåòîä 2. Ãîòîâÿò îáðàçåö ñ èñïîëüçîâàíèåì ðàçâåäåíèÿ 1:10 èç íå ìåíåå 1 ã (ìë) èñïûòóåìî- ãî ïðîäóêòà òàê, êàê óêàçàíî â ñòàòüå 2.1.6.6. Äëÿ ïîñåâà èñïîëüçóþò 3 ïðîáèðêè ñ 9 ìë ñî- åâî-êàçåèíîâîãî áóëüîíà (ñðåäû ¹ 8), â êîòîðûå âíîñÿò ïî 1 ìë ðàçâåäåíèÿ îáðàçöà, ñîîòâåòñò- âóþùåãî 0,1; 0,01 è 0,001 ã (ìë). Ïåðåìåøèâàþò è èíêóáèðóþò â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ â òå÷å- íèå 18 – 24 ÷. Ïî èñòå÷åíèå ñðîêà èíêóáàöèè ïî 1 ìë ñîäåðæèìîãî ïðîáèðîê ïåðåíîñÿò â 100 ìë áóëüîíà Ìàê-Êîíêè è èíêóáèðóþò ïðè òåìïåðà- òóðå (43 ± 1) °Ñ â òå÷åíèå 24 – 48 ÷. Äåëàþò ïå- ðåñåâ íà àãàð Ìàê-Êîíêè. Ïîñåâû èíêóáèðóþò â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ â òå÷åíèå 18 – 72 ÷. Ïðè îáíàðóæåíèè íà óêàçàííûõ ñðåäàõ òè- ïè÷íûõ êîëîíèé áàêòåðèé (òàáë.2.1.6.7.-2), ïî ìîðôîëîãè÷åñêèì è òèíêòîðèàëüíûì ñâîéñò- âàì ïðåäñòàâëÿþùèõ ñîáîé ãðàìîòðèöàòåëüíûå ïàëî÷êè, êîòîðûå íå ñîäåðæàò ôåðìåíò öèòî- õðîìîêñèäàçó, íå óòèëèçèðóþò íàòðèÿ öèòðàò è îáðàçóþò èíäîë, äåëàþò âûâîä, ÷òî ËÑ êîíòà- ìèíèðîâàíî áàêòåðèÿìè E. coli. Íàèáîëåå âåðî- ÿòíîå êîëè÷åñòâî êëåòîê E. coli â 1 ã èëè â 1 ìë èñïûòóåìîãî îáðàçöà îïðåäåëÿþò ïî òàáë.2.1.6.7.-1. 3-3. ÁÀÊÒÅÐÈÈ ÐÎÄÀ SALMONELLA Ïåðåíîñÿò 10 ã (ìë) èëè 25 ã (ìë) èñïûòóå- ìîãî îáðàçöà â 100 èëè 225 ìë ñîåâî-êàçåèíîâî- ãî áóëüîíà (èëè ñðåäû ¹ 8), ïåðåìåøèâàþò è 240 Òàáëèöà 2.1.6.7.-1. — Èíòåðïðåòàöèÿ ðåçóëüòàòîâ Êîëè÷åñòâî èñïûòóåìîãî îáðàçöà ÍÂ× áàêòåðèé â 1 ã (ìë) îáðàçöà 0,1 ã (ìë) 0,01 ã (ìë) 0,001 ã (ìë) 1 ìë ãîìî- ãåíàòà À 1 ìë ãîìîãåíà- òà À â ðàçâåäå- íèè 1:10 1 ìë ãîìîãåíà- òà À â ðàçâåäå- íèè 1:100 + + + áîëåå 103 + + – îò 102 äî 103 + – – îò 101 äî 102 – – – ìåíåå 101 Îáîçíà÷åíèÿ: + — íàëè÷èå ðîñòà; – — îòñóòñòâèå ðîñòà. èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 18 – 24 ÷. Ïîñëå ïåðåìå- øèâàíèÿ 0,1 ìë ïåðåíîñÿò â 10 ìë íàêîïèòåëü- íîãî áóëüîíà äëÿ áàêòåðèé ðîäà Salmonella — ñðåäó Ðàïïîïîðòà – Âàññèëèàäèñà è èíêóáèðó- þò â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ â òå÷åíèå 18 – 24 ÷.
Ïî îêîí÷àíèè èíêóáàöèè äåëàþò ïåðåñåâ áàêòå- ðèîëîãè÷åñêîé ïåòëåé íà îäíó èç äâóõ ïëîòíûõ äèàãíîñòè÷åñêèõ ñðåä: êñèëîçà-ëèçèí-äåçîêñè- õîëàò àãàð èëè âèñìóò-ñóëüôèòíûé àãàð (ñðåäà ¹ 5), êîòîðûå çàòåì èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 48 ÷. Ïðè âûÿâëåíèè íà óêàçàííûõ ñðåäàõ êîëî- íèé, òèïè÷íûõ äëÿ áàêòåðèé ðîäà Salmonella (òàáë. 2.1.6.7.-2), ïðîâîäÿò ìèêðîñêîïè÷åñêîå èññëåäîâàíèå. Ïðè îáíàðóæåíèè â ìàçêàõ ãðà- ìîòðèöàòåëüíûõ ïàëî÷åê õàðàêòåðíûå êîëîíèè ïåðåñåâàþò íà ñêîøåííûé òðåõñàõàðíûé àãàð ñ ñîëÿìè æåëåçà (èëè ñðåäó ¹ 13), íàíîñÿ áîëü- øîå êîëè÷åñòâî êóëüòóðû áàêòåðèîëîãè÷åñêîé ïåòëåé ñíà÷àëà íà ñêîøåííóþ ÷àñòü àãàðà, à ïî- òîì óêîëîì â ñòîëáèê, íå êàñàÿñü äíà ïðîáèðêè. ×åðåç 24 ÷ èíêóáàöèè â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ îòìå÷àþò èçìåíåíèå öâåòà ñðåäû èç êðàñíîãî â æåëòûé â îñíîâàíèè ñòîëáèêà ïèòàòåëüíîé ñðå- äû (ôåðìåíòàöèÿ ãëþêîçû).  ñêîøåííîé ÷àñòè àãàðà öâåò ñðåäû íå èçìåíÿåòñÿ (îòñóòñòâèå ôåðìåíòàöèè ñàõàðîçû è ëàêòîçû). Ïî÷åðíåíèå ñðåäû ñâèäåòåëüñòâóåò îá îáðàçîâàíèè ñåðîâî- äîðîäà — òèïè÷íîì ïðèçíàêå áîëüøèíñòâà áàê- òåðèé ðîäà Salmonella. Ïàðàëëåëüíî ïðîâîäÿò îïðåäåëåíèå íàëè÷èÿ ôåðìåíòà öèòîõðîìîêñè- äàçû (ï. 4-1), à òàêæå äðóãèå áèîõèìè÷åñêèå è ñåðîëîãè÷åñêèå òåñòû â ñëó÷àå íåîáõîäèìîñòè äîïîëíèòåëüíîãî ïîäòâåðæäåíèÿ. Åñëè â èñïûòóåìîì îáðàçöå îáíàðóæåíû áàêòåðèè, òèïè÷íûå ïî ñâîèì êóëüòóðàëüíûì, ìîðôîëîãè÷åñêèì è òèíêòîðèàëüíûì ñâîéñò- âàì (òàáë. 2.1.6.7.-2), íå ñîäåðæàùèå ôåðìåíò öèòîõðîìîêñèäàçó, íå ôåðìåíòèðóþùèå ñàõàðî- çó è ëàêòîçó è âûäåëÿþùèå ñåðîâîäîðîä, ñ÷èòà- þò, ÷òî îáðàçåö êîíòàìèíèðîâàí áàêòåðèÿìè ðîäà Salmonella. 3-4. ÁÀÊÒÅÐÈÈ PSEUDOMONAS AERUGINOSA Èñïûòóåìûé îáðàçåö, ðàñòâîðåííûé èëè ðàçáàâëåííûé ñòåðèëüíûì áóôåðíûì ðàñòâî- ðîì 1:10, ïåðåíîñÿò â êîëè÷åñòâå 10 ìë (ñîîò- âåòñòâóåò 1 ã èëè 1 ìë) â 100 ìë æèäêîé ïèòà- òåëüíîé ñðåäû (ñîåâî-êàçåèíîâîãî áóëüîíà èëè ñðåäû ¹ 8). Ïåðåìåøèâàþò è èíêóáèðóþò â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ â òå÷åíèå 24 – 48 ÷. Ïî- ñëå îêîí÷àíèÿ èíêóáàöèè ïðîèçâîäÿò ïåðåñåâ áàêòåðèîëîãè÷åñêîé ïåòëåé íà ñåëåêòèâíóþ ïè- òàòåëüíóþ ñðåäó äëÿ âûäåëåíèÿ ñèíåãíîéíîé ïàëî÷êè (öåòðèìèäíûé àãàð èëè öåòèëïèðèäè- íèé õëîðèä (ÖÏÕ) àãàð – ñðåäà ¹ 16). Ïîñåâû èíêóáèðóþò â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ â òå÷åíèå 24 – 48 ÷. Âûäåëåííûå êîëîíèè ìèêðîîðãàíèç- ìîâ, êîòîðûå ïî ñâîèì òèíêòîðèàëüíûìè ìîð- ôîëîãè÷åñêèì ñâîéñòâàì ÿâëÿþòñÿ ãðàìîòðèöà- òåëüíûìè ïàëî÷êàìè, ïåðåñåâàþò íà àãàð äëÿ âûÿâëåíèÿ ñèíå-çåëåíîãî ïèãìåíòà ïèîöèàíèíà (èëè ñðåäó ¹ 9). Ïîñåâû èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 24 – 48 ÷. Äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ âèäîâîé ïðèíàäëåæíî- ñòè âûäåëåííûõ áàêòåðèé ê P. aeruginosa îïðå- äåëÿþò íàëè÷èå ôåðìåíòà öèòîõðîìîêñèäàçû (ï. 4 – 1) è ñïîñîáíîñòü âûäåëåííûõ ìèêðîîð- ãàíèçìîâ ðàñòè íà ñîåâî-êàçåèíîâîì áóëüîíå (èëè ñðåäå ¹ 8) ïðè òåìïåðàòóðå (42 ± 1) °Ñ â òå÷åíèå 18 – 24 ÷. Ïðîáîïîäãîòîâêó òðàíñäåðìàëüíûõ ïëàñòû- ðåé ïðîâîäÿò, êàê óêàçàíî â 2.1.6.6. Ïîëó÷åííóþ æèäêîñòü â êîëè÷åñòâå 50 ìë ïðîïóñêàþò ÷åðåç ñòåðèëüíûé ìåìáðàííûé ôèëüòð èç íèòðàò-öåëëþëîçû ñ äèàìåòðîì ïîð 0,45 ìêì, êîòîðûé çàòåì ïåðåíîñÿò â 100 ìë ñî- åâî-êàçåèíîâîãî áóëüîíà (èëè ñðåäû ¹ 8). Ïî- ñåâû èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 24 – 48 ÷. Ïîñëå èí- êóáàöèè ïðè íàëè÷èè ðîñòà ïðîèçâîäÿò ïåðåñåâ áàêòåðèîëîãè÷åñêîé ïåòëåé íà ñåëåêòèâíûå ñðåäû — öåòðèìèäíûé àãàð èëè ÖÏÕ-àãàð. Äàëüíåéøóþ èäåíòèôèêàöèþ ïðîâîäÿò, êàê óêàçàíî âûøå. Åñëè â èñïûòóåìîì îáðàçöå îáíàðóæåíû áàêòåðèè, òèïè÷íûå äëÿ ïñåâäîìîíàä ïî ñâîèì ìîðôîëîãè÷åñêèì è òèíêòîðèàëüíûì ñâîéñò- âàì (òàáë. 2.1.6.7.-2), îáðàçóþùèå ñèíå-çåëåíûé ïèãìåíò ïèîöèàíèí, ñîäåðæàùèå ôåðìåíò öèòî- õðîìîêñèäàçó è ðàñòóùèå ïðè òåìïåðàòóðå (42 ± 1) °Ñ, ñ÷èòàþò, ÷òî îáðàçåö êîíòàìèíèðî- âàí áàêòåðèÿìè P. aeruginosa. 3-5.
ÁÀÊÒÅÐÈÈ STAPHYLOCOCCUS AUREUS Èñïûòóåìûé îáðàçåö, ðàñòâîðåííûé èëè ðàçáàâëåííûé ñòåðèëüíûì áóôåðíûì ðàñòâî- ðîì 1:10, ïåðåíîñÿò â êîëè÷åñòâå 10 ìë (÷òî ñî- îòâåòñòâóåò 1 ã èëè 1 ìë îáðàçöà) â 100 ìë ñî- åâî-êàçåèíîâîãî áóëüîíà èëè ñðåäû ¹ 8. Ïåðå- ìåøèâàþò è èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 24 – 48 ÷. Äåëàþò ïåðåñåâ ïåòëåé íà ìàííèòíî-ñîëåâîé àãàð (èëè ñðåäó ¹ 10) è èíêóáèðóþò â ñòàíäàðò- íûõ óñëîâèÿõ â òå÷åíèå 24 – 48 ÷. 241 Ïîÿâëåíèå ïîñëå îêîí÷àíèÿ èíêóáàöèè òèïè÷- íûõ çîëîòèñòî-æåëòûõ êîëîíèé (òàáë. 2.1.6.7.-2), îêðóæåííûõ æåëòûìè çîíàìè íà ñðåäå ñ ìàííè- òîì, ñâèäåòåëüñòâóåò î ðîñòå S. aureus, ôåðìåí- òèðóþùåì ìàííèò. Ïðîâîäÿò ìèêðîñêîïè÷å- ñêîå èññëåäîâàíèå òèïè÷íûõ êîëîíèé. Ïðè îá- íàðóæåíèè â ìàçêàõ ãðàìïîëîæèòåëüíûõ êîêêîâ, ðàñïîëîæåííûõ â âèäå âèíîãðàäíûõ ãðîçäåé, ïðîèçâîäÿò ïåðåñåâ íà ñîåâî-êàçåèíî- âûé àãàð (èëè ñðåäó ¹ 1). Èíêóáèðóþò â ñòàí- äàðòíûõ óñëîâèÿõ â òå÷åíèå 18 – 24 ÷. Äëÿ èäåíòèôèêàöèè ïðîâîäÿò òåñò íà íàëè÷èå êîàãó- ëàçû (ï. 4 – 3). Ïðîáîïîäãîòîâêó òðàíñäåðìàëüíûõ ïëàñòû- ðåé ïðîâîäÿò, êàê óêàçàíî â ÎÔÑ 2.1.6.6. Ïîëó÷åííóþ æèäêîñòü â îáúåìå 50 ìë ïðî- ïóñêàþò ÷åðåç ñòåðèëüíûé ìåìáðàííûé ôèëüòð èç íèòðàòà öåëëþëîçû ñ äèàìåòðîì ïîð 0,45 ìêì, êîòîðûé çàòåì ïåðåíîñÿò â 100 ìë ñî- åâî-êàçåèíîâîãî áóëüîíà (èëè ñðåäû ¹ 8) è èí- êóáèðóþò â òå÷åíèå 24 – 48 ÷. Ïîñëå èíêóáàöèè ïðè íàëè÷èè ðîñòà ïåðåñåâàþò ïåòëåé íà ìàí- íèòíî-ñîëåâîé àãàð (èëè ñðåäó ¹ 10) äëÿ âûäå- ëåíèÿ S. àureus. Ïîñåâû èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 48 ÷. Åñëè â èñïûòóåìîì îáðàçöå îáíàðóæåíû òè- ïè÷íûå ïî êóëüòóðàëüíûì, ìîðôîëîãè÷åñêèì è òèíêòîðèàëüíûì ñâîéñòâàì áàêòåðèè (òàáë. 2.1.6.7.-2), ñîäåðæàùèå êîàãóëàçó, óòèëè- çèðóþùèå ìàííèò, ñ÷èòàþò, ÷òî îáðàçåö êîíòà- ìèíèðîâàí S. aureus. 3-6. ÄÐÎÆÆÅÂÛÅ ÃÐÈÁÛ CANDIDA ALBICANS Èñïûòóåìûé îáðàçåö, ðàñòâîðåííûé èëè ðàçáàâëåííûé ñòåðèëüíûì áóôåðíûì ðàñòâî- ðîì 1:10, ïåðåíîñÿò â êîëè÷åñòâå 10 ìë (÷òî ñî- îòâåòñòâóåò 1 ã èëè 1 ìë îáðàçöà) â 100 ìë áóëü- îíà Ñàáóðî, ïåðåìåøèâàþò è èíêóáèðóþò â òå- ÷åíèå 3 – 5 ñóò ïðè òåìïåðàòóðå (32,5 ± 2,5) °Ñ. Äåëàþò ïåðåñåâ áàêòåðèîëîãè÷åñêîé ïåòëåé íà àãàð Ñàáóðî ñ ãëþêîçîé (èëè ñðåäó ¹ 2) è èíêó- áèðóþò â òå÷åíèå 24 – 48 ÷ ïðè òîé æå òåìïåðà- òóðå. Ðîñò áåëûõ êðóãëûõ, âûïóêëûõ, ãëàäêèõ è áëåñòÿùèõ êîëîíèé ìîæåò óêàçûâàòü íà íàëè- ÷èå Candida albicans, ÷òî ïîäòâåðæäàþò â õîäå äàëüíåéøåé èäåíòèôèêàöèè, îäíèì èç ýòàïîâ êîòîðîé ÿâëÿåòñÿ ìèêðîñêîïè÷åñêîå èññëåäîâà- íèå (îêðàñêà ïî Ãðàìó), âûÿâëÿþùåå ãðàìïîëî- æèòåëüíûå äðîææåïîäîáíûå ïî÷êóþùèåñÿ îâàëüíûå èëè îêðóãëûå êëåòêè ðàçìåðîì 4 – 8 ìêì. Äëÿ èäåíòèôèêàöèè âîçìîæíî èñ- ïîëüçîâàòü ñïåöèàëüíóþ ñðåäó, ïðåäíàçíà÷åí- íóþ äëÿ äèôôåðåíöèàöèè C. albicans è äðóãèõ âèäîâ ãðèáîâ ðîäà Candida. Åñëè â èñïûòóåìîì îáðàçöå îáíàðóæåíû òè- ïè÷íûå ïî ìîðôîëîãè÷åñêèì è òèíêòîðèàëü- íûì ñâîéñòâàì äðîææåïîäîáíûå ãðèáû (òàáë. 2.1.6.7.-2), èäåíòèôèöèðîâàííûå êàê C. albicans, ñ÷èòàþò, ÷òî îáðàçåö êîíòàìèíèðî- âàí óêàçàííûì âèäîì ãðèáîâ. 3-7. ÊÓËÜÒÓÐÀËÜÍÛÅ, ÌÎÐÔÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÅ È ÒÈÍÊÒÎÐÈÀËÜÍÛÅ ÑÂÎÉÑÒÂÀ ÌÈÊÐÎÎÐÃÀÍÈÇÌΠÕàðàêòåðíûå êóëüòóðàëüíûå, ìîðôîëîãè÷å- ñêèå è òèíêòîðèàëüíûå ñâîéñòâà íåêîòîðûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ (âîçìîæíûõ êîíòàìèíàíòîâ ËÑ) ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 2.1.6.7.-2. 3-8. ÏÎÂÒÎÐÅÍÈÅ ÈÑÏÛÒÀÍÈß Â ñëó÷àå íåîáõîäèìîñòè ïðè âûÿâëåíèè êîíòàìèíàöèè ËÑ ïîâòîðÿþò òîò ðàçäåë èñïû- òàíèÿ, ðåçóëüòàòû êîòîðîãî íå ñîîòâåòñòâóþò òðåáîâàíèÿì íîðìàòèâíîãî äîêóìåíòà ïî êà÷å- ñòâó. Àíàëèç ïðîâîäÿò íà óäâîåííîì êîëè÷åñòâå èñïûòóåìûõ îáðàçöîâ ïðåïàðàòà. 4. ÁÈÎÕÈÌÈ×ÅÑÊÈÅ ÒÅÑÒÛ ÄËß ÈÄÅÍÒÈÔÈÊÀÖÈÈ ÌÈÊÐÎÎÐÃÀÍÈÇÌΠ4-1. ÒÅÑÒ ÍÀ ÍÀËÈ×ÈÅ ÔÅÐÌÅÍÒÀ ÖÈÒÎÕÐÎÌÎÊÑÈÄÀÇÀ (ÎÊÑÈÄÀÇÍÛÉ ÒÅÑÒ) Ðåàêòèâ — 1 % ðàñòâîð N,N-äèìåòèë-ïà- ðà-ôåíèëåíäèàìèíàäèãèäðîõëîðèäà.
Ðàñòâîð õðàíÿò ïðè òåìïåðàòóðå 2 – 8 °Ñ âî ôëàêîíàõ èç íåéòðàëüíîãî ñâåòîçàùèòíîãî ñòåêëà â òå÷åíèå óñòàíîâëåííîãî âàëèäèðîâàííîãî ñðîêà ãîäíî- ñòè. Ðàñòâîð äîëæåí áûòü áåñöâåòíûì. Ïîëîñêó ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãè ñìà÷èâàþò ðåàêòèâîì. Ïëàòèíîâîé ïåòëåé èëè ñòåêëÿííîé ïàëî÷êîé íàíîñÿò 24-÷àñîâóþ ÷èñòóþ êóëüòóðó èññëåäóåìûõ áàêòåðèé, âûðîñøèõ íà ñîåâî-êà- çåèíîâîì àãàðå (èëè ñðåäå ¹ 1). Òåìíî-êðàñíîå îêðàøèâàíèå, ïîÿâëÿþùååñÿ â òå÷åíèå 1 ìèí, ñâèäåòåëüñòâóåò î ïîëîæèòåëüíîé îêñèäàçíîé ðåàêöèè. Ïîëîæèòåëüíûì êîíòðîëåì ñëóæèò òåñò-ìèêðîîðãàíèçì P. aeruginosa, îòðèöàòåëü- 242 íûì — òåñò-ìèêðîîðãàíèçì E. coli (îêðàñêà îò- ñóòñòâóåò). 4-2. ÒÅÑÒ ÍÀ ÍÀËÈ×ÈÅ ÈÍÄÎËÀ Ðåàêòèâ Êîâà÷à: l Ñïèðòà àìèëîâîãî èëè èçîàìèëîâîãî 75 ìë l ïàðà-äèìåòèëàìèíîáåíç- àëüäåãèäà 5 ã l Õëîðèñòîâîäîðîäíîé êèñëîòû, êîíöåíòðèðîâàííîé 20 ìë Ñîîòâåòñòâóþùåå êîëè÷åñòâî ïàðà-äèìåòè- ëàìèíîáåíçàëüäåãèäà ðàñòâîðÿþò â èçîàìèëî- âîì èëè àìèëîâîì ñïèðòå ïðè íàãðåâàíèè íà âî- äÿíîé áàíå ïðè òåìïåðàòóðå (52,5 ± 2,5) °Ñ, îñòóæàþò è ïî êàïëÿì ïðèáàâëÿþò õëîðèñòîâî- äîðîäíóþ êèñëîòó. Ðàñòâîð õðàíÿò â çàùèùåí- íîì îò ñâåòà ìåñòå ïðè òåìïåðàòóðå 2 – 8 °Ñ. Ðå- àêòèâ äîëæåí áûòü æåëòîãî öâåòà. Ïðè íåïðà- 243 Òàáëèöà 2.1.6.7.-2. — Êóëüòóðàëüíûå, ìîðôîëîãè÷åñêèå è òèíêòîðèàëüíûå ñâîéñòâà ìèêðîîðãàíèçìîâ Ïèòàòåëüíûå ñðåäû Ìîðôîëîãèÿ êîëîíèé Îêðàñêà ïî Ãðàìó Escherichia coli Áóëüîí Ìàê-Êîíêè Îáåñöâå÷èâàíèå ñðåäû, ïîìóòíåíèå, ãàçîîáðàçîâàíèå ãðàìîòðèöàòåëüíûå ïàëî÷êè, íå èìåþùèå ñïîð Ñðåäà ¹ 3 Èçìåíåíèå îêðàñêè ñðåäû, ãàçîîáðàçîâàíèå Àãàð Ìàê-Êîíêè Êèðïè÷íî-êðàñíûå êîëîíèè, ìîãóò áûòü îêðóæåíû çîíà- ìè âûïàâøåé â îñàäîê æåë÷è Ñðåäà ¹ 4 Ìàëèíîâûå èëè ðîçîâûå êîëîíèè ñ ìåòàëëè÷åñêèì áëå- ñêîì, îêðóæåííûå çîíàìè ìàëèíîâîãî öâåòà Àãàð Ìîññåëÿ Êðàñíûå êîëîíèè, îêðóæåííûå êðàñíûìè çîíàìè ïðåöè- ïèòàöèè Salmonella spp. Áóëüîí Ðàïïîïîðòà – Âàññèëèàäèñà Ïîìóòíåíèå ñðåäû ïðè ñîõðàíåíèè öâåòà èëè îòñóòñòâèå âèäèìîãî ðîñòà ãðàìîòðèöàòåëüíûå ïàëî÷êè, íå èìåþùèå ñïîðÊñèëîçà-ëèçèí-äåçîêñè- õîëàò àãàð Êðàñíûå êîëîíèè ñ ÷åðíûì öåíòðîì èëè áåç íåãî Âèñìóò-ñóëüôèò àãàð (èëè ñðåäà ¹ 5) ×åðíûå êîëîíèè ñ àíòðàöèòîâûì áëåñêîì, ñðåäà ïîä êî- ëîíèÿìè îêðàøåíà â ÷åðíûé öâåò Àãàð Ìîññåëÿ Êðàñíûå êîëîíèè, îêðóæåííûå êðàñíûìè çîíàìè ïðåöè- ïèòàöèè Pseudomonas aeruginosa Ñîåâî-êàçåèíîâûé áóëüîí (ñðåäà ¹ 8) Ïîìóòíåíèå, ïîâåðõíîñòíûé ðîñò â âèäå ïëåíêè ãðàìîòðèöàòåëüíûå ïàëî÷êè, íå èìåþùèå ñïîðÖåòðèìèäíûé àãàð Çåëåíîâàòûå êîëîíèè, çåëåíûå â ÓÔ ñâåòå Ñðåäà ¹ 16 (ÖÏÕ-àãàð) Çåëåíîâàòûå êîëîíèè, çåëåíûå â ÓÔ ñâåòå Àãàð äëÿ âûÿâëåíèÿ ïèîöèàíèíà, ñðåäà ¹ 9 Ñèíå-çåëåíûå êîëîíèè, ñèíå-çåëåíûå â ÓÔ ñâåòå Staphylococcus aureus Ñîåâî-êàçåèíîâûé áóëüîí (ñðåäà ¹ 8) Ðàâíîìåðíîå ïîìóòíåíèå ãðàìïîëîæèòåëüíûå êîêêè â âèäå ãðîçäåé Ìàííèòíî-ñîëåâîé àãàð (èëè ñðåäà ¹ 10) Çîëîòèñòî-æåëòûå êîëîíèè, îêðóæåííûå æåëòûìè çîíà- ìè Staphylococcus epidermidis Ìàííèòíî-ñîëåâîé àãàð (èëè ñðåäà ¹ 10) Áåëûå êîëîíèè, îòñóòñòâèå æåëòûõ çîí âîêðóã êîëîíèé ãðàìïîëîæèòåëüíûå êîêêè â âèäå ãðîçäåé Candida albicans Áóëüîí Ñàáóðî Ïðèäîííûé ðîñò ãðàìïîëîæèòåëüíûå äðîææåïîäîáíûå ïî÷- êóþùèåñÿ îâàëüíûå èëè êðóãëûå êëåòêè ðàçìåðîì 4–8 ìêì Ñàáóðî àãàð (ñðåäà ¹ 2) Áåëûå, êðóãëûå, âûïóêëûå, ãëàäêèå è áëåñòÿùèå êîëî- íèè âèëüíîì õðàíåíèè öâåò ðåàêòèâà ñòàíîâèòñÿ êîðè÷íåâûì, è ðåàêòèâ ñòàíîâèòñÿ íåïðèãîä- íûì äëÿ èñïîëüçîâàíèÿ.  ïðîáèðêó ñ ñîåâî-êàçåèíîâûì áóëüîíîì, â êîòîðîé âûðîñëà èññëåäóåìàÿ ñóòî÷íàÿ êóëüòó- ðà, âíîñÿò 0,5 ìë ðåàêòèâà Êîâà÷à è ñëåãêà âñòðÿõèâàþò. ×åðåç 3 – 5 ìèí ïðè íàëè÷èè èí- äîëà íàáëþäàþò ïîÿâëåíèå êðàñíîãî êîëüöà íà ïîâåðõíîñòè ñðåäû â ïðîáèðêå. Ïîëîæèòåëü- íûì êîíòðîëåì ÿâëÿåòñÿ òåñò-ìèêðîîðãàíèçì E. coli, îòðèöàòåëüíûì — òåñò-øòàìì S.
abony (îêðàñêà îòñóòñòâóåò). 4-3. ÒÅÑÒ ÍÀ ÍÀËÈ×ÈÅ ÔÅÐÌÅÍÒÀ ÊÎÀÃÓËÀÇÛ (ÐÅÀÊÖÈß ÏËÀÇÌÎÊÎÀÃÓËßÖÈÈ) Ñóõóþ öèòðàòíóþ êðîëè÷üþ ïëàçìó ðàçâî- äÿò ñîãëàñíî ïðèëîæåííîé èíñòðóêöèè 0,9 % ñòåðèëüíûì ðàñòâîðîì íàòðèÿ õëîðèäà è ðàçëè- âàþò ïî 0,5 ìë â ñòåðèëüíûå ïðîáèðêè. Âíîñÿò â ïðîáèðêó ñ âîññòàíîâëåííîé êðîëè÷üåé ïëàç- ìîé 1 ïåòëþ ñóòî÷íîé ÷èñòîé êóëüòóðû âûäå- ëåííûõ áàêòåðèé, âûðàùåííûõ íà ñîåâî-êàçåè- íîâîì àãàðå (èëè íà ñðåäå ¹ 1). Âòîðóþ ïðî- áèðêó íå èíîêóëèðóþò (îòðèöàòåëüíûé êîí- òðîëü). Ïîëîæèòåëüíûì êîíòðîëåì ñëóæèò òåñò-øòàìì S. aureus, îòðèöàòåëüíûì — òåñò-øòàìì S. epidermidis. Âñå ïðîáèðêè èíêó- áèðóþò â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ. Ðåàêöèþ ïëàç- ìîêîàãóëÿöèè îòìå÷àþò ÷åðåç êàæäûé ÷àñ â òå- ÷åíèå 4 – 6 ÷, ñëåãêà íàêëîíÿÿ ïðîáèðêó, íå âñòðÿõèâàÿ åå. Ïðè îòñóòñòâèè ïîëîæèòåëüíîé ðåàêöèè ïëàçìîêîàãóëÿöèè óäëèíÿþò âðåìÿ èíêóáàöèè äî 24 ÷ äëÿ ïîëó÷åíèÿ îêîí÷àòåëüíûõ ðåçóëüòà- òîâ. Òåñò íà íàëè÷èå êîàãóëàçû ñ÷èòàåòñÿ ïîëî- æèòåëüíûì ïðè îáíàðóæåíèè ñãóñòêà ïëàçìû. 5. ÎÖÅÍÊÀ ÊÀ×ÅÑÒÂÀ ÏÈÒÀÒÅËÜÍÛÕ ÑÐÅÄ Äëÿ êàæäîé ñåðèè êîììåð÷åñêîé ñðåäû (ñó- õîé è ãîòîâîé ê èñïîëüçîâàíèþ), à òàêæå äëÿ êà- æäîé ïàðòèè ñðåäû, èçãîòîâëåííîé â ëàáîðàòî- ðèè, ïðîâîäÿò îïðåäåëåíèå ðîñòîâûõ, ñåëåêòèâ- íûõ è äèàãíîñòè÷åñêèõ ñâîéñòâ. Îñíîâíûìè áèîëîãè÷åñêèìè êðèòåðèÿìè êà÷åñòâà ïèòàòåëüíûõ ñðåä ÿâëÿþòñÿ èõ ðîñòî- âûå è ñåëåêòèâíûå ñâîéñòâà, îïðåäåëÿåìûå ñ ïîìîùüþ ìèêðîîðãàíèçìîâ è àòòåñòîâàííûõ ïèòàòåëüíûõ ñðåä, â êà÷åñòâå êîòîðûõ èñïîëüçó- þò ãîòîâûå ê óïîòðåáëåíèþ ñðåäû ñ ñåðòèôèêà- òîì ïðîèçâîäèòåëÿ èëè ðàíåå àòòåñòîâàííûå â ëàáîðàòîðèè ñðåäû âûñîêîãî êà÷åñòâà. Ðîñòîâûå ñâîéñòâà ïèòàòåëüíîé ñðåäû (ýòî ñïîñîáíîñòü ïèòàòåëüíîé ñðåäû îáåñïå÷èâàòü ýôôåêòèâíûé è òèïè÷íûé ðîñò ñîîòâåòñòâóþ- ùèõ òåñò-øòàììîâ ìèêðîîðãàíèçìîâ. Ñåëåêòèâíûå ñâîéñòâà (ýòî ñïîñîáíîñòü ïè- òàòåëüíîé ñðåäû ïîäàâëÿòü ðîñò ñîïóòñòâóþ- ùèõ ìèêðîîðãàíèçìîâ èç ìèêðîáíîé àññîöèà- öèè. Òåñò-ìèêðîîðãàíèçìû, øòàììû-àññîöèàíòû è óñëîâèÿ èíêóáàöèè äëÿ îïðåäåëåíèÿ ðîñòîâûõ è ñåëåêòèâíûõ ñâîéñòâ ïèòàòåëüíûõ ñðåä ïðåä- ñòàâëåíû â òàáë. 2.1.6.7.-3. 5-1. ÐÎÑÒÎÂÛÅ ÑÂÎÉÑÒÂÀ ÏÈÒÀÒÅËÜÍÛÕ ÑÐÅÄ 5-1-1. Ïðèãîòîâëåíèå ðàáî÷åé âçâåñè òåñò-ìèêðîîðãàíèçìîâ. Êóëüòóðû áàêòåðèé è ãðèáîâ C. albicans ñìûâàþò ñ ïîâåðõíîñòè ñêî- øåííîãî àãàðà ñòåðèëüíûì 0,9 % ðàñòâîðîì íà- òðèÿ õëîðèäà. Ãîòîâÿò ñòàíäàðòíûå âçâåñè êàæ- äîãî òåñò-øòàììà, ñîîòâåòñòâóþùèå 10 ÌÅ ïî ñòàíäàðòíîìó îáðàçöó ìóòíîñòè. Äëÿ êóëüòóð B. subtilis, B. cereus è C. albicans — ýòî êîíöåí- òðàöèÿ 107 ÊÎÅ/ìë, äëÿ E. coli, S. abony, P. aeruginosa, S. aureus — 109 ÊÎÅ/ìë. Ñòàíäàð- òèçîâàííûå âçâåñè ìåòîäîì ïîñëåäóþùèõ äåñÿ- òèêðàòíûõ ðàçâåäåíèé äîâîäÿò ñòåðèëüíûì 0,9 % ðàñòâîðîì íàòðèÿ õëîðèäà äî êîíöåíòðà- öèè 103 ÊÎÅ/ìë. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ôàêòè÷åñêîé êîíöåíòðàöèè ðàáî÷èõ âçâåñåé áàêòåðèé è C. albicans êóëüòóðû âûñåâàþò ïîâåðõíîñòíûì ìåòîäîì èç êîíöåíòðàöèè 103 ÊÎÅ/ìë ïî 0,1 ìë íà ÷àøêó Ïåòðè ñ ñîîòâåòñòâóþùåé àòòåñòîâàí- íîé àãàðèçîâàííîé ñðåäîé. Äëÿ ñìûâà êîíèäèé A. brasiliensis ñ àãàðà Ñàáóðî ñ ãëþêîçîé èñïîëüçóþò ñòåðèëüíûé 0,9 % ðàñòâîð íàòðèÿ õëîðèäà, ñîäåðæàùèé 0,05 % ïîëèñîðáàòà-80. Êîëè÷åñòâî êîíèäèé â 1ìë âçâåñè îïðåäåëÿþò ñ ïîìîùüþ êàìåðû Ãî- ðÿåâà èëè ïîñåâîì ïîäõîäÿùåãî ðàçâåäåíèÿ íà àòòåñòîâàííûé àãàð Ñàáóðî ñ ãëþêîçîé èëè ñðå- äó ¹ 2. Äëÿ ïîñåâà ãîòîâÿò ðàáî÷óþ âçâåñü A. bra- siliensis ñ êîíöåíòðàöèåé êîíèäèé îêîëî 0,5·103 â 1 ìë, êîòîðóþ âûñåâàþò ïîâåðõíîñòíûì ìåòî- äîì ïî 0,1 ìë íà ÷àøêè ñ àãàðîì Ñàáóðî ñ ãëþ- êîçîé (èëè ñðåäîé ¹ 2). Ïðèãîòîâëåííûå ðàáî÷èå âçâåñè òåñò-ìèê- ðîîðãàíèçìîâ èñïîëüçóþò äëÿ îïðåäåëåíèÿ ðîñ- òîâûõ ñâîéñòâ ïèòàòåëüíûõ ñðåä. Êîëè÷åñòâî êëåòîê òåñò-øòàììîâ äëÿ âíåñåíèÿ â æèäêóþ 244 245 Òàáëèöà 2.1.6.7.-3.
— Òåñò-øòàììû ìèêðîîðãàíèçìîâ è óñëîâèÿ èíêóáàöèè äëÿ îïðåäåëåíèÿ ðîñòîâûõ è ñåëåê- òèâíûõ ñâîéñòâ ïèòàòåëüíûõ ñðåä Ïèòàòåëüíûå ñðåäû Ïðèìåíåíèå Òåñò–øòàììû ìèêðîîðãàíèçìîâ Óñëîâèÿ èíêóáàöèè 1 2 3 4 Ñîåâî-êàçåèíîâûé àãàð Ñðåäà ¹ 1 äëÿ âûðàùè- âàíèÿ áàêòåðèé Âûäåëåíèå àýðîá- íûõ ìèêðîîðãàíèç- ìîâ Bacillus subtilis èëè Bacillus cereus, Escherichia coli, Staphylococcus àureus, Candida albicans, Aspergillus brasiliensis èëè A. niger 3 ñóò (32,5 ± 2,5) °Ñ Áóëüîí Ñàáóðî Âûäåëåíèå äðîæ- æåâûõ ãðèáîâ Candida albicans, 5 ñóò (22,5 ± 2,5) °Ñ Àãàð Ñàáóðî ñ ãëþêîçîé Ñðåäà ¹ 2 äëÿ âûðàùè- âàíèÿ ãðèáîâ Âûäåëåíèå äðîæ- æåâûõ è ïëåñíå- âûõ ãðèáîâ Candida albicans, Aspergillus brasiliensis èëè A. niger 5 ñóò (22,5 ± 2,5) °Ñ Áóëüîí Ìîññåëÿ Ñðåäà ¹ 3 Îáîãàùåíèå ýíòåðîáàêòåðèé Escherichia coli, Salmonella enterica subsp. enterica serovar abony Øòàìì-àññîöèàíò äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñåëåê- òèâíûõ ñâîéñòâ: Staphylococcus àureus 24 – 48 ÷ (32,5 ± 2,5) °Ñ Áóëüîí Ìàê-Êîíêè Âûäåëåíèå E. coli Escherichia coli Øòàìì-àññîöèàíò äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñåëåê- òèâíûõ ñâîéñòâ: Staphylococcus àureus, 24–48 ÷ (43,0 ± 1,0) °Ñ ÀãàðÌàê-Êîíêè Àãàð Ìîññåëÿ Ñðåäà ¹ 4 äëÿ âûäåëå- íèÿ ýíòåðîáàêòåðèé Âûäåëåíèå ýíòåðîáàêòåðèé Escherichia coli, Salmonella enterica subsp. enterica serovar abony Øòàìì-àññîöèàíò äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñåëåê- òèâíûõ ñâîéñòâ: Staphylococcus àureus 24 – 48 ÷ (32,5 ± 2,5) °Ñ Êñèëîçà-ëèçèí-äåçîêñè- õîëàò àãàð Âèñìóò-ñóëüôèòíûé àãàð Ñðåäà ¹ 5 äëÿ èäåíòè- ôèêàöèè áàêòåðèé ðîäà Salmonella Âûäåëåíèå áàêòåðèé ðîäà Salmonella Salmonella enterica ssp. enterica serovar abony Øòàìì-àññîöèàíò äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñåëåê- òèâíûõ ñâîéñòâ: Escherichia coli 24 – 8 ÷ (32,5 ± 2,5) °Ñ Cîåâî-êàçåèíîâûé áóëüîí Ñðåäà ¹ 8 äëÿ âûðàùè- âàíèÿ áàêòåðèé Íàêîïëåíèå àýðîá- íûõ áàêòåðèé Bacilluscereus èëè Bacillus subtilis, Escherichia coli, Staphylococcus àureus, Pseudomonas aeruginosa 24 ÷ (32,5 ± 2,5) °Ñ Àãàð äëÿ âûÿâëåíèÿ ïèîöèàíèíà P. aeruginosa Ñðåäà ¹ 9 äëÿ èäåíòè- ôèêàöèè P. aeruginosa Âûäåëåíèå P. aeruginosa Pseudomonas aeruginosa 24 – 48 ÷ (32,5 ± 2,5) °Ñ Öåòðèìèäíûé àãàð ÖÏÕ-àãàð äëÿ âûäåëå- íèÿ P. aeruginosa Èäåíòèôèêàöèÿ P. aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Øòàìì-àññîöèàíò äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñåëåê- òèâíûõ ñâîéñòâ: Escherichia coli 24 – 48 ÷ (32,5 ± 2,5) °Ñ Ìàííèòíî-ñîëåâîé àãàð Ñðåäà ¹ 10 äëÿ èäåíòè- ôèêàöèè S. aureus Èäåíòèôèêàöèÿ S. aureus Staphylococcus àureus Øòàìì-àññîöèàíò äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñåëåê- òèâíûõ ñâîéñòâ: Pseudomonas aeruginosa 48 ÷ (32,5 ± 2,5) °Ñ èëè àãàðèçîâàííóþ ïèòàòåëüíûå ñðåäû íå äîëæíî ïðåâûøàòü 102 ÊÎÅ. 5-1-2. Èñïûòàíèå àãàðèçîâàííûõ ñðåä. Èñïûòóåìóþ è àòòåñòîâàííóþ àãàðèçîâàííûå ñðåäû ðàçëèâàþò â ÷àøêè Ïåòðè äèàìåòðîì 90 ìì ïî 15 – 20 ìë, ïîäñóøèâàÿ àãàð ïîñëå çà- ñòûâàíèÿ. Ïî 0,1 ìë ðàáî÷åé âçâåñè òåñò-ìèêðî- îðãàíèçìà ñ êîíöåíòðàöèåé 103 ÊÎÅ/ìë çàñåâà- þò ïîâåðõíîñòíûì ìåòîäîì íà ÷àøêè Ïåòðè ñ èñïûòóåìîé è àòòåñòîâàííîé ñðåäàìè â äâîéíîé ïîâòîðíîñòè. Íà àãàðèçîâàíííûõ ñðåäàõ ïîñëå èíêóáàöèè ïîäñ÷èòûâàþò êîëîíèè òåñò-øòàììîâ ìèêðîîð- ãàíèçìîâ è îïðåäåëÿþò êîýôôèöèåíò ïðîðàñòà- íèÿ Êïð ïî ôîðìóëå: Ê N N ïð o = , ãäå: N — ñðåäíåå àðèôìåòè÷åñêîå êîëè÷åñòâà êîëîíèé íà ÷àøêå Ïåòðè ñ èñïûòóå- ìîé ñðåäîé; Nî — ñðåäíåå àðèôìåòè÷åñêîå êîëè÷åñòâà êîëîíèé íà ÷àøêå Ïåòðè ñ àòòåñòî- âàííîé ñðåäîé. 5-1-3. Èñïûòàíèå æèäêèõ ñðåä. Æèäêèå èñïûòóåìûå è àòòåñòîâàííûå ïèòàòåëüíûå ñðå- äû ðàçëèâàþò â ñòåðèëüíûå ïðîáèðêè ðàçìåðîì 15 ´ 150 ìì ïî 10 ìë. Ïî 0,1 ìë ðàáî÷åé âçâåñè òåñò-øòàììà ìèêðîîðãàíèçìà ñ êîíöåíòðàöèåé 103 ÊÎÅ/ìë çàñåâàþò â ïðîáèðêè ñ èñïûòóåìîé è ñòàíäàðòíîé ñðåäîé (ïî 3 ïðîáèðêè äëÿ êàæ- äîãî âèäà ñðåäû).
Èíêóáèðóþò ïðè ñîîòâåòñò- âóþùåé òåìïåðàòóðå â òå÷åíèå ìèíèìàëüíîãî äëÿ ýòîãî òåñòà âðåìåíè. Ðîñò ìèêðîîðãàíèçìîâ îïðåäåëÿþò âèçóàëüíî. 5-1-4. Òðåáîâàíèå ê ðîñòîâûì ñâîéñòâàì ïèòàòåëüíûõ ñðåä. Èñïûòóåìàÿ àãàðèçîâàííàÿ ñðåäà ñ÷èòàåòñÿ ãîäíîé ê èñïîëüçîâàíèþ, åñëè êîýôôèöèåíò ïðîðàñòàíèÿ ñîñòàâëÿåò îò 0,5 äî 2 ïðè ñðàâíåíèè ñ àòòåñòîâàííîé ïèòàòåëüíîé ñðåäîé. Èñïûòóåìàÿ æèäêàÿ ñðåäà ñ÷èòàåòñÿ ãîäíîé ê èñïîëüçîâàíèþ, åñëè íà èñïûòóåìîé è àòòå- ñòîâàííûõ ñðåäàõ íàáëþäàþò âèçóàëüíî îäèíà- êîâûé ðîñò òåñò-øòàììà. 5-2. ÑÅËÅÊÒÈÂÍÛÅ ÑÂÎÉÑÒÂÀ ÏÈÒÀÒÅËÜÍÛÕ ÑÐÅÄ 5-2-1. Ïðîâåäåíèå èñïûòàíèÿ. Äëÿ îïðåäå- ëåíèÿ ñåëåêòèâíûõ ñâîéñòâ ïèòàòåëüíûõ ñðåä èñïûòóåìóþ è àòòåñòîâàííóþ ñðåäû êîíòàìè- íèðóþò øòàììàìè-àññîöèàíòàìè, êàæäûì â îò- äåëüíîñòè, ñ ïîñåâíîé äîçîé 100 ÊÎÅ. Äëÿ ïîñåâà íà æèäêèå ïèòàòåëüíûå ñðåäû â 3 ïðîáèðêè ñ êàæäîé ñðåäîé âíîñÿò ïî 0,1 ìë ðàáî÷åé âçâåñè ñ êîíöåíòðàöèåé 103 ÊÎÅ/ìë øòàììà-àññîöèàíòà. Íà âñåõ çàñåÿííûõ ïèòà- òåëüíûõ ñðåäàõ â ïðîáèðêàõ ïîñëå íàèáîëåå äëèòåëüíîãî ñðîêà èíêóáàöèè äëÿ ýòîãî òåñòà ïðè ñîîòâåòñòâóþùåé òåìïåðàòóðå îòìå÷àþò îòñóòñòâèå ðîñòà øòàììà-àññîöèàíòà. 5-2-2. Òðåáîâàíèå ê ñåëåêòèâíûì ñâîéñò- âàì ïèòàòåëüíûõ ñðåä. Èñïûòóåìàÿ ñåëåêòèâ- íàÿ ñðåäà ñ÷èòàåòñÿ ãîäíîé ê èñïîëüçîâàíèþ, åñëè ïðè ïîñåâå øòàììîâ-àññîöèàíòîâ íàáëþ- äàåòñÿ ïîëíîå îòñóòñòâèå èõ ðîñòà. 246 Ïèòàòåëüíûå ñðåäû Ïðèìåíåíèå Òåñò–øòàììû ìèêðîîðãàíèçìîâ Óñëîâèÿ èíêóáàöèè 1 2 3 4 Áóëüîí Ðàïïîïîðòà – Âàññèëèàäèñà Îáîãàùåíèå áàêòåðèé ðîäà Salmonella Salmonella enterica subsp .Enterica serovar abony 24 ÷ (32,5 ± 2,5) °Ñ Òðåõñàõàðíûé àãàð ñ ñîëÿìè æåëåçà Ñðåäà ¹ 13 äëÿ èäåíòè- ôèêàöèè áàêòåðèé ðîäà Salmonella Èäåíòèôèêàöèÿ áàêòåðèé ðîäà Salmonella Salmonella enterica subsp. Enterica serovar abony, Escherichia coli 24 ÷ (32,5 ± 2,5) °Ñ Öèòðàòíûé àãàð Ñèììîíñà Ñðåäà ¹ 14 äëÿ èäåíòè- ôèêàöèè E. coli Èäåíòèôèêàöèÿ E. coli Escherichia coli, Salmonella enterica subsp. Enterica serovar abony (îòìå÷àåòñÿ èçìåíåíèå öâåòà ñðåäû ñ çåëåíîãî íà ñèíèé) 24 ÷ (32,5 ± 2,5) °Ñ Òàáëèöà 2.1.6.7.-3. — (îêîí÷àíèå) 5-3. ÄÈÀÃÍÎÑÒÈ×ÅÑÊÈÅ ÑÂÎÉÑÒÂÀ ÏÈÒÀÒÅËÜÍÛÕ ÑÐÅÄ 5-3-1. Âûïîëíåíèå èñïûòàíèÿ. Èñïûòàíèå äèàãíîñòè÷åñêèõ ñâîéñòâ ïðîâîäÿò äëÿ òàêèõ ïèòàòåëüíûõ ñðåä, êàê àãàð Ìîññåëÿ (èëè ñðåäà ¹ 4), àãàð Ìàê-Êîíêè, êñèëîçî-ëèçèí-äåçîêñè- õîëàò-àãàð (èëè ñðåäà ¹ 5), öåòðèìèäíûé àãàð (èëè ÖÏÕ-àãàð), àãàð äëÿ âûÿâëåíèÿ ïèîöèàíè- íà (èëè ñðåäà ¹ 9), ìàííèòíî-ñîëåâîé àãàð (èëè ñðåäà ¹ 10), òðåõñàõàðíûé àãàð ñ ñîëÿìè æåëå- çà (èëè ñðåäà ¹ 13), öèòðàòíûé àãàð Ñèììîíñà (èëè ñðåäà ¹ 14). Äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ äèàãíîñòè÷åñêèõ ñâîéñòâ ïèòàòåëüíîé ñðåäû áàêòåðèîëîãè÷å- ñêîé ïåòëåé äåëàþò ïîñåâ áóëüîííîé êóëüòóðû òåñò-ìèêðîîðãàíèçìîâ (êàæäîãî â îòäåëüíîñòè) íà 2 ÷àøêè Ïåòðè èëè â 2 ïðîáèðêè ñ èñïûòóå- ìîé ñðåäîé. Ïîñëå èíêóáàöèè â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ îïðåäåëÿþò õàðàêòåðíûå ïðèçíàêè òåñò-øòàììîâ îïðåäåëåííîãî âèäà ìèêðîîðãà- íèçìîâ: âíåøíèé âèä êîëîíèé, öâåò, íàëè÷èå ïèãìåíòà, îðåîë âîêðóã êîëîíèé, èçìåíåíèå öâåòà ñðåäû è äð. (òàáë. 2.1.6.7.-2). Äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ ñåëåêòèâíûõ ñâîéñòâ äèàãíîñòè÷åñêèõ ïèòàòåëüíûõ ñðåä äåëàþò ïî- ñåâ áóëüîííîé êóëüòóðû øòàììîâ-àññîöèàíòîâ (êàæäîãî â îòäåëüíîñòè) íà èñïûòóåìóþ ñðåäó. Ïîñëå èíêóáàöèè â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ ðîñò øòàììîâ-àññîöèàíòîâ äîëæåí îòñóòñòâîâàòü. 5-3-2. Òðåáîâàíèå ê äèàãíîñòè÷åñêèì ñâîéñòâàì ïèòàòåëüíûõ ñðåä. Èñïûòóåìàÿ ñðåäà ñ÷èòàåòñÿ ãîäíîé ê èñïîëüçîâàíèþ, åñëè ìîðôîëîãè÷åñêèå è äèàãíîñòè÷åñêèå ïðèçíàêè òåñò-ìèêðîîðãàíèçìîâ ñîîòâåòñòâóþò îïèñà- íèþ, ïðèâåäåííîìó â òàáë. 2.1.6.7.-3, ïðè ýòîì ðîñò øòàììîâ-àññîöèàíòîâ ïîëíîñòüþ îòñóòñò- âóåò. 5-4.
ÑÒÅÐÈËÜÍÎÑÒÜ ÏÈÒÀÒÅËÜÍÛÕ ÑÐÅÄ Íå ìåíåå 5 % åìêîñòåé (ôëàêîíîâ, ïðîáè- ðîê) îò êàæäîé ïàðòèè ïðèãîòîâëåííîé ïèòà- òåëüíîé ñðåäû êîíòðîëèðóþò íà ñòåðèëüíîñòü, âûäåðæèâàÿ èõ ïðè ñîîòâåòñòâóþùåé òåìïåðà- òóðå â òå÷åíèå 48 – 72 ÷. Ïðè îáíàðóæåíèè ìèê- ðîáíîãî ðîñòà õîòÿ áû â îäíîé èç åìêîñòåé èñ- ïûòóåìàÿ ïàðòèÿ ïèòàòåëüíîé ñðåäû ïîäëåæèò óíè÷òîæåíèþ. 5-5. ÕÐÀÍÅÍÈÅ ÏÈÒÀÒÅËÜÍÛÕ ÑÐÅÄ Ñóõèå ïèòàòåëüíûå ñðåäû íåîáõîäèìî õðà- íèòü ãåðìåòè÷íî óïàêîâàííûìè, â òåìíîì ñó- õîì ìåñòå ïðè òåìïåðàòóðå 2 – 30 °Ñ. Ïðèãîòîâ- ëåííûå èç ñóõèõ ñìåñåé è ðàçëèòûå âî ôëàêîíû è ÷àøêè ïèòàòåëüíûå ñðåäû õðàíÿò â óñëîâèÿõ è â òå÷åíèå ñðîêà, óñòàíîâëåííîãî â õîäå âàëè- äàöèîííûõ èñïûòàíèé. 6. ÐÅÊÎÌÅÍÄÓÅÌÛÅ ÏÈÒÀÒÅËÜÍÛÅ ÑÐÅÄÛ È ÐÀÑÒÂÎÐÛ Äëÿ èñïûòàíèÿ èñïîëüçóþò ãîòîâûå ê èñ- ïîëüçîâàíèþ èëè ïðèãîòîâëåííûå ïèòàòåëüíûå ñðåäû èëè ïèòàòåëüíûå ñðåäû, ïðèãîòîâëåííûå â ëàáîðàòîðèè. Ïðè ïðèãîòîâëåíèè ïèòàòåëüíûõ ñðåä â ëà- áîðàòîðèè íåîáõîäèìî ñòðîãî ïðèäåðæèâàòüñÿ ïðèâåäåííîé ðåöåïòóðû, à ïðè èñïîëüçîâàíèè êîììåð÷åñêèõ ñóõèõ ïèòàòåëüíûõ ñðåä — èíñò- ðóêöèè ïðåäïðèÿòèÿ-èçãîòîâèòåëÿ. Âõîäÿùèå â ñîñòàâ ïèòàòåëüíûõ ñðåä èíäèêàòîðû è êðàñèòå- ëè äîáàâëÿþò â âèäå ðàñòâîðîâ îïðåäåëåííîé êîíöåíòðàöèè. Íåîáõîäèìîå çíà÷åíèå ðÍ ïèòà- òåëüíîé ñðåäû óñòàíàâëèâàþò ïðè òåìïåðàòóðå (22,5 ± 2,5) °Ñ. Åñëè íåò äðóãèõ óêàçàíèé â íîðìàòèâíîì äîêóìåíòå ïî êà÷åñòâó, ñðåäû ñòåðèëèçóþò â àâ- òîêëàâå ïðè òåìïåðàòóðå 121 °Ñ â òå÷åíèå 15 ìèí, ïðè óñëîâèè âàëèäàöèè ïðîöåññà ñòåðè- ëèçàöèè. Ôîñôàòíûé áóôåðíûé ðàñòâîð ñ íàòðèÿ õëîðèäîì è ïåïòîíîì (ðÍ 7,0): l Êàëèÿ ôîñôàò îäíîçàìåùåííûé 3,6 ã l Íàòðèÿ ôîñôàò äâóçàìåùåííûé 7,2 ã l Íàòðèÿ õëîðèä 4,3 ã l Ïåïòîí (ìÿñíîé èëè êàçåèíîâûé) 1,0 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë Íåéòðàëèçóþùàÿ æèäêîñòü l Ïîëèñîðáàò-80 30,0 ã l Ëåöèòèí (ÿè÷íûé èëè ñîåâûé) 3,0 ã l Ãèñòèäèíà ãèäðîõëîðèä 1,0 ã l Ïåïòîí (ìÿñíîé èëè êàçåèíîâûé) 1,0 ã l Íàòðèÿ õëîðèä 4,3 ã l Êàëèÿ ôîñôàò îäíîçàìåùåííûé 3,6 ã l Íàòðèÿ ôîñôàò äâóçàìåùåííûé 7,2 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 7,6 ± 0,2. Ïîëóæèäêèé àãàð äëÿ õðàíåíèÿ òåñò-ìèêðîîðãàíèçìîâ l Ïàíêðåàòè÷åñêèé ãèäðîëèçàò êàçåèíà 8,0 ã l Íàòðèÿ õëîðèä 5,0 ã 247 l Àãàð ìèêðîáèîëîãè÷åñêèé 5,0 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 7,0 ± 0,2. Ñîåâî-êàçåèíîâûé àãàð (Casein Soya Bean Digest agar) l Ïàíêðåàòè÷åñêèé ãèäðîëèçàò êàçåèíà 15,0 ã l Ïàïàèíîâûé ãèäðîëèçàò áîáîâ ñîè 5,0 ã l Íàòðèÿ õëîðèä 5,0 ã Àãàð ìèêðîáèîëîãè÷åñêèé 15,0 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 7,3 ± 0,2. Àëüòåðíàòèâíàÿ ñðåäà äëÿ âûðàùèâàíèÿ àýðîáíûõ áàêòåðèé — ñðåäà ¹ 1 äëÿ êîíòðîëÿ ìèêðîáíîé çàãðÿçíåííîñòè, ñóõàÿ; ìÿñîïåïòîí- íûé àãàð (ÌÏÀ); àãàðèçîâàííûå ïèòàòåëüíûå ñðåäû íà îñíîâå ãèäðîëèçàòà ðûáíîé ìóêè (ÃÐÌ). Áóëüîí Ñàáóðî (Sabouraud Broth) l Ïåïòîí (ìÿñíîé) 5,0 ã l Ïåïòîí (êàçåèíîâûé) 5,0 ã l Ãëþêîçû ìîíîãèäðàò 20,0 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 5,6 ± 0,2. Àãàð Ñàáóðî ñ ãëþêîçîé (Sabouraud 4 % Glucose Agar) l Ïåïòîí (ìÿñíîé èëè êàçåèíîâûé) 10,0 ã l Ãëþêîçû ìîíîãèäðàò 40,0 ã l Àãàð áàêòåðèîëîãè÷åñêèé 15,0 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 5,6 ± 0,2. Àëüòåðíàòèâíàÿ ñðåäà äëÿ âûðàùèâàíèÿ äðîææåâûõ è ïëåñíåâûõ ãðèáîâ — ñðåäà ¹ 2 (àãàð Ñàáóðî ñ ãëþêîçîé) äëÿ êîíòðîëÿ ìèêðîá- íîé çàãðÿçíåííîñòè, ñóõàÿ, ðàçëè÷íûõ ïðîèçâî- äèòåëåé. Äëÿ ïîâûøåíèÿ ñåëåêòèâíîñòè ñðåäû ñ öå- ëüþ ïðåäîòâðàùåíèÿ ðîñòà áàêòåðèé ïåðåä ñòå- ðèëèçàöèåé äîáàâëÿþò 50 ìã õëîðàìôåíèêîëà (ëåâîìèöåòèíà) íà 1 ë ñðåäû èëè ïåðåä ðîçëè- âîì â ÷àøêè Ïåòðè â ðàñïëàâëåííóþ ñðåäó âíî- ñÿò 0,1 ã íàòðèåâîé ñîëè áåíçèëïåíèöèëëèíà è 0,1 ã òåòðàöèêëèíà íà 1 ë ñðåäû â âèäå ñòåðèëü- íûõ ðàñòâîðîâ.
Áóëüîí Ìîññåëÿ äëÿ îáîãàùåíèÿ ýíòåðîáàêòåðèé (Enterobacteria Enrichment Broth – Mossel) l Ïàíêðåàòè÷åñêèé ãèäðîëèçàò æåëàòèíà 10,0 ã l Ãëþêîçû ìîíîãèäðàò 5,0 ã l Áû÷üÿ æåë÷ü ñóõàÿ 20,0 ã l Êàëèÿ ôîñôàò îäíîçàìåùåííûé 2,0 ã l Íàòðèÿ ôîñôàò äâóçàìåùåííûé 8,0 ã l Áðèëëèàíòîâûé çåëåíûé 0,015 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ 7,2 ± 0,2. Ñðåäó íàãðåâàþò ïðè òåìïåðàòóðå 100 °Ñ â òå÷åíèå 30 ìèí ñ ïîñëåäóþùèì áûñòðûì îõëà- æäåíèåì. Àëüòåðíàòèâíàÿ ñðåäà äëÿ âûðàùèâàíèÿ àýðîáíûõ áàêòåðèé — ñðåäà ¹ 3 äëÿ êîíòðîëÿ ìèêðîáíîé çàãðÿçíåííîñòè, ñóõàÿ; ðàçëè÷íûõ ïðîèçâîäèòåëåé. Àãàð Ìîññåëÿ (Crystal violet, Neutral Red, Bile Agar with Glucose) l Äðîææåâîé ýêñòðàêò 3,0 ã l Ïàíêðåàòè÷åñêèé ãèäðîëèçàò êàçåèíà 7,0 ã l Ñîëè æåë÷è 1,5 ã l Ëàêòîçû ìîíîãèäðàò 10,0 ã l Íàòðèÿ õëîðèäà 5,0 ã l Ãëþêîçû ìîíîãèäðàò 10,0 ã l Àãàð ìèêðîáèîëîãè÷åñêèé 15,0 ã l Íåéòðàëüíûé êðàñíûé 0,03 ã l Êðèñòàëëè÷åñêèé ôèîëåòîâûé 0,002 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ 7,4 ± 0,2. Íàãðåâàþò äî êèïåíèÿ. Ñðåäó íå àâòîêëàâè- ðóþò. Àëüòåðíàòèâíàÿ ñðåäà äëÿ âûäåëåíèÿ ýíòå- ðîáàêòåðèé — ñðåäà ¹ 4 (Ýíäî) äëÿ êîíòðîëÿ ìèêðîáíîé çàãðÿçíåííîñòè, ñóõàÿ; ðàçëè÷íûõ ïðîèçâîäèòåëåé. Áóëüîí Ìàê-Êîíêè (MacConkeyBroth) l Ïàíêðåàòè÷åñêèé ãèäðîëèçàò æåëàòèíà 20,0 ã l Ëàêòîçû ìîíîãèäðàò 10,0 ã l Áû÷üÿ æåë÷ü ñóõàÿ 5,0 ã l Áðîìêðåçîëîâûé ïóðïóðíûé 0,01 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 7,3 ± 0,2. 248 Àëüòåðíàòèâíàÿ ñðåäà îáîãàùåíèÿ äëÿ ýíòå- ðîáàêòåðèé — ñðåäà ¹ 3 äëÿ êîíòðîëÿ ìèêðîá- íîé çàãðÿçíåííîñòè, ñóõàÿ, ðàçëè÷íûõ ïðîèçâî- äèòåëåé. Àãàð Ìàê-Êîíêè (MacConkeyAgar) l Ïàíêðåàòè÷åñêèé ãèäðîëèçàò æåëàòèíà 17,0 ã l Ïåïòîí (ìÿñíûé èëè êàçåèíîâûé) 3,0 ã l Ëàêòîçû ìîíîãèäðàò 10,0 ã l Íàòðèÿ õëîðèä 5,0 ã l Ñîëè æåë÷è 1,5 ã l Àãàð ìèêðîáèîëîãè÷åñêèé 13,5 ã l Íåéòðàëüíûé êðàñíûé 0,03 ã l Êðèñòàëëè÷åñêèé ôèîëåòîâûé 0,001 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 7,1 ± 0,2. Ïåðåä ñòåðèëèçàöèåé êèïÿòÿò 1 ìèí, ïîñòî- ÿííî âñòðÿõèâàÿ. Àëüòåðíàòèâíàÿ ñðåäà äëÿ âûäåëåíèÿ ýíòå- ðîáàêòåðèé — ñðåäà ¹ 4 (Ýíäî) äëÿ êîíòðîëÿ ìèêðîáíîé çàãðÿçíåííîñòè, ñóõàÿ, ðàçëè÷íûõ ïðîèçâîäèòåëåé. Íàêîïèòåëüíàÿ ñðåäà äëÿ áàêòåðèé ðîäà Salmonella (áóëüîí Ðàïïîïîðòà – Âàññèëèàäèñà) l Ñîåâûé ïåïòîí 4,5 ã l Ìàãíèÿ õëîðèä øåñòèâîäíûé 29,0 ã l Íàòðèÿ õëîðèä 7,2 ã l Êàëèé ôîñôîðíîêèñëûé äâóçàìåùåííûé 0,18 ã l Êàëèé ôîñôîðíîêèñëûé îäíîçàìåùåííûé 1,26 ã l Ìàëàõèòîâûé çåëåíûé 0,036 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 5,2 ± 0,2. Ñðåäó àâòîêëàâèðóþò â òå÷åíèå 15 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 115 °Ñ. Êñèëîçà, ëèçèí, äåçîêñèõîëàò àãàð (Xylose, Lisine, DeoxycholateAgar) l Êñèëîçà 3,5 ã l L–ëèçèí 5,0 ã l Ëàêòîçû ìîíîãèäðàò 7,5 ã l Ñàõàðîçà 7,5 ã l Íàòðèÿ õëîðèä 5,0 ã l Äðîææåâîé ýêñòðàêò 3,0 ã l Ôåíîëîâûé êðàñíûé 0,08 ã l Àãàð ìèêðîáèîëîãè÷åñêèé 13,5 ã l Íàòðèÿ äåçîêñèõîëàò 2,5 ã l Íàòðèÿ òèîñóëüôàò 6,8 ã l Æåëåçà àììîíèé öèòðàò 0,8 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ 7,4 ± 0,2. Äîâîäÿò äî êèïåíèÿ, îõëàæäàþò äî òåìïåðà- òóðû 50 °Ñ è ðàçëèâàþò â ÷àøêè Ïåòðè. Ñðåäó íå àâòîêëàâèðóþò. Âèñìóò-ñóëüôèòíûé àãàð (BismuthSulfiteagar) l Ìÿñíîé ýêñòðàêò 5,0 ã l Ìÿñíîé ïåïòîí 10,0 ã l Ãëþêîçû ìîíîãèäðàò 5,0 ã l Íàòðèÿ ôîñôàò äâóçàìåùåííûé 4,0 ã l Æåëåçà ñóëüôàò 0,3 ã l Áðèëëèàíòîâûé çåëåíûé 0,025 ã l Âèñìóòà ñóëüôèò 8,0 ã l Àãàð ìèêðîáèîëîãè÷åñêèé 15,0 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ 7,6 ± 0,2. Ñðåäó íå àâòîêëàâèðóþò. Ïðèãîòîâëåííàÿ ñðåäà íåïðîçðà÷íà, çåëåíîãî öâåòà. Àëüòåðíàòèâíàÿ ñðåäà äëÿ âûäåëåíèÿ ñàëü- ìîíåëë — ñðåäà ¹ 5 äëÿ êîíòðîëÿ ìèêðîáíîé çàãðÿçíåííîñòè, ñóõàÿ, ðàçëè÷íûõ ïðîèçâîäèòå- ëåé.
Ñîåâî-êàçåèíîâûé áóëüîí (Casein Soya Bean Digest Broth) l Ïàíêðåàòè÷åñêèé ãèäðîëèçàò êàçåèíà 17,0 ã l Ïàïàèíîâûé ãèäðîëèçàò áîáîâ ñîè 3,0 ã l Íàòðèÿ õëîðèä 5,0 ã l Êàëèÿ ôîñôàò äâóçàìåùåííûé 2,5 ã l Ãëþêîçû ìîíîãèäðàò 2,5 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 7,3 ± 0,2. Àëüòåðíàòèâíàÿ ñðåäà äëÿ âûðàùèâàíèÿ áàêòåðèé — ñðåäà ¹ 8 äëÿ êîíòðîëÿ ìèêðîáíîé çàãðÿçíåííîñòè, ñóõàÿ, ðàçëè÷íûõ ïðîèçâîäèòå- ëåé. Öåòðèìèäíûé àãàð (Cetrimide Agar) l Ïàíêðåàòè÷åñêèé ãèäðîëèçàò æåëàòèíà 20,0 ã l Ìàãíèÿ õëîðèä 1,4 ã l Êàëèÿ ñóëüôàò äâóçàìåùåííûé 10,0 ã l Öåòðèìèä (öåòèëïèðèäèíèÿ áðîìèä) 0,3 ã l Àãàð ìèêðîáèîëîãè÷åñêèé 13,6 ã l Ãëèöåðèí 10,0 ìë l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 7,2 ± 0,2. 249 Àëüòåðíàòèâíàÿ ñðåäà äëÿ âûäåëåíèÿ ñèíåã- íîéíîé ïàëî÷êè — ÖÏÕ (ñðåäà ¹ 16) — àãàð äëÿ âûäåëåíèÿ ñèíåãíîéíîé ïàëî÷êè, ñóõàÿ. ÖÏÕ àãàð (ñðåäà ¹ 16) l Ïåïòîí ñóõîé ôåðìåíòàòèâíûé 20,0 ã l Êàëèé ñåðíîêèñëûé 7,6 ã l Ìàãíèé ñåðíîêèñëûé ñåìèâîäíûé 2,4 ã l Ñîäà êàëüöèíèðîâàííàÿ 1,0 ã l Ôåíîçàí-êèñëîòà 0,2 ã l ÖÏÕ (N-öåòèëïèðèäèíèé õëîðèñòûé 1-âîäíûé) 0,3 ã l Àãàð ìèêðîáèîëîãè÷åñêèé 8,0 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ 7,2 ± 0,2. Ñðåäó íå àâòîêëàâèðóþò. Àãàð äëÿ âûÿâëåíèÿ ïèîöèàíèíà Pseudomonas (Pseudomonas Agar Medium for Detection of Pyocyanin) l Ïàíêðåàòè÷åñêèé ãèäðîëèçàò æåëàòèíà 20,0 ã l Ìàãíèÿ õëîðèä áåçâîäíûé 1,4 ã l Êàëèÿ ñóëüôàò áåçâîäíûé 10,0 ã l Àãàð ìèêðîáèîëîãè÷åñêèé 15,0 ã l Ãëèöåðèí 10,0 ìë l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 7,2 ± 0,2. Âñå êîìïîíåíòû, êðîìå ãëèöåðèíà, ðàñòâî- ðÿþò â âîäå. Íàãðåâàþò ïðè ïåðåìåøèâàíèè è êèïÿòÿò 1 ìèí. Äîáàâëÿþò ãëèöåðèí è ñòåðèëè- çóþò. Àëüòåðíàòèâíàÿ ñðåäà äëÿ èäåíòèôèêàöèè ñèíåãíîéíîé ïàëî÷êè — ñðåäà ¹ 9 äëÿ êîíòðî- ëÿ ìèêðîáíîé çàãðÿçíåííîñòè, ñóõàÿ, ðàçëè÷- íûõ ïðîèçâîäèòåëåé. Ìàííèòíî-ñîëåâîé àãàð l Ïåïòîí ôåðìåíòàòèâíûé ñóõîé 10,0 ã l D-Ìàííèò 10,0 ã l Íàòðèÿ õëîðèä 75,0 ã l Àãàð ìèêðîáèîëîãè÷åñêèé 15,0 ã l Ôåíîëîâûé êðàñíûé 0,025 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 7,4 ± 0,2. Àëüòåðíàòèâíàÿ ñðåäà äëÿ âûäåëåíèÿ è èäåíòèôèêàöèè çîëîòèñòîãî ñòàôèëîêîêêà — ñðåäà ¹ 10 äëÿ êîíòðîëÿ ìèêðîáíîé çàãðÿçíåí- íîñòè, ñóõàÿ, ðàçëè÷íûõ ïðîèçâîäèòåëåé. Òðåõñàõàðíûé àãàð ñ ñîëÿìè æåëåçà(TripleSugar–Iron–Agar) l Ìÿñíîé ýêñòðàêò 3,0 ã l Äðîææåâîé ýêñòðàêò 3,0 ã l Ïåïòîí (êàçåèíîâûé èëè ìÿñíîé) 20,0 ã l Íàòðèÿ õëîðèä 5,0 ã l Ëàêòîçû ìîíîãèäðàò 10,0 ã l Ñàõàðîçà 10,0 ã l Ãëþêîçû ìîíîãèäðàò 1,0 ã l Æåëåçî-àììîíèé öèòðàò 0,3 ã l Íàòðèÿ òèîñóëüôàò 0,3 ã l Ôåíîëîâûé êðàñíûé 0,025 ã l Àãàð ìèêðîáèîëîãè÷åñêèé 12,0 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 7,4 ± 0,2. Ñðåäó ðàçëèâàþò â ïðîáèðêè, çàïîëíÿÿ èõ íà 1/3 îáúåìà. Ïîñëå ñòåðèëèçàöèè ñðåäó îñòàâëÿ- þò äëÿ çàñòûâàíèÿ òàêèì îáðàçîì, ÷òîáû îáðà- çîâàëèñü ñòîëáèê è ñêîøåííàÿ ÷àñòü íàä íèì. Àëüòåðíàòèâíàÿ ñðåäà äëÿ èäåíòèôèêàöèè ñàëüìîíåëë — ñðåäà ¹ 13 äëÿ êîíòðîëÿ ìèê- ðîáíîé çàãðÿçíåííîñòè, ñóõàÿ, ðàçëè÷íûõ ïðî- èçâîäèòåëåé. Öèòðàòíûé àãàð Ñèììîíñà l Íàòðèÿ õëîðèä 5,0 ã l Ìàãíèÿ ñóëüôàò 0,2 ã l Àììîíèÿ äèãèäðîôîñôàò 1,0 ã l Êàëèÿ ãèäðîôîñôàò 1,0 ã l Íàòðèÿ öèòðàò 3,0 ã l Áðîìòèìîëîâûé ñèíèé 0,08 ã l Àãàð ìèêðîáèîëîãè÷åñêèé 20,0 ã l Âîäà î÷èùåííàÿ 1000,0 ìë ðÍ ïîñëå ñòåðèëèçàöèè 7,2 ± 0,2. Àëüòåðíàòèâíàÿ ñðåäà äëÿ èäåíòèôèêàöèè E. coli — ñðåäà ¹ 14 äëÿ êîíòðîëÿ ìèêðîáíîé çàãðÿçíåííîñòè, ñóõàÿ, ðàçëè÷íûõ ïðîèçâîäèòå- ëåé. 201060008-2019 2.1.6.8. Áàêòåðèàëüíûå ýíäîòîêñèíû Íàñòîÿùàÿ ñòàòüÿ îïèñûâàåò ìåòîäû îïðå- äåëåíèÿ áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ â ëåêàð- ñòâåííûõ ïðåïàðàòàõ, ïðåäíàçíà÷åííûõ äëÿ ïà- ðåíòåðàëüíîãî ïðèìåíåíèÿ, è ôàðìàöåâòè÷å- ñêèõ ñóáñòàíöèÿõ, èñïîëüçóåìûõ äëÿ èõ èçãîòîâëåíèÿ.
250 Îïðåäåëåíèå ñîäåðæàíèÿ áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ ïðîâîäÿò ñ ïîìîùüþ ðåàêòèâà, ïðåäñòàâëÿþùåãî ñîáîé ëèçàò àìåáîöèòîâ èç êðîâè ìå÷åõâîñòà Limulus polyphemus èëè Tachypleus tridentatus (ËÀË-ðåàêòèâ èëè ÒÀË-ðåàêòèâ). Ëèçàò àìåáîöèòîâ ñïåöèôè÷åñêè ðåàãèðóåò ñ áàêòåðèàëüíûìè ýíäîòîêñèíàìè.  ðåçóëüòàòå ôåðìåíòàòèâíîé ðåàêöèè ïðîèñõî- äèò èçìåíåíèå ðåàêöèîííîé ñìåñè, ïðîïîðöèî- íàëüíîå êîíöåíòðàöèè ýíäîòîêñèíà. Ñóùåñòâóþò òðè îñíîâíûõ ìåòîäîëîãè÷å- ñêèõ ïîäõîäà äëÿ ïðîâåäåíèÿ äàííîãî èñïûòà- íèÿ: ãåëü-òðîìá ìåòîä, îñíîâàííûé íà îáðàçî- âàíèè ãåëÿ; òóðáèäèìåòðè÷åñêèé ìåòîä, îñíî- âàííûé íà ïîìóòíåíèè ðåàêöèîííîé ñìåñè ïîñëå ðàñùåïëåíèÿ ñóáñòðàòà, ñîäåðæàùåãîñÿ â ëèçàòå àìåáîöèòîâ; è õðîìîãåííûé ìåòîä, îñíî- âàííûé íà ïîÿâëåíèè îêðàøèâàíèÿ ïîñëå ðàñ- ùåïëåíèÿ ñèíòåòè÷åñêîãî ïåïòèä-õðîìîãåííî- ãî êîìïëåêñà.  äàííîé ñòàòüå îïèñàíû ñëåäóþùèå øåñòü òåñòîâ, îñíîâàííûõ íà îïèñàííûõ âûøå ïðèí- öèïàõ: – Êà÷åñòâåííûé ãåëü-òðîìá òåñò (Ìåòîä À); – Êîëè÷åñòâåííûé ãåëü-òðîìá òåñò (Ìåòîä Â); – Òóðáèäèìåòðè÷åñêèé êèíåòè÷åñêèé òåñò (Ìåòîä Ñ); – Õðîìîãåííûé êèíåòè÷åñêèé òåñò (Ìåòîä D); – Õðîìîãåííûé òåñò ïî êîíå÷íîé òî÷êå (Ìåòîä Å); – Òóðáèäèìåòðè÷åñêèé òåñò ïî êîíå÷íîé òî÷êå (Ìåòîä F). Èñïûòàíèå ïðîâîäÿò ëþáûì èç øåñòè ïðè- âåäåííûõ ìåòîäîâ.  ñëó÷àå ñîìíåíèé èëè ðàç- íîãëàñèé îêîí÷àòåëüíîå çàêëþ÷åíèå ïðèíèìà- þò íà îñíîâàíèè ðåçóëüòàòîâ, ïîëó÷åííûõ ïðè ïðîâåäåíèè èñïûòàíèÿ ìåòîäîì À. ÏÎÑÓÄÀ È ÅÅ ÏÎÄÃÎÒÎÂÊÀ Ñòåêëÿííàÿ è ïëàñòèêîâàÿ ïîñóäà, èñïîëü- çóåìàÿ â òåñòå, íå äîëæíà ñîäåðæàòü áàêòåðè- àëüíûå ýíäîòîêñèíû â êîëè÷åñòâàõ, îïðåäåëÿå- ìûõ â òåñòå, è íå äîëæíà îêàçûâàòü âëèÿíèÿ íà õîä ðåàêöèè. Ðåêîìåíäóåìûì ðåæèìîì äåïèðîãåíèçàöèè ÿâëÿåòñÿ íàãðåâàíèå ïðè òåìïåðàòóðå 250 °Ñ íå ìåíåå 30 ìèíóò â ñîîòâåòñòâèè ñ âàëèäèðîâàí- íîé ïðîöåäóðîé. ÑÒÀÍÄÀÐÒÛ ÝÍÄÎÒÎÊÑÈÍÀ Ñîäåðæàíèå áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ âûðàæàåòñÿ â åäèíèöàõ ýíäîòîêñèíà (ÅÝ) Ìåæ- äóíàðîäíîãî ñòàíäàðòà ýíäîòîêñèíà. Îäíà ìåæ- äóíàðîäíàÿ åäèíèöà (ÌÅ) ýíäîòîêñèíà ñîîòâåò- ñòâóåò îäíîé ÅÝ. Ïðè ïðîâåäåíèè àíàëèçà ìîæåò èñïîëüçî- âàòüñÿ Êîíòðîëüíûé ñòàíäàðò ýíäîòîêñèíà (ÊÑÝ), àêòèâíîñòü êîòîðîãî óñòàíîâëåíà ïî Ìå- æäóíàðîäíîìó ñòàíäàðòó ýíäîòîêñèíà. ÊÑÝ äîëæåí áûòü ïðåäíàçíà÷åí äëÿ ïðîâåäåíèÿ àíà- ëèçà ñ äàííîé ïàðòèåé ëèçàòà àìåáîöèòîâ. Ðàñ- òâîðåíèå è õðàíåíèå ÊÑÝ îñóùåñòâëÿþò ñî- ãëàñíî èíñòðóêöèè ôèðìû-ïðîèçâîäèòåëÿ. Ëèçàò àìåáîöèòîâ Íåîáõîäèìî èñïîëüçîâàòü ëèçàò àìåáîöèòîâ èç êðîâè ìå÷åõâîñòà Limulus polyphemus èëè Tachypleus tridentatus (ËÀË-ðåàêòèâ èëè ÒÀË- ðåàêòèâ), ïðåäíàçíà÷åííûé äëÿ âûáðàííîãî ìå- òîäà îïðåäåëåíèÿ áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ. ×óâñòâèòåëüíîñòü ëèçàòà àìåáîöèòîâ (l) âûðàæåíà â åäèíèöàõ ýíäîòîêñèíà [ÅÝ/ìë] è ñî- îòâåòñòâóåò ìèíèìàëüíîé êîíöåíòðàöèè Ìåæ- äóíàðîäíîãî ñòàíäàðòà ýíäîòîêñèíà, êîòîðàÿ âûçûâàåò îáðàçîâàíèå ïëîòíîãî ãåëÿ ïðè ðåàê- öèè ñ äàííûì ëèçàòîì àìåáîöèòîâ (Ìåòîäû À è Â), èëè ñîîòâåòñòâóåò òî÷êå ñ ìèíèìàëüíûì çíà÷åíèåì íà ñòàíäàðòíîé êðèâîé (Ìåòîäû Ñ, D, E è F). Ðàçâåäåíèå ëèîôèëèçèðîâàííîãî ëèçàòà àìåáîöèòîâ è åãî õðàíåíèå îñóùåñòâëÿþò ñî- ãëàñíî èíñòðóêöèè ôèðìû-ïðîèçâîäèòåëÿ. Ïðèìå÷àíèå: Ëèçàò àìåáîöèòîâ, êðîìå ýí- äîòîêñèíîâ, ìîæåò ðåàãèðîâàòü è ñ íåêîòîðû- ìè â-ãëþêàíàìè, ïîýòîìó âîçìîæíî èñïîëüçî- âàíèå ñïåöèôè÷åñêîãî ëèçàòà àìåáîöèòîâ, ó êî- òîðîãî óäàëåí ôàêòîð G, ðåàãèðóþùèé ñ ãëþêàíàìè. Òàêæå ðàçðåøàåòñÿ ïðèìåíåíèå âñïîìîãàòåëüíûõ ðàñòâîðîâ, êîòîðûå áëîêèðó- þò ðåàêöèîííóþ ñèñòåìó ôàêòîðà G. Òàêèå ðå- àêòèâû ìîãóò ïðèìåíÿòüñÿ äëÿ îïðåäåëåíèÿ ýíäîòîêñèíîâ â ïðèñóòñòâèè ãëþêàíîâ. Âîäà äëÿ òåñòà áàêòåðèàëüíûå ýíäîòîêñèíû (âîäà äëÿ ÁÝÒ) Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ðàñòâîðîâ ðåàêòèâîâ è ðàçâåäåíèé èñïûòóåìîãî ëåêàðñòâåííîãî ñðåä- ñòâà èñïîëüçóþò âîäó äëÿ ÁÝÒ.
Âîäà äëÿ ÁÝÒ 251 äîëæíà ñîîòâåòñòâîâàòü òðåáîâàíèÿì, ïðåäúÿâ- ëÿåìûì ê âîäå äëÿ èíúåêöèé, è ïðè ýòîì íå äîëæíà ñîäåðæàòü áàêòåðèàëüíûå ýíäîòîêñèíû â êîëè÷åñòâàõ, îïðåäåëÿåìûõ â òåñòå. ÏÎÄÃÎÒÎÂÊÀ ÈÑÏÛÒÓÅÌÎÃÎ ÎÁÐÀÇÖÀ Êàæäûé îòîáðàííûé îáðàçåö èñïûòûâàåòñÿ èíäèâèäóàëüíî. Äëÿ ðàñòâîðåíèÿ è/èëè ðàçâåäåíèÿ èñïûòóå- ìîãî ëåêàðñòâåííîãî ñðåäñòâà èñïîëüçóþò âîäó äëÿ ÁÝÒ, åñëè â ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå íå óêàçàí èíîé ðàñòâîðèòåëü. Èñïûòóåìûé ðàñòâîð äîë- æåí èìåòü ðÍ â ïðåäåëàõ, óêàçàííûõ ïðîèçâî- äèòåëåì ëèçàòà àìåáîöèòîâ, îáû÷íî 6,0 – 8,0.  ñëó÷àå íåîáõîäèìîñòè ðÍ äîâîäÿò äî íóæíîãî çíà÷åíèÿ ðàñòâîðàìè êèñëîòû, îñíîâàíèÿ èëè ñ ïîìîùüþ áóôåðíîãî ðàñòâîðà. Èñïîëüçóåìûå ðàñòâîðû íå äîëæíû ñîäåðæàòü áàêòåðèàëüíûå ýíäîòîêñèíû â êîëè÷åñòâàõ, îïðåäåëÿåìûõ â òåñòå, è íå äîëæíû îêàçûâàòü âëèÿíèÿ íà õîä ðå- àêöèè. Ìàêñèìàëüíî äîïóñòèìîå ðàçâåäåíèå èñïûòóåìîãî ëåêàðñòâåííîãî ñðåäñòâà Ìàêñèìàëüíî äîïóñòèìîå ðàçâåäåíèå (ÌÄÐ) ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé íàèáîëüøåå ðàçâåäåíèå èñ- ïûòóåìîãî ëåêàðñòâåííîãî ñðåäñòâà, â êîòîðîì âîçìîæíî îïðåäåëåíèå êîíöåíòðàöèè ýíäîòîê- ñèíà, ñîîòâåòñòâóþùåé çíà÷åíèþ ïðåäåëüíîãî ñîäåðæàíèÿ áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ, óñòà- íîâëåííîìó äëÿ äàííîãî ëåêàðñòâåííîãî ñðåä- ñòâà. Èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî ìîæåò áûòü ïðîâåðåíî â îäíîì ðàçâåäåíèè èëè â ñåðèè ðàçâåäåíèé ïðè óñëîâèè, ÷òî êîíå÷íàÿ ñòåïåíü ðàçâåäåíèÿ íå ïðåâûñèò çíà÷åíèÿ ÌÄÐ, êîòîðîå ðàññ÷èòûâàåòñÿ ïî ôîðìóëå: Äëÿ ðàñ÷åòà ïðåäåëüíîãî ñîäåðæàíèÿ áàêòå- ðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ èñïîëüçóþò ñëåäóþ- ùóþ ôîðìóëó: ÌÄÐ = Ïðåäåëüíîå ñîäåð- æàíèå áàêòåðèàëü- íûõ ýíäîòîêñèíîâ · Êîíöåíòðàöèÿ èñïûòóåìîãî ðàñòâîðà l ãäå: «ïðåäåëüíîå ñîäåðæàíèå áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ» — äîïóñòèìîå ñîäåðæà- íèå áàêòåðèàëüíûõ ýí- äîòîêñèíîâ â èñïûòóå- ìîì ëåêàðñòâåííîì ñðåäñòâå, óêàçàííîå â ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå; «êîíöåíòðàöèÿ èñïûòóåìîãî ðàñòâîðà» — êîíöåíòðàöèÿ ëåêàð- ñòâåííîãî ñðåäñòâà èëè äåéñòâóþùåãî âåùåñòâà, äëÿ êîòîðî- ãî óêàçàíî ïðåäåëü- íîå ñîäåðæàíèå áàê- òåðèàëüíûõ ýíäîòîê- ñèíîâ; l — ÷óâñòâèòåëüíîñòü ëè- çàòà àìåáîöèòîâ, â ÅÝ/ìë. Ïðåäåëüíîå ñîäåðæàíèå áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ = Ê Ì , ãäå: Ê — ïîðîãîâàÿ ïèðîãåííàÿ äîçà, ðàâíàÿ 5 ÅÝ/êã â 1 ÷àñ äëÿ èñïûòóåìîãî ëå- êàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà (åñëè îí ââî- äèòñÿ ïàöèåíòó ëþáûì ïàðåíòåðàëü- íûì ïóòåì, êðîìå èíòðàòåêàëüíîãî). Ïðè èíòðàòåêàëüíîì ïóòè ââåäåíèÿ ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà Ê ñîñòàâëÿ- åò 0,2 ÅÝ/êã; Ì — ìàêñèìàëüíàÿ òåðàïåâòè÷åñêàÿ äîçà èñïûòóåìîãî ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðà- òà, ââîäèìàÿ â òå÷åíèå îäíîãî ÷àñà (âûðàæàåòñÿ â ìã, ìë èëè ÅÄ íà 1 êã ìàññû òåëà). Äëÿ ðàäèîôàðìàöåâòè÷åñêèõ ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ, ââîäèìûõ âíóòðèâåííî, ïðåäåëü- íîå ñîäåðæàíèå áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ ðàññ÷èòûâàþò êàê 175/V, ãäå V — ìàêñèìàëüíàÿ ðåêîìåíäîâàííàÿ äîçà â ìë. Äëÿ ðàäèîôàðìà- öåâòè÷åñêèõ ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ, ââîäè- ìûõ èíòðàòåêàëüíî, ïðåäåëüíîå ñîäåðæàíèå áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ ðàâíÿåòñÿ 14/V. Äëÿ ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ, äîçà êîòî- ðûõ ðàññ÷èòûâàåòñÿ íà 1 ì2 ïîâåðõíîñòè òåëà (íàïðèìåð, ïðîòèâîîïóõîëåâûå ïðåïàðàòû), ïî- ðîãîâàÿ ïèðîãåííàÿ äîçà (Ê ) ñîñòàâëÿåò 100 ÅÝ/ì2. ÃÅËÜ-ÒÐÎÌÁ ÒÅÑÒ (ÌÅÒÎÄÛ À È Â) Ãåëü-òðîìá ìåòîä ïîçâîëÿåò óñòàíîâèòü íà- ëè÷èå èëè èçìåðèòü êîëè÷åñòâåííî êîíöåíòðà- öèþ ýíäîòîêñèíîâ â ïðîáå.  ðåçóëüòàòå ðåàê- öèè ëèçàòà àìåáîöèòîâ ñ ýíäîòîêñèíîì óâåëè- ÷èâàåòñÿ âÿçêîñòü ðåàêöèîííîé ñìåñè âïëîòü äî ôîðìèðîâàíèÿ ïëîòíîãî ãåëÿ. Äëÿ îáåñïå÷åíèÿ òî÷íîñòè è äîñòîâåðíîñòè èñïûòàíèé çàÿâëåííóþ ÷óâñòâèòåëüíîñòü ëèçà- òà àìåáîöèòîâ ñëåäóåò ïîäòâåðäèòü, à òàêæå 252 ïðîâåñòè èñïûòàíèå íà íàëè÷èå ìåøàþùèõ ôàêòîðîâ, êàê îïèñàíî â ðàçäåëå «Ïðåäâàðè- òåëüíûå àíàëèçû». Ïðîöåäóðà èñïûòàíèÿ.
 êðóãëîäîííûå ïðîáèðêè äèàìåòðîì 10 ìì âíîñÿò ðàâíûå îáú- åìû èñïûòóåìîãî ðàñòâîðà è ëèçàòà àìåáîöèòîâ (ïî 0,1 ìë). Ðåàêöèîííûå ñìåñè àêêóðàòíî ïåðå- ìåøèâàþò è èíêóáèðóþò ïðè òåìïåðàòóðå 37 ± 1 °Ñ â òå÷åíèå 60 ± 2 ìèíóò. Âî âðåìÿ èí- êóáèðîâàíèÿ ñëåäóåò èçáåãàòü âèáðàöèè è óäà- ðîâ. Ïî èñòå÷åíèè óêàçàííîãî ñðîêà âèçóàëüíî ðåãèñòðèðóþò ðåçóëüòàòû êàê ïîëîæèòåëüíûå èëè îòðèöàòåëüíûå. Ïîëîæèòåëüíàÿ ðåàêöèÿ (+) õàðàêòåðèçóåòñÿ îáðàçîâàíèåì ïëîòíîãî ãåëÿ, êîòîðûé íå ðàçðóøàåòñÿ ïðè àêêóðàòíîì îäíî- êðàòíîì ïåðåâîðà÷èâàíèè ïðîáèðêè íà 180°. Îòðèöàòåëüíàÿ ðåàêöèÿ (–) õàðàêòåðèçóåòñÿ îò- ñóòñòâèåì òàêîãî ãåëÿ. ÏÐÅÄÂÀÐÈÒÅËÜÍÛÅ ÀÍÀËÈÇÛ Ïîäòâåðæäåíèå çàÿâëåííîé ÷óâñòâèòåëüíîñòè ëèçàòà àìåáîöèòîâ Àíàëèç ïðîâîäÿò äëÿ êàæäîé íîâîé ñåðèè èñïîëüçóåìîãî ëèçàòà àìåáîöèòîâ, à òàêæå ïðè èçìåíåíèè óñëîâèé ýêñïåðèìåíòà, èñïîëüçóå- ìûõ ìàòåðèàëîâ è ðåàêòèâîâ, ñïîñîáíûõ ïîâëè- ÿòü íà ðåçóëüòàòû òåñòà. Ïðîöåäóðà èñïûòàíèÿ. Äëÿ ïðîâåäåíèÿ àíàëèçà ãîòîâÿò ðàñòâîðû C è D ïî ñõåìå, ïðè- âåäåííîé â Òàáëèöå 2.1.6.8.-1. Ðàñòâîðû Ñ — ñåðèÿ ðàçâåäåíèé ÊÑÝ â âîäå äëÿ òåñòà (ïðîâåðêà ÷óâñòâèòåëüíîñòè ëè- çàòà àìåáîöèòîâ); Ðàñòâîð D — âîäà äëÿ ÁÝÒ(îòðèöàòåëüíûé êîíòðîëü). Ðåçóëüòàòû è èíòåðïðåòàöèÿ. Àíàëèç ñ÷èòàþò äîñòîâåðíûì, åñëè: – äëÿ ðàñòâîðà D (îòðèöàòåëüíûé êîí- òðîëü) âî âñåõ ïîâòîðíîñòÿõ ïîëó÷åíû îòðèöà- òåëüíûå ðåçóëüòàòû; – äëÿ ðàñòâîðà Ñ ñ êîíöåíòðàöèåé 2l, ïî- ëó÷åíû ïîëîæèòåëüíûå ðåçóëüòàòû; – äëÿ ðàñòâîðà Ñ ñ êîíöåíòðàöèåé 0,25l, ïîëó÷åíû îòðèöàòåëüíûå ðåçóëüòàòû. Êîíå÷íîé òî÷êîé ðåàêöèè äëÿ êàæäîé èç ïî- âòîðíîñòåé ðàñòâîðà Ñ ÿâëÿåòñÿ ïîëîæèòåëü- íûé ðåçóëüòàò, ïîëó÷åííûé äëÿ ðàñòâîðà ñ íàè- ìåíüøåé êîíöåíòðàöèåé ÊÑÝ. Ïî ýòèì ðåçóëü- òàòàì ðàññ÷èòûâàåòñÿ ñðåäíåå ãåîìåòðè÷åñêîå çíà÷åíèå ÷óâñòâèòåëüíîñòè ëèçàòà àìåáîöèòîâ- ïî ñëåäóþùåé ôîðìóëå: Ñðåäíåå ãåîìåòðè÷åñêîå çíà÷åíèå êîíöåíòðàöèé ÊÑÝ â êîíå÷íîé òî÷êå ðåàêöèè = antilog e f åæ è ç ç ö ø ÷ ÷ ãäå: eå — ñóììà ëîãàðèôìîâ êîíöåíòðàöèé ÊÑÝ â êîíå÷íîé òî÷êå ðåàêöèè â êàæäîé èç ïîâòîðíîñòåé; f — ÷èñëî ïîâòîðíîñòåé. Çàÿâëåííàÿ ÷óâñòâèòåëüíîñòü ëèçàòà àìåáî- öèòîâ ñ÷èòàåòñÿ ïîäòâåðæäåííîé è èñïîëüçóåò- ñÿ â äàëüíåéøèõ ðàñ÷åòàõ â òîì ñëó÷àå, åñëè ïî- ëó÷åííîå â ýêñïåðèìåíòå çíà÷åíèå ÷óâñòâèòåëü- íîñòè ëèçàòà àìåáîöèòîâ, íå ìåíåå 0,5l è íå áîëåå 2l. Ìåøàþùèå ôàêòîðû Èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî ìîæåò ñîäåðæàòü ìåøàþùèå ôàêòîðû, óñèëèâàþùèå è/èëè èíãèáèðóþùèå ðåàêöèþ ëèçàòà àìåáîöè- òîâ ñ áàêòåðèàëüíûìè ýíäîòîêñèíàìè. Îáíàðó- æèòü ýòè ÿâëåíèÿ ìîæíî, ñðàâíèâ ñïîñîáíîñòü èñïîëüçóåìîãî ëèçàòà àìåáîöèòîâ ðåàãèðîâàòü ñ ðàñòâîðîì ÊÑÝ â âîäå äëÿ ÁÝÒ è â ðàñòâîðå èñ- ïûòóåìîãî ëåêàð7ñòâåííîãî ñðåäñòâà â ñòàí- äàðòíûõ óñëîâèÿõ ïðîâåäåíèÿ ýêñïåðèìåíòà. Èñïûòàíèþ ìîæåò áûòü ïîäâåðãíóòî ëåêàð- ñòâåííîå ñðåäñòâî â ëþáîì ðàçâåäåíèè, íå ïðå- âûøàþùåì çíà÷åíèÿ ÌÄÐ. Èñïîëüçóåìûå â äàííîì àíàëèçå ïðîáû èñïûòóåìîãî ëåêàðñò- âåííîãî ñðåäñòâà (èëè åãî ðàçâåäåíèÿ) íå äîëæ- 253 Òàáëèöà 2.1.6.8.-1. — Ñõåìà ýêñïåðèìåíòà «Ïîäòâåðæäåíèå çàÿâëåííîé ÷óâñòâèòåëüíîñòè ëèçàòà àìåáîöè- òîâ» Ðàñòâîð Èñõîäíûé ðàñòâîð Ðàñòâîðèòåëü Ôàêòîð ðàçâåäåíèÿ Êîíå÷íàÿ êîíöåíòðàöèÿ ÊÑÝ â èñïûòóåìîì ðàñòâîðå Êîëè÷åñòâî ïîâòîðíîñòåé Ñ Ðàñòâîð ÊÑÝ â âîäå äëÿ ÁÝÒ ñ êîíöåíòðàöèåé 2l Âîäà äëÿ ÁÝÒ 1 2 4 8 2l 1l 0,5l 0,25l 4 4 4 4 D Âîäà äëÿ ÁÝÒ — — — 2 íû ñîäåðæàòü áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ â îïðåäåëÿåìûõ â òåñòå êîëè÷åñòâàõ. Ïðîöåäóðà èñïûòàíèÿ. Äëÿ ïðîâåäåíèÿ àíàëèçà ãîòîâÿò ðàñòâîðû À – D ïî ñõåìå, ïðè- âåäåííîé â Òàáëèöå 2.1.6.8.-2.
Ðàñòâîð À — èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî â âûáðàííîì ðàçâåäåíèè (êîíòðîëü îò- ñóòñòâèÿ áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ); Ðàñòâîðû  — ñåðèÿ ðàçâåäåíèé ÊÑÝ â ðàñ- òâîðå èñïûòóåìîãî ëåêàðñòâåííîãî ñðåäñòâà (âûÿâëåíèå âîçìîæíîñòè èíãèáèðîâàíèÿ èëè óñèëåíèÿ ðåàêöèè); Ðàñòâîðû Ñ — ñåðèÿ ðàçâåäåíèé ÊÑÝ â âîäå äëÿ ÁÝÒ (ïîëîæèòåëüíûé êîíòðîëü); Ðàñòâîð D — âîäà äëÿ ÁÝÒ (îòðèöàòåëüíûé êîíòðîëü). Ðåçóëüòàòû è èíòåðïðåòàöèÿ. Ðåçóëüòàòû ýêñïåðèìåíòà ñ÷èòàþòñÿ äîñòîâåðíûìè, åñëè: – äëÿ ðàñòâîðîâ À è D ïîëó÷åíû îòðèöà- òåëüíûå ðåçóëüòàòû âî âñåõ ïîâòîðíîñòÿõ; – äëÿ ðàñòâîðîâ Ñ (ïîëîæèòåëüíûé êîí- òðîëü) ñðåäíåå ãåîìåòðè÷åñêîå çíà÷åíèå êîí- öåíòðàöèè áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ ñî- ñòàâëÿåò íå ìåíåå 0,5l è íå áîëåå 2l. Ïî ðåçóëüòàòàì, ïîëó÷åííûì äëÿ êàæäîé èç ïîâòîðíîñòåé ðàñòâîðîâ Â, ðàññ÷èòûâàþò ñðåä- íåå ãåîìåòðè÷åñêîå çíà÷åíèå ÷óâñòâèòåëüíîñòè ëèçàòà àìåáîöèòîâ. Ðàñ÷åò ïðîâîäÿò, êàê îïèñà- íî â ðàçäåëå «Ïîäòâåðæäåíèå çàÿâëåííîé ÷óâ- ñòâèòåëüíîñòè ëèçàòà àìåáîöèòîâ». Åñëè ïî- ëó÷åííîå ñðåäíåå çíà÷åíèå îêàçàëîñü íå ìåíåå 0,5l è íå áîëåå 2l, ñ÷èòàþò äîêàçàííûì, ÷òî èñ- ïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî â âûáðàííîì ðàçâåäåíèè íå ñîäåðæèò ìåøàþùèõ ôàêòîðîâ, ñïîñîáíûõ èíãèáèðîâàòü è/èëè óñèëèâàòü ðåàê- öèþ ëèçàòà àìåáîöèòîâ ñ áàêòåðèàëüíûìè ýíäî- òîêñèíàìè è îíî ìîæåò áûòü ïîäâåðãíóòî àíàëèçó íà ñîäåðæàíèå áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîê- ñèíîâ. Åñëè îáíàðóæåíî ïðèñóòñòâèå ìåøàþùèõ ôàêòîðîâ äëÿ èñïûòóåìîãî ëåêàðñòâåííîãî ñðåäñòâà, êîòîðîå ïðîâåðÿëîñü â ðàçâåäåíèè, ìåíüøåì ÌÄÐ, àíàëèç ïîâòîðÿþò â áîëüøåì ðàçâåäåíèè, âïëîòü äî ðàçâåäåíèÿ, ðàâíîãî ÌÄÐ.  áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ äîïîëíèòåëüíîå ðàçâåäåíèå èñïûòóåìîãî ëåêàðñòâåííîãî ñðåä- ñòâà ñïîñîáíî óñòðàíèòü äåéñòâèå ìåøàþùèõ ôàêòîðîâ. Èñïîëüçîâàíèå ëèçàòà àìåáîöèòîâ áîëüøåé ÷óâñòâèòåëüíîñòè ïîçâîëÿåò óâåëè- ÷èòü ñòåïåíü ðàçâåäåíèÿ. Äåéñòâèå ìåøàþùèõ ôàêòîðîâ ìîæåò áûòü ïðåîäîëåíî ñîîòâåòñòâóþùåé ïîäãîòîâêîé îá- ðàçöà, íàïðèìåð, ôèëüòðàöèåé, íåéòðàëèçàöèåé, äèàëèçîì èëè òåìïåðàòóðíîé îáðàáîòêîé. Âû- áðàííûé ñïîñîá óäàëåíèÿ ìåøàþùèõ ôàêòîðîâ íå äîëæåí èçìåíÿòü êîíöåíòðàöèþ áàêòåðèàëü- íûõ ýíäîòîêñèíîâ â èñïûòóåìîì ëåêàðñòâåííîì ñðåäñòâå, ïîýòîìó ê ðàñòâîðó èñïûòóåìîãî ëå- êàðñòâåííîãî ñðåäñòâà ÊÑÝ èçâåñòíîé êîíöåí- òðàöèè äîáàâëÿþò ïåðåä ïðîâåäåíèåì òàêîé îáðàáîòêè, ïîñëå ÷åãî ïðîâîäÿò àíàëèç «Ìå- øàþùèå ôàêòîðû». Åñëè ïîñëå îáðàáîòêè âû- áðàííûì ñïîñîáîì ðåçóëüòàòû àíàëèçà îêàæóò- ñÿ óäîâëåòâîðèòåëüíûìè, òî èñïûòóåìîå ëåêàð- ñòâåííîå ñðåäñòâî ìîæåò áûòü ïîäâåðãíóòî àíàëèçó íà ñîäåðæàíèå áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîê- ñèíîâ. Åñëè èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî íåëüçÿ îñâîáîäèòü îò ìåøàþùèõ ôàêòîðîâ, îíî íå ìîæåò áûòü èññëåäîâàíî ñ ïîìîùüþ òåñòà, îïðåäåëÿþùåãî ñîäåðæàíèå áàêòåðèàëüíûõ ýí- äîòîêñèíîâ. 254 Òàáëèöà 2.1.6.8.-2. — Ñõåìà ýêñïåðèìåíòà «Ìåøàþùèå ôàêòîðû» Ðàñòâîð Èñõîäíûé ðàñòâîð Ðàñòâîðèòåëü Ôàêòîð ðàçâåäåíèÿ Êîíå÷íàÿ êîíöåíòðàöèÿ ýíäîòîêñèíà â èñïûòóåìîì ðàñòâîðå Êîëè÷åñòâî ïîâòîðíîñòåé A Èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî — — — 4 B Èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî, ñîäåðæàùåå ÊÑÝ â êîíöåíòðàöèè 2l Èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî 1 2 4 8 2l 1l 0,5l 0,25l 4 4 4 4 Ñ Ðàñòâîð ÊÑÝ â âîäå äëÿ ÁÝÒ êîíöåíòðàöèåé 2l Âîäà äëÿ ÁÝÒ 1 2 4 8 2l 1l 0,5l 0,25l 2 2 2 2 D Âîäà äëÿ ÁÝÒ — — — 2 ÊÀ×ÅÑÒÂÅÍÍÛÉ ÀÍÀËÈÇ (Ìåòîä À) Çàäà÷åé ýòîãî àíàëèçà ÿâëÿåòñÿ ïîäòâåðæäå- íèå òîãî, ÷òî ñîäåðæàíèå áàêòåðèàëüíûõ ýíäî- òîêñèíîâ â èñïûòóåìîì îáðàçöå íå ïðåâûøàåò çíà÷åíèÿ ïðåäåëüíîãî ñîäåðæàíèÿ áàêòåðèàëü- íûõ ýíäîòîêñèíîâ, óêàçàííîãî â ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. Ïðîöåäóðà èñïûòàíèÿ. Äëÿ ïðîâåäåíèÿ àíàëèçà ãîòîâÿò Ðàñòâîðû À – D ïî ñõåìå, ïðè- âåäåííîé â Òàáëèöå 2.1.6.8.-3.
Ðàñòâîð À — èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî â ðàçâåäåíèè, â êîòîðîì îòñóòñòâóþò ìåøàþùèå ôàêòîðû, èëè â áîëüøåì ðàçâåäå- íèè, íå ïðåâûøàþùåì ÌÄÐ; Ðàñòâîð  — èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî â âûáðàííîì ðàçâåäåíèè, ê êîòîðîìó äîáàâëåí ÊÑÝ. Êîíå÷íàÿ êîíöåíòðàöèÿ ýíäî- òîêñèíà â àíàëèçèðóåìîì ðàñòâîðå äîëæíà ñî- ñòàâëÿòü 2l (ïîëîæèòåëüíûé êîíòðîëü èñïûòóå- ìîãî îáðàçöà). Ðàñòâîð Ñ — ðàñòâîð ÊÑÝ â âîäå äëÿ ÁÝÒ ñ êîíå÷íîé êîíöåíòðàöèåé 2l (ïîëîæèòåëüíûé êîíòðîëü). Ðàñòâîð D — âîäà äëÿ ÁÝÒ (îòðèöàòåëüíûé êîíòðîëü). Ðåçóëüòàòû è èíòåðïðåòàöèÿ. Àíàëèç ñ÷èòàþò äîñòîâåðíûì, åñëè: – äëÿ ðàñòâîðà D (îòðèöàòåëüíûé êîí- òðîëü) ïîëó÷åíû îòðèöàòåëüíûå ðåçóëüòàòû â îáåèõ ïîâòîðíîñòÿõ; – äëÿ ðàñòâîðà Ñ (ïîëîæèòåëüíûé êîí- òðîëü) âî âñåõ ïîâòîðíîñòÿõ ïîëó÷åíû ïîëîæè- òåëüíûå ðåçóëüòàòû; – äëÿ ðàñòâîðà  (ïîëîæèòåëüíûé êîí- òðîëü èñïûòóåìîãî îáðàçöà) â îáåèõ ïîâòîðíî- ñòÿõ ïîëó÷åíû ïîëîæèòåëüíûå ðåçóëüòàòû. Åñëè äëÿ ðàñòâîðà À â äâóõ ïîâòîðíîñòÿõ ïîëó÷åíû îòðèöàòåëüíûå ðåçóëüòàòû, ëåêàðñò- âåííîå ñðåäñòâî ñ÷èòàþò âûäåðæàâøèì èñïû- òàíèÿ. Åñëè äëÿ èñïûòóåìîãî ëåêàðñòâåííîãî ñðåä- ñòâà â ðàçâåäåíèè, ìåíüøåì ÌÄÐ, â äâóõ ïî- âòîðíîñòÿõ ïîëó÷åíû ïîëîæèòåëüíûå ðåçóëüòà- òû, àíàëèç ñëåäóåò ïîâòîðèòü â áîëüøåì ðàçâå- äåíèè èëè â ðàçâåäåíèè, ðàâíîì ÌÄÐ. Åñëè äëÿ èñïûòóåìîãî ëåêàðñòâåííîãî ñðåä- ñòâà â ðàçâåäåíèè, ðàâíîì ÌÄÐ, â äâóõ ïîâòîð- íîñòÿõ ïîëó÷åíû ïîëîæèòåëüíûå ðåçóëüòàòû, òî ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî íå ñîîòâåòñòâóåò òðåáî- âàíèÿì ðàçäåëà «Áàêòåðèàëüíûå ýíäîòîêñèíû» ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüè ëåêàðñòâåííîãî ñðåäñò- âà. Åñëè ïîëîæèòåëüíûé ðåçóëüòàò ïîëó÷åí â îäíîé èç ïîâòîðíîñòåé äëÿ ðàñòâîðà À, òî ïðî- âîäÿò ïîâòîðíûé àíàëèç. Ëåêàðñòâåííîå ñðåäñò- âî ñ÷èòàåòñÿ âûäåðæàâøèì èñïûòàíèÿ, åñëè â ïîâòîðíîì àíàëèçå äëÿ äâóõ ïîâòîðíîñòåé ïî- ëó÷åíû îòðèöàòåëüíûå ðåçóëüòàòû. ÊÎËÈ×ÅÑÒÂÅÍÍÛÉ ÀÍÀËÈÇ (Ìåòîä Â) Ýòèì ìåòîäîì îïðåäåëÿþò ñîäåðæàíèå áàê- òåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ ñ ïîìîùüþ ðÿäà ïî- ñëåäîâàòåëüíûõ ðàçâåäåíèé èñïûòóåìîãî ëå- êàðñòâåííîãî ñðåäñòâà. Ïðîöåäóðà èñïûòàíèÿ. Äëÿ ïðîâåäåíèÿ àíàëèçà ãîòîâÿò Ðàñòâîðû A – D ïî ñõåìå, ïðè- âåäåííîé â Òàáëèöå 2.1.6.8.-4. Ðàñòâîðû À — ðàçâåäåíèÿ èñïûòóåìîãî ëå- êàðñòâåííîãî ñðåäñòâà, íà÷èíàÿ ñ òîãî ðàçâåäå- íèÿ, â êîòîðîì îòñóòñòâóþò ìåøàþùèå ôàêòî- ðû, äî íàèáîëüøåãî ðàçâåäåíèÿ, íå ïðåâûøàþ- ùåãî ÌÄÐ. Ðàñòâîð  — íàèìåíüøåå ðàçâåäåíèå èç ñå- ðèè ðàçâåäåíèé ðàñòâîðà À, ê êîòîðîìó äîáàâ- ëåí ðàñòâîð ÊÑÝ. Êîíå÷íàÿ êîíöåíòðàöèÿ ýíäî- òîêñèíà â àíàëèçèðóåìîì ðàñòâîðå äîëæíà ñîñòàâëÿòü 2l (ïîëîæèòåëüíûé êîíòðîëü èñïû- òóåìîãî îáðàçöà). Ðàñòâîðû Ñ — ñåðèÿ ðàçâåäåíèé ÊÑÝ â âîäå äëÿ ÁÝÒ (ïîëîæèòåëüíûé êîíòðîëü). 255 Òàáëèöà 2.1.6.8.-3. — Ñõåìà ýêñïåðèìåíòà «Êà÷åñòâåííûé àíàëèç» Ðàñòâîð Èñõîäíûé ðàñòâîð Êîíå÷íàÿ êîíöåíòðàöèÿ ýíäîòîêñèíà (ÊÑÝ) â èñïûòóåìîì ðàñòâîðå Êîëè÷åñòâî ïîâòîðíîñòåé À Èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî — 2  Èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî, ñîäåðæàùåå ÊÑÝ â êîíöåíòðàöèè 2l 2l 2 Ñ Ðàñòâîð ÊÑÝ â âîäå äëÿ ÁÝÒ ñ êîíöåíòðàöèåé 2l 2l 2 D Âîäà äëÿ ÁÝÒ — 2 Ðàñòâîð D — âîäà äëÿ ÁÝÒ (îòðèöàòåëüíûé êîíòðîëü). Ðåçóëüòàòû è èíòåðïðåòàöèÿ. Àíàëèç ñ÷èòàþò äîñòîâåðíûì, åñëè: – äëÿ ðàñòâîðà D (îòðèöàòåëüíûé êîí- òðîëü) ïîëó÷åíû îòðèöàòåëüíûå ðåçóëüòàòû â äâóõ ïîâòîðíîñòÿõ; – äëÿ ðàñòâîðîâ Ñ (ïîëîæèòåëüíûé êîí- òðîëü) ñðåäíåå ãåîìåòðè÷åñêîå çíà÷åíèå êîí- öåíòðàöèè áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ ñî- ñòàâëÿåò íå ìåíåå 0,5l è íå áîëåå 2l; – äëÿ ðàñòâîðà  (ïîëîæèòåëüíûé êîí- òðîëü èñïûòóåìîãî îáðàçöà) ïîëó÷åíû ïîëîæè- òåëüíûå ðåçóëüòàòû â äâóõ ïîâòîðíîñòÿõ. Äëÿ ðàñòâîðîâ À êîíå÷íîé òî÷êîé ðåàêöèè ÿâëÿåòñÿ ïîëîæèòåëüíûé ðåçóëüòàò, ïîëó÷åí- íûé äëÿ íàèáîëüøåãî ðàçâåäåíèÿ èñïûòóåìîãî ëåêàðñòâåííîãî ñðåäñòâà.
Çíà÷åíèå ïðîèçâåäåíèÿ ôàêòîðà ýòîãî ðàçâå- äåíèÿ íà âåëè÷èíó ÷óâñòâèòåëüíîñòè ëèçàòà àìåáîöèòîâ (l) ðàâíî êîíöåíòðàöèè ýíäîòîêñè- íà â ðàñòâîðå À, ïîëó÷åííîé äëÿ äàííîé ïî- âòîðíîñòè. Ñðåäíåå ãåîìåòðè÷åñêîå çíà÷åíèå êîíöåíòðàöèè ýíäîòîêñèíà ðàññ÷èòûâàþò, êàê îïèñàíî â ðàçäåëå «Ïîäòâåðæäåíèå çàÿâëåííîé ÷óâñòâèòåëüíîñòè ëèçàòà àìåáîöèòîâ». Åñëè âî âñåõ ïîâòîðíîñòÿõ ñåðèè ðàñòâîðîâ À ïîëó÷åíû îòðèöàòåëüíûå ðåçóëüòàòû, òî êîí- öåíòðàöèÿ áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ â èñ- ïûòóåìîì ëåêàðñòâåííîì ñðåäñòâå ìåíüøå âå- ëè÷èíû ïðîèçâåäåíèÿ ÷óâñòâèòåëüíîñòè ëèçàòà àìåáîöèòîâ è íàèìåíüøåãî ôàêòîðà ðàçâåäåíèÿ. Åñëè âî âñåõ ïîâòîðíîñòÿõ ñåðèè ðàñòâîðîâ À ïîëó÷åíû ïîëîæèòåëüíûå ðåçóëüòàòû, òî êîí- öåíòðàöèÿ áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ â èñ- ïûòóåìîì ëåêàðñòâåííîì ñðåäñòâå áîëüøå âåëè÷èíû ïðîèçâåäåíèÿ ÷óâñòâèòåëüíîñòè ëè- çàòà àìåáîöèòîâ è íàèáîëüøåãî ôàêòîðà ðàçâå- äåíèÿ. Ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî ñ÷èòàþò âûäåðæàâ- øèì èñïûòàíèå, åñëè îïðåäåëåííîå â ýêñïåðè- ìåíòå ñðåäíåå çíà÷åíèå ñîäåðæàíèÿ áàêòåðè- àëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ ìåíåå çíà÷åíèÿ ïðåäåëü- íîãî ñîäåðæàíèÿ áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ, óêàçàííîãî â ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå ëåêàðñòâåí- íîãî ñðåäñòâà. ÔÎÒÎÌÅÒÐÈ×ÅÑÊÈÅ ÌÅÒÎÄÛ (ÌÅÒÎÄÛ C, D, E È F) ÒÓÐÁÈÄÈÌÅÒÐÈ×ÅÑÊÈÅ ÌÅÒÎÄÛ (C È F) Òóðáèäèìåòðè÷åñêèå ìåòîäû îòíîñÿòñÿ ê ôîòîìåòðè÷åñêèì ìåòîäàì, îñíîâàííûì íà èç- ìåðåíèè ñòåïåíè ìóòíîñòè ðåàêöèîííîé ñìåñè.  çàâèñèìîñòè îò ïðèíöèïà, ïîëîæåííîãî â îñ- íîâó ïðîâåäåíèÿ èñïûòàíèÿ, óêàçàííûé ìåòîä ìîæåò áûòü ïðîâåäåí êàê òóðáèäèìåòðè÷åñêèé òåñò ïî êîíå÷íîé òî÷êå, ëèáî êàê òóðáèäèìåòðè- ÷åñêèé êèíåòè÷åñêèé àíàëèç. Òóðáèäèìåòðè÷åñêèé òåñò ïî êîíå÷íîé òî÷- êå (Ìåòîä F) îñíîâàí íà èçìåðåíèè ñòåïåíè ìóòíîñòè ðåàêöèîííîé ñìåñè â êîíöå èíêóáàöè- îííîãî ïåðèîäà, êîòîðàÿ çàâèñèò îò êîíöåíòðà- öèè ýíäîòîêñèíà. Òóðáèäèìåòðè÷åñêèé êèíåòè÷åñêèé òåñò (Ìåòîä Ñ) îñíîâàí íà îïðåäåëåíèè ñêîðîñòè ðàçâèòèÿ ìóòíîñòè ðåàêöèîííîé ñìåñè, èçìå- 256 Òàáëèöà 2.1.6.8.-4. — Ñõåìà ýêñïåðèìåíòà «Êîëè÷åñòâåííûé àíàëèç» Ðàñòâîð Èñõîäíûé ðàñòâîð Ðàñòâîðèòåëü Ôàêòîð ðàçâåäåíèÿ Êîíå÷íàÿ êîíöåíòðàöèÿ ÊÑÝ â èñïûòóåìîì ðàñòâîðå Êîëè÷åñòâî ïîâòîðíîñòåé À Èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî Âîäà äëÿ ÁÝÒ 1 2 4 8 è ò.ä. äî ÌÄÐ — — — — 2 2 2 2  Èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî, ñîäåðæàùåå ÊÑÝ â êîíöåíòðàöèè 2l Èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî 1 2l 2 Ñ Ðàñòâîð ÊÑÝ â âîäå äëÿ ÁÝÒ ñ êîíöåíòðàöèåé 2l Âîäà äëÿ ÁÝÒ 1 2 4 8 2l 1l 0,5l 0,25l 2 2 2 2 D Âîäà äëÿ ÁÝÒ — — — 2 ðÿåìîé ïî âðåìåíè, íåîáõîäèìîìó äëÿ äîñòè- æåíèÿ çàäàííîé âåëè÷èíû îïòè÷åñêîé ïëîòíî- ñòè. Èñïûòàíèå ïðîâîäÿò ïðè òåìïåðàòóðå èíêó- áèðîâàíèÿ, ðåêîìåíäîâàííîé ïðîèçâîäèòåëåì ëèçàòà àìåáîöèòîâ(îáû÷íî 37 ± 1 °Ñ). ÕÐÎÌÎÃÅÍÍÛÅ ÌÅÒÎÄÛ (D È E) Õðîìîãåííûå ìåòîäû èñïîëüçóþò äëÿ èçìå- ðåíèÿ êîëè÷åñòâà õðîìîôîðà, âûñâîáîäèâøåãî- ñÿ èç õðîìîãåííîãî ñóáñòðàòà â ðåçóëüòàòå ðåàê- öèè ýíäîòîêñèíîâ ñ ëèçàòîì àìåáîöèòîâ.  çà- âèñèìîñòè îò ïðèíöèïà, ïîëîæåííîãî â îñíîâó èñïûòàíèÿ, ýòîò ìåòîä ìîæåò áûòü ïðîâåäåí êàê õðîìîãåííûé òåñò ïî êîíå÷íîé òî÷êå èëè êàê õðîìîãåííûé êèíåòè÷åñêèé àíàëèç. Õðîìîãåííûé òåñò ïî êîíå÷íîé òî÷êå (Ìå- òîä Å ) îñíîâàí íà èçìåðåíèè èíòåíñèâíîñòè îêðàñêè ðåàêöèîííîé ñìåñè, çàâèñÿùåé îò êî- ëè÷åñòâà õðîìîôîðà, âûñâîáîäèâøåãîñÿ â êîí- öå èíêóáàöèîííîãî ïåðèîäà. Êîëè÷åñòâî, âûäå- ëèâøåãîñÿ õðîìîôîðà, çàâèñèò îò êîíöåíòðà- öèè ýíäîòîêñèíà.  ïðîöåññå èñïûòàíèÿ õðîìîãåííûì êèíå- òè÷åñêèì ìåòîäîì (ìåòîä D ) îïðåäåëÿþò ñêî- ðîñòü ðàçâèòèÿ îêðàñêè ðåàêöèîííîé ñìåñè, èçìåðÿåìîé ïî âðåìåíè, íåîáõîäèìîìó äëÿ äîñ- òèæåíèÿ çàäàííîé âåëè÷èíû îïòè÷åñêîé ïëîò- íîñòè ðåàêöèîííîé ñìåñè. Èñïûòàíèå ïðîâîäÿò ïðè òåìïåðàòóðå èíêó- áèðîâàíèÿ, ðåêîìåíäîâàííîé ïðîèçâîäèòåëåì ëèçàòà àìåáîöèòîâ (îáû÷íî 37 ± 1 °Ñ).
ÏÐÅÄÂÀÐÈÒÅËÜÍÛÅ ÀÍÀËÈÇÛ Äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ äîñòîâåðíîñòè è òî÷íî- ñòè èñïûòàíèÿ òóðáèäèìåòðè÷åñêèì èëè õðî- ìîãåííûì ìåòîäîì ïðîâîäÿò ïðåäâàðèòåëüíûå àíàëèçû, ïîçâîëÿþùèå óáåäèòüñÿ â äîñòîâåðíî- ñòè êðèòåðèåâ äëÿ ñòàíäàðòíîé êðèâîé è â òîì, ÷òî èñïûòóåìûé ðàñòâîð íå ñîäåðæèò ôàêòîðîâ, ìåøàþùèõ ïðîâåäåíèþ ðåàêöèè. Ïðè âíåñåíèè ëþáûõ èçìåíåíèé, ñïîñîá- íûõ ïîâëèÿòü íà ðåçóëüòàòû ýêñïåðèìåíòà, òðå- áóåòñÿ äîïîëíèòåëüíîå ïîäòâåðæäåíèå äîñòî- âåðíîñòè è òî÷íîñòè èñïûòàíèÿ. Ïðîâåðêà äîñòîâåðíîñòè êðèòåðèåâ ñòàíäàðòíîé êðèâîé Àíàëèç ïðîâîäÿò äëÿ êàæäîé íîâîé ñåðèè ëèçàòà àìåáîöèòîâ. Äëÿ ïîñòðîåíèÿ ñòàíäàðòíîé êðèâîé èç èñ- õîäíîãî ðàñòâîðà ÊÑÝ ãîòîâÿò íå ìåíåå òðåõ ðàçëè÷íûõ êîíöåíòðàöèé ýíäîòîêñèíà â ñîîò- âåòñòâèè ñ ðåêîìåíäàöèÿìè ïðîèçâîäèòåëÿ ëèçàòà àìåáîöèòîâ. Àíàëèç ïðîâîäÿò, êàê ìèíè- ìóì, â òðåõ ïîâòîðíîñòÿõ â óñëîâèÿõ, ïðåäó- ñìîòðåííûõ ïðîèçâîäèòåëåì ëèçàòà àìåáîöè- òîâ (îáúåìíûå ñîîòíîøåíèÿ, âðåìÿ èíêóáèðî- âàíèÿ, òåìïåðàòóðà, ðÍ è ò.ä.). Åñëè â êèíåòè÷åñêèõ ìåòîäàõ íåîáõîäèìî ïîñòðîèòü ñòàíäàðòíóþ êðèâóþ ñ äèàïàçîíîì ÊÑÝ, ïðåâûøàþùèì 2 lg âåëè÷èíû êîíöåíòðà- öèè ýíäîòîêñèíà äëÿ êàæäîãî èçìåíåíèÿ äèàïà- çîíà èçìåðåíèÿ íà lg âåëè÷èíû êîíöåíòðàöèé ýíäîòîêñèíà, â ñõåìó îïûòà íåîáõîäèìî âêëþ- ÷èòü ðàñòâîð ÊÑÝ ñîîòâåòñòâóþùåé êîíöåíòðà- öèè. Äëÿ ïðîâåðÿåìîãî äèàïàçîíà êîíöåíòðàöèé ýíäîòîêñèíà àáñîëþòíîå çíà÷åíèå êîýôôèöèåí- òà êîððåëÿöèè |r| äîëæíî áûòü ðàâíî èëè áîëåå 0,980. Ìåøàþùèå ôàêòîðû Èñïûòàíèþ ìîæåò áûòü ïîäâåðãíóòî ëåêàð- ñòâåííîå ñðåäñòâî â ëþáîì ðàçâåäåíèè, íå ïðå- âûøàþùåì çíà÷åíèÿ ÌÄÐ. Ïðîöåäóðà èñïûòàíèÿ. Ãîòîâÿò ðàñòâîðû A – D, êàê óêàçàíî â Òàáëèöå 2.1.6.8.-5. Èñïûòà- íèå ðàñòâîðîâ A, B, C è D ïðîâîäÿò ïî ìåíüøåé ìåðå â äâóõ ïîâòîðíîñòÿõ, â ñîîòâåòñòâèè ñ ðå- êîìåíäàöèÿìè ïðîèçâîäèòåëÿ ëèçàòà àìåáîöè- òîâ (îáúåìû è îáúåìíûå ñîîòíîøåíèÿ èñïûòóå- ìîãî ïðåïàðàòà è ëèçàòà àìåáîöèòîâ, âðåìÿ èí- êóáèðîâàíèÿ, òåìïåðàòóðà, ðÍ è ò.ä.). 257 Òàáëèöà 2.1.6.8.-5. — Ñõåìà ýêñïåðèìåíòà «Ìåøàþùèå ôàêòîðû» Ðàñòâîð Êîíöåíòðàöèÿ ýíäîòîêñèíà Ðàñòâîð, ê êîòîðîìó äîáàâëåí ýíäîòîêñèí Êîëè÷åñòâî ïîâòîðíîñòåé À — Èñïûòóåìûé ðàñòâîð Íå ìåíåå 2 B Ñðåäíÿÿ êîíöåíòðàöèÿ ñòàíäàðòíîé êðèâîé Èñïûòóåìûé ðàñòâîð Íå ìåíåå 2 C Íå ìåíåå 3-õ êîíöåíòðàöèé (íàèìåíüøàÿ êîíöåíòðàöèÿ îáîçíà÷àåòñÿ l) Âîäà äëÿ ÁÝÒ Íå ìåíåå 2 äëÿ êàæäîé èç êîíöåíòðàöèé D — Âîäà äëÿ ÁÝÒ Íå ìåíåå 2 Ðàñòâîð À — ðàñòâîð èñïûòóåìîãî ëåêàðñò- âåííîãî ñðåäñòâà â ðàçâåäåíèè, íå ïðåâûøàþ- ùåì çíà÷åíèå ÌÄÐ; Ðàñòâîð  — èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî â âûáðàííîì ðàçâåäåíèè, ê êîòîðîìó äîáàâëåí ÊÑÝ. Êîíå÷íàÿ êîíöåíòðàöèÿ ýíäî- òîêñèíà â àíàëèçèðóåìîì ðàñòâîðå äîëæíà ñî- îòâåòñòâîâàòü èëè áûòü áëèçêîé ñðåäíåìó çíà- ÷åíèþ êîíöåíòðàöèé ÊÑÝ, èñïîëüçîâàííûõ äëÿ ïîñòðîåíèÿ ñòàíäàðòíîé êðèâîé (ïîëîæèòåëü- íûé êîíòðîëü èñïûòóåìîãî îáðàçöà); Ðàñòâîðû Ñ — ðàñòâîðû ÊÑÝ, èñïîëüçóå- ìûå äëÿ ïîñòðîåíèÿ ñòàíäàðòíîé êðèâîé â òåõ æå êîíöåíòðàöèÿõ, êîòîðûå èñïîëüçîâàëèñü ïðè ïðîâåäåíèè àíàëèçà «Ïðîâåðêà äîñòîâåðíîñòè êðèòåðèåâ ñòàíäàðòíîé êðèâîé» (ïîëîæèòåëü- íûé êîíòðîëü); Ðàñòâîð D — âîäà äëÿ ÁÝÒ (îòðèöàòåëüíûé êîíòðîëü). Èñïûòàíèå ñ÷èòàþò äîñòîâåðíûì, åñëè ñî- áëþäåíû ñëåäóþùèå óñëîâèÿ: – ðåçóëüòàòû, ïîëó÷åííûå äëÿ ñòàíäàðòíîé êðèâîé (Ðàñòâîð Ñ ) ñîîòâåòñòâóþò òðåáîâàíèÿì äîñòîâåðíîñòè, óñòàíîâëåííûì â ðàçäåëå «Ïðî- âåðêà äîñòîâåðíîñòè êðèòåðèåâ ñòàíäàðòíîé êðèâîé»; – ðåçóëüòàò, ïîëó÷åííûé äëÿ ðàñòâîðà D (îòðèöàòåëüíûé êîíòðîëü) íå ïðåâûøàåò çíà÷å- íèÿ âåëè÷èíû, óêàçàííîé â èíñòðóêöèè ê èñ- ïîëüçóåìîìó ëèçàòó àìåáîöèòîâ èëè ìåíåå êîí- öåíòðàöèè ýíäîòîêñèíà, îïðåäåëÿåìîé èñïîëü- çóåìûì ìåòîäîì.
Ïîëó÷åííîå â îïûòå ñðåäíåå çíà÷åíèå êîí- öåíòðàöèè äîáàâëåííîãî ýíäîòîêñèíà ðàññ÷è- òûâàþò, âû÷èòàÿ èç ñðåäíåãî çíà÷åíèÿ êîíöåí- òðàöèè ýíäîòîêñèíà â ðàñòâîðå  (ñîäåðæàùåãî äîáàâëåííûé ýíäîòîêñèí) ñðåäíåå çíà÷åíèå êîíöåíòðàöèè ýíäîòîêñèíà â ðàñòâîðå À (ïðè åãî íàëè÷èè). Ñ÷èòàþò äîêàçàííûì, ÷òî èñïûòóåìûé ðàñ- òâîð íå ñîäåðæèò ìåøàþùèõ ôàêòîðîâ, åñëè â óñëîâèÿõ èñïûòàíèÿ èçìåðåííàÿ êîíöåíòðàöèÿ ýíäîòîêñèíà, äîáàâëåííîãî â èñïûòóåìûé ðàñ- òâîð, ñîñòàâëÿåò 50 – 200 % îò èçâåñòíîé êîí- öåíòðàöèè äîáàâëåííîãî ýíäîòîêñèíà. Åñëè îïðåäåëåííàÿ â îïûòå êîíöåíòðàöèÿ ýíäîòîêñèíà íå óêëàäûâàåòñÿ â çàäàííûå ðàìêè, äåëàþò çàêëþ÷åíèå, ÷òî èñïûòóåìûé ïðåïàðàò ñîäåðæèò ôàêòîðû, ìåøàþùèå ðåàêöèè.  ýòîì ñëó÷àå îïûò ìîæåò áûòü ïîâòîðåí â áîëüøåì ðàçâåäåíèè, âïëîòü äî ðàçâåäåíèÿ, ðàâíîãî ÌÄÐ. Ïîìèìî áîëüøåãî ðàçâåäåíèÿ èñïûòóåìî- ãî ïðåïàðàòà, âëèÿíèå ìåøàþùèõ ôàêòîðîâ ìî- æåò áûòü ïðåîäîëåíî ñîîòâåòñòâóþùåé îáðà- áîòêîé, íàïðèìåð, ôèëüòðàöèåé, íåéòðàëèçàöè- åé, äèàëèçîì èëè òåìïåðàòóðíûì âîçäåéñòâèåì. Âûáðàííûé ñïîñîá óäàëåíèÿ ìåøàþùèõ ôàêòîðîâ íå äîëæåí ïðèâîäèòü ê óìåíüøåíèþ êîíöåíòðàöèè áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ â èñïûòóåìîì ëåêàðñòâåííîì ñðåäñòâå, ïîýòîìó ïåðåä ïðîâåäåíèåì òàêîé îáðàáîòêè ê èñïûòóå- ìîìó ðàñòâîðó ñëåäóåò ñíà÷àëà äîáàâèòü ðàñ- òâîð ÊÑÝ èçâåñòíîé êîíöåíòðàöèè, ïîñëå ÷åãî ïîâòîðèòü àíàëèç «Ìåøàþùèå ôàêòîðû». Åñëè ïîñëå îáðàáîòêè âûáðàííûì ñïîñîáîì ðåçóëü- òàòû àíàëèçà îêàæóòñÿ óäîâëåòâîðèòåëüíûìè, òî èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî ìîæåò áûòü ïîäâåðãíóòî àíàëèçó íà ñîäåðæàíèå áàêòå- ðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ. Åñëè èñïûòóåìîå ëåêàðñòâåííîå ñðåäñòâî íåëüçÿ îñâîáîäèòü îò ìåøàþùèõ ôàêòîðîâ, îíî íå ìîæåò áûòü èññëåäîâàíî íà ïðåäìåò ñîäåð- æàíèÿ áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ ñ ïîìîùüþ äàííûõ ìåòîäîâ. Ïðîâåäåíèå èñïûòàíèÿ Ïðîöåäóðà èñïûòàíèÿ. Èñïûòàíèå ïðîâî- äÿò â ñîîòâåòñòâèè ñ ìåòîäèêîé, ïðèâåäåííîé â ðàçäåëå «Ìåøàþùèå ôàêòîðû». Ðåçóëüòàòû. Äëÿ ðàñòâîðà À â êàæäîé ïî- âòîðíîñòè îïðåäåëÿþò êîíöåíòðàöèþ ýíäîòîê- ñèíîâ, èñïîëüçóÿ ñòàíäàðòíóþ êðèâóþ, ïîëó- ÷åííóþ íà îñíîâàíèè ñåðèé ðàçâåäåíèé ÊÑÝ (Ðàñòâîð Ñ). Èñïûòàíèå ñ÷èòàþò äîñòîâåðíûì, åñëè ñî- áëþäåíû ñëåäóþùèå óñëîâèÿ: 1) ðåçóëüòàòû, ïîëó÷åííûå äëÿ ñòàíäàðòíîé êðèâîé (Ðàñòâîðû Ñ), ñîîòâåòñòâóþò òðåáîâà- íèÿì äîñòîâåðíîñòè, óñòàíîâëåííûì â ðàçäåëå «Ïðîâåðêà äîñòîâåðíîñòè êðèòåðèåâ ñòàí- äàðòíîé êðèâîé»; 2) îïðåäåëåííàÿ â îïûòå êîíöåíòðàöèÿ ýí- äîòîêñèíà, äîáàâëåííîãî ê ðàñòâîðó B ïîñëå âû÷èòàíèÿ çíà÷åíèÿ êîíöåíòðàöèè ýíäîòîêñè- íà, îïðåäåë¸ííîãî â ðàñòâîðå À, íàõîäèòñÿ â ïðåäåëàõ îò 50 äî 200 % îò èçâåñòíîé âåëè÷è- íû; 3) ðåçóëüòàò, ïîëó÷åííûé äëÿ ðàñòâîðà D (îòðèöàòåëüíûé êîíòðîëü), íå ïðåâûøàåò çíà÷å- íèÿ âåëè÷èíû, óêàçàííîé â èíñòðóêöèè ê èñ- ïîëüçóåìîìó ëèçàòó àìåáîöèòîâ èëè ìåíåå êîí- öåíòðàöèè ýíäîòîêñèíà, îïðåäåëÿåìîé èñïîëü- çóåìûì ìåòîäîì. Èíòåðïðåòàöèÿ ðåçóëüòàòîâ. Ëåêàðñò- âåííîå ñðåäñòâî ñ÷èòàþò âûäåðæàâøèì èñïû- òàíèå, åñëè îïðåäåëåííîå â ýêñïåðèìåíòå ñðåä- íåå çíà÷åíèå ñîäåðæàíèÿ áàêòåðèàëüíûõ ýíäî- òîêñèíîâ â ïîâòîðíîñòÿõ ðàñòâîðà À (ñ ó÷åòîì ðàçâåäåíèÿ è êîíöåíòðàöèè èñïûòóåìîãî ëåêàð- ñòâåííîãî ñðåäñòâà) ìåíåå çíà÷åíèÿ ïðåäåëüíî- ãî ñîäåðæàíèÿ áàêòåðèàëüíûõ ýíäîòîêñèíîâ, óêàçàííîãî â ôàðìàêîïåéíîé ñòàòüå. 258 201060009-2019 2.1.6.9. Ìèêðîáèîëîãè÷åñêèå èñïûòàíèÿ ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòîâ ïðèðîäíîãî ïðîèñõîæäåíèÿ äëÿ ïðèåìà âíóòðü è ñûðüÿ, èñïîëüçóåìîãî äëÿ èõ ïîëó÷åíèÿ 1. ÂÂÅÄÅÍÈÅ Ê ëåêàðñòâåííûì ðàñòèòåëüíûì ïðåïàðàòàì (ËÐÏ) îòíîñÿòñÿ ïðåïàðàòû, ïðîèçâåäåííûå èëè èçãîòîâëåííûå èç îäíîãî âèäà ëåêàðñòâåí- íîãî ðàñòèòåëüíîãî ñûðüÿ èëè íåñêîëüêèõ âè- äîâ òàêîãî ñûðüÿ è ðåàëèçóåìûå â ðàñôàñîâàí- íîì âèäå âî âòîðè÷íîé (ïîòðåáèòåëüñêîé) óïà- êîâêå (ïà÷êè, ïàêåòû, áðèêåòû è ïð.).